陈占昆
- 作品数：31 被引量：156H指数：7
- 供职机构：北京大学人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- TNF-α对类风湿关节炎滑膜细胞中MAPK的作用被引量：8
- 1999年
- 目的 观察 Ｔ Ｎ Ｆα作用于类风湿关节炎（ Ｒ Ａ） 滑膜细胞后滑膜细胞中 Ｍ Ａ Ｐ Ｋ 的激活。方法 ３ ～５ 代体外培养的 Ｒ Ａ 滑膜细胞加外源性 Ｔ Ｎ Ｆα刺激后，裂解细胞，收获蛋白，进行 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 分析。结果 Ｔ Ｎ Ｆα刺激后滑膜细胞中有多种蛋白发生酪氨酸磷酸化，其中以 Ｍ Ａ Ｐ Ｋ最明显， Ｍ Ａ Ｐ Ｋ 的激活呈时间和剂量相关。结论 Ｔ Ｎ Ｆα作用于 Ｒ Ａ 滑膜细胞伴有明显的 Ｍ Ａ Ｐ Ｋ 激活， Ｍ Ａ Ｐ Ｋ 可能是 Ｔ Ｎ Ｆα作用于 Ｒ Ａ 滑膜细胞后信号传导中的重要介质。
- 燕太强吕厚山药立波杨敏丁海明陈占昆蒋东芳
- 关键词：肿瘤坏死因子Α类风湿性关节炎MAPK
- 低分子量多肽2基因多态性与强直性脊椎炎表型的关系被引量：4
- 1999年
- 目的研究低分子量多肽（ｌｏｗｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔｐｅｐｔｉｄｅ，ＬＭＰ）基因多态性与强直性脊椎炎（ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ，ＡＳ）表型的关系。方法收集各种类型ＡＳ和单纯虹膜炎（Ａｃｕｔｅａｎｔｅｒｉｏｒｕｖｅｉｔｉｓ，ＡＡＵ）血标本１１８例。应用聚合酶链反应技术对正常人和患者进行ＨＬＡ－Ｂ２７检测以及ＬＭＰ２和ＬＭＰ７扩增，以ＣｆｏⅠ进行限制性酶切图谱分析。结果ＡＳ有ＡＡＵ病史患者ＬＭＰ２基因ＢＢ型频率较正常人以及ＡＳ患者明显增高（Ｐ＜０．０５），ＯＲ为３．７１。少年型ＡＳ与成年型ＡＳ以及单纯中心型ＡＳ与伴有外周关节炎（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＰＡ）的ＡＳ之间ＬＭＰ２基因型没有明显差异（Ｐ＞０．０５）。ＰＡ＋／ＡＡＵ＋与ＰＡ＋／ＡＡＵ－患者间存在显著差异（Ｐ＜０．０５），ＯＲ值为４．６３６。ＡＡＵ患者与正常人存在显著差异（Ｐ＜０．０５），ＯＲ值为５．８３。ＬＭＰ７基因多态性无明显差异。结论ＬＭＰ２基因多态性与有ＡＡＵ病史的ＡＳ以及单纯ＡＡＵ发病存在明显相关，而与ＡＳ发病年龄以及关节类型没有明显关系。
- 丁海明吕厚山蒋东芳陈占昆林剑浩王申五
- 关键词：强直性脊柱炎基因多态性
- 类风湿关节炎滑膜中促凋亡基因PDCD5的表达被引量：5
- 2008年
- 目的探讨类风湿关节炎（RA）发病机制中促凋亡基因PDCD5的表达与作用。方法采用实时定量聚合酶链反应（PCR）和Westem blot方法来检测RA滑膜组织中PDCD5在mRNA和蛋白水平的表达，免疫组织化学检测PDCD5在滑膜内的表达特征，用骨关节炎（OA）患者滑膜标本作对照。结果RA滑膜组织中PDCD5 mRNA的表达为1．3±0．9，与OA滑膜组织（4．3±2．7）相比低了约4倍（P〈0．05），二者之间的差异有统计学意义。Western blot检测结果表明与OA滑膜组织相比较，RA滑膜组织中PD—CD5蛋白水平的表达较低。免疫组织化学染色显示在RA滑膜组织与OA滑膜组织之间PDCD5蛋白有不同的表达特征，RA滑膜组织阳性染色强度明显弱于OA滑膜组织，其增生滑膜表现为分散的PDCD5阳性染色．主要集中在衬下层而不是衬里层，衬下层主要分布为成纤维样滑膜细胞，而在OA滑膜中PDCD5阳性染色主要集中在衬里层。衬下层PDCD5表达的细胞较少。结论在RA滑膜细胞凋亡过程中PDCD5表现为下调，至少部分地减少了RA滑膜组织凋亡。
- 陈占昆吕厚山王宁
- 关键词：关节炎类风湿滑膜PDCD5
- 程序化细胞死亡因子5过表达促进雷公藤内醇酯诱导的类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡被引量：6
- 2008年
- 目的:探讨程序化细胞死亡因子5(progrmmed cell death5,PDCD5)过表达对雷公藤内醇酯(triptolide)诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(rheumatiod arthritis fibroblast-likes synoviocytes,RAFLS)凋亡的作用。方法:体外分离培养RAFLS进行腺病毒Ad-PDCD5(含有PDCD5基因的腺病毒载体)的转染,分别用免疫印迹法和流式细胞术检测Ad-PDCD5转染后的RAFLS中PDCD5蛋白表达及经雷公藤内醇酯处理后的PDCD5蛋白过表达的RAFLS的凋亡率。结果:用感染复数(multiplicity of infection,MOI)分别为50、100、200和300的Ad-PDCD5感染RAFLS36h后,PDCD5蛋白表达水平呈现剂量依赖性增加。未经雷公藤内醇酯处理的非感染组、Ad-null组(不含目的基因的空载体)和Ad-PDCD5组RAFLS的凋亡之间差异无统计学意义,经雷公藤内醇酯处理后,其RAFLS的凋亡率分别为(22.51±3.87),(28.77±12.97)和(48.87±12.69)。表明此腺病毒体系能够有效地使PDCD5蛋白过表达,在RAFLS中,单独使用雷公藤内醇酯或者单独转染PDCD5都不能明显地诱导细胞凋亡,但过表达PDCD5再进行雷公藤内醇酯处理可以诱导细胞凋亡。结论:腺病毒Ad-PDCD5转染使PDCD5过表达,从而能够促进雷公藤内醇酯诱导的RAFLS凋亡,为类风湿关节炎的临床治疗提供了一个可能的干预靶点。
- 陈占昆王宁吕厚山
- 关键词：PDCD5类风湿滑膜
- 类风湿关节炎滑膜细胞中白三烯B4诱导肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1β mRNA表达的测定被引量：2
- 2006年
- 目的:探讨类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜细胞中白三烯B4(LTB4)诱导肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)mRNA表达的定量测定方法。方法:RA患者的滑膜细胞进行原代培养,加入外源性LTB4或者在LIT存在的情况下,分别加入MK-886(5-脂氧合酶激动蛋白抑制剂)和苯丁抑制素(Bestatin,LTA4水解酶抑制剂),采用TaqMan PCR来定量检测滑膜细胞中TNF-α和IL-1βmRNA水平的表达。结果:原代培养的RA滑膜细胞的基本TNF-α和IL-1βmRNA表达水平(TNF-α/GAPDH和IL-1β/GAPDH),分别为0.02±0.00和0.16±0.01。当加入外源性的LTB410-9和10-8mol/L后,LTB410-9mol/L使TNF-αRNA水平的表达增高了7倍,LTB410-8mol/L使TNF-αmRNA水平的表达增高了15倍,LTB410-8mol/L使IL-1βmRNA水平增高了1倍。而加入LIT刺激内源性的LTB4增高后,使TNF-α和IL-1βmRNA水平分别增高了145倍和12倍。在LIT存在的情况下,加入LTB4合成抑制剂MK-886(1μmol/L,10μmol/L)后,使TNF-αmRNA水平的表达分别下降15%和66%,IL-1βm RNA水平的表达分别下降了41%和71%。1100mg/L苯丁抑制剂使TNF-α和IL-1βmRNA水平表达分别降低了86%和79%。结论:RA滑膜细胞中LTB4可诱导TNF-α和IL-1βmRNA水平的表达,并有助于定量测定mRNA表达水平。
- 陈占昆吕厚山
- 关键词：白三烯B4肿瘤坏死因子Α白细胞介素1类风湿
- 利多卡因、布比卡因对关节软骨细胞活性的对比研究被引量：2
- 2018年
- 目的:通过模拟类似人体关节腔生理环境,制作关节软骨培养模型,评估利多卡因、布比卡因对软骨细胞毒性的时间及浓度效应,以及软骨细胞膜对软骨细胞的保护效应。方法:取女性骨性关节炎病人膝关节置换术中切除的残余正常股骨外髁关节软骨,用环钻取直径4 mm的圆形新鲜全层厚度正常软骨,放入含2.5 ml培养基的24孔板中培养,切除正常软骨表面1 mm制作损伤模型。使用通过不同浓度的利多卡因和布比卡因以及不同作用时间分别浸泡处理关节软骨,阴性对照组均为0.9%生理盐水,然后测定关节软骨的细胞活性的变化,评估利多卡因、布比卡因对正常及损伤关节软骨的细胞毒性作用。结果:浓度效应组中药物作用时间固定为1 h,1%和2%利多卡因作用下的软骨细胞活性分别为80.9±1.3%和72.1±1.0%。0.25%和0.5%布比卡因细胞活性分别为78.4%±2.5%和70.4±1.0%,各组间P<0.05。时间效应组中经过1%利多卡因作用30、60、120 min后正常软骨细胞活性分别为79.1±1.5%、69.8±3.1%、56±10.7%,损伤组分别为76.5±1.5%、66.9±3.9%、52.2±10.7%。其中正常组与损伤组在30 min有统计学差异(P<0.05)。而经0.25%布比卡因分别作用30、60、120 min后,正常软骨组细胞活性为88.2±4.7%、78.7±3.6%、63.7±3.7%,损伤组则为79.7±2.2%、71.4±4.1%、56.5±6.5%,其中正常组与损伤组在30及60 min有统计学差异(P<0.05)。结论:仿生理状态下生物学特性和结构均完整的关节软骨经利多卡因、布比卡因处理后,随着作用时间延长和浓度增加,软骨细胞的活性明显降低,且利多卡因较布比卡因毒性低。关节软骨表膜对软骨细胞提供保护作用。
- 雷昌斌王东曹锡文唐新文陈占昆
- 关键词：软骨细胞利多卡因布比卡因
- 携带HLA-B2704基因转基因小鼠技术的建立被引量：4
- 2002年
- 应用显微注射法制备携带HLA B2 70 4基因的转基因小鼠 .对 2 86只昆明小鼠激素注射进行超排卵 ,采集受精卵 ,将含HLA B2 70 4基因的基因组DNA片段 (简称HLA B2 70 4DNA)显微注射到受精卵原核内 ,把注射存活的两细胞期受精卵移入假孕鼠的输卵管内使其发育产生后代 .用PCR方法进行F0代仔鼠及F1代仔鼠的转基因整合的检测 .利用RT PCR检测阳性鼠中的HLA B2 70 4转基因的表达 .采集了 84 11个卵 ,可注射卵 6 6 0 9个 ,其中注射存活的两细胞期受精卵 4 2 77个 ,卵的注射存活率为 6 4 7%.将卵移入 15 3只假孕鼠 ,其中 2 6只怀孕产仔 ,存活 10 1只 .在 10只F0代仔鼠基因组中有HLA B2 70 4基因整合 ,整合率为 9 9%.转基因阳性鼠F0代之间以及与正常鼠之间进行交配 ,产生的F1代仔鼠 78只 ,其中 15只为阳性 .阳性鼠的皮肤、结肠、睾丸和脾脏组织中均有HLA B2 70 4转基因mRNA的表达 .在HLA B2 70 4转基因阳性小鼠中 ,6只小鼠皮肤出现脱毛 ,1只小鼠的足部及足趾明显红肿 ,2只在脱毛同时明显畏光 ,1只出现腹泻 .结果表明 ,成功地建立了HLA B2 70 4的转基因小鼠技术 ,该小鼠类似强直性脊柱炎的小鼠模型 .
- 陈占昆吕厚山蒋东芳王东艾京丁海明王申五
- 关键词：转基因小鼠疾病模型
- hβ2m/HLA-B2704双转基因小鼠的制备及β2m对HLA-B2704表达的影响
- 2002年
- 制备hβ2m HLA B2 70 4双转基因小鼠 ,研究hβ2m对HLA B2 70 4表达的影响 .通过hβ2m转基因小鼠和HLA B2 70 4转基因小鼠交配 ,出生动物及后代经PCR初步筛选 ,采用Southern杂交对经PCR初步筛选的hβ2m HLA B2 70 4双转基因阳性小鼠基因组DNA标本作进一步鉴定 .阳性者进行RT PCR和流式细胞光度术检测其在mRNA和蛋白水平的表达 .hβ2m阳性小鼠和HLA B2 70 4阳性小鼠交配 ,生仔鼠 6 7只 ,其中 2 8只仔鼠同时整合hβ2m和HLA B2 70 4基因 .Southern杂交证实 ,阳性鼠同时都含有hβ2m和HLA B2 70 4基因 .阳性小鼠的皮肤、结肠、睾丸和脾脏组织中均有HLA B2 70 4和hβ2m基因的mRNA表达 ,其外周血淋巴细胞膜上HLA B2 70 4基因的蛋白表达为 35 87% ,在HLA B2 70 4单转基因小鼠外周血淋巴细胞膜上HLA B2 70 4基因的蛋白表达为 7 87% (Histogramsta tistics) .成功地制备了hβ2m HLA B2 70 4双转基因小鼠 .在hβ2m HLA B2 70 4双转基因小鼠的外周血淋巴细胞膜上 ,HLA B2 70 4基因在蛋白水平表达较高 ,而在HLA B2 70 4单转基因小鼠中则表达不明显 .hβ2m可与HLA B2 70 4重链分子结合 。
- 陈占昆吕厚山王东蒋东芳艾京王申五
- 关键词：转基因小鼠强直性脊柱炎
- 白三烯B4对人破骨细胞直接分化和激活功能的实验研究被引量：4
- 2005年
- 目的探讨白三烯(LT)B4能否不依赖细胞核因子资B受体激活剂配体(RANKL)直接促进人破骨细胞的分化和激活。方法阳性对照组用25ng/ml巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和30ng/mlsRANKL来诱导人外周血单核细胞的培养,实验组用25ng/mlM-CSF和10-9、10-8、10-7mol/LLTB4来诱导。通过抗酒石酸磷酸酶(TRAP)染色及10mm×10mm玻片上多核性TRAP染色(+)的破骨细胞样细胞计数,来确定LTB4的直接分化作用,并与RANKL的作用比较。通过甲苯胺蓝染色10mm×10mm牛皮质骨片上的骨质吸收陷窝并计数,来确定LTB4直接功能激活作用,并与RANKL的作用比较。结果当M-CSF存在时,LTB4能够直接分化人外周血单核细胞为破骨细胞样细胞,并能激活其骨质吸收功能。且随LTB4浓度的增加而增强,但要弱于RANKL。结论LTB4对人破骨细胞有不依赖RANKL的直接分化和激活作用。
- 姜军吕厚山林剑浩蒋东芳陈占昆黄建
- 关键词：白三烯B4人外周血单核细胞细胞核因子ΚB破骨细胞样细胞甲苯胺蓝染色受体激活剂
- 细胞因子诱导破骨细胞分化的2种实验模型的建立
- 2006年
- 目的探讨体外从单个核细胞诱导分化形成破骨细胞的2种不同方法,建立研究细胞因子对破骨细胞分化作用的2种不同实验模型。方法外周血单个核细胞在10-8mol/L LTB4和25μg/LM-CSF刺激下,经过2周的直接诱导分化;外周血单个核细胞与RAFLs共培养,加入10-8mol/L LTB4和25μg/L M-CSF,经过3周的间接诱导分化,用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鉴定破骨细胞样细胞(OCL)。结果通过直接分化和间接分化均可形成破骨细胞样细胞。结论2种不同实验模型能分别用于研究细胞因子对破骨细胞的直接和间接分化作用。
- 蒋东芳吕厚山林剑浩姜军陈占昆
- 关键词：单核细胞破骨细胞细胞因子
