蒋东芳
- 作品数：15 被引量：38H指数：4
- 供职机构：北京大学人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 自发性炎性疾病双转基因小鼠的研究被引量：2
- 2002年
- 目的 通过建立强直性脊柱炎HLA B2 70 4和hβ2 m双转基因动物模型 ,证实HLA B2 70 4和hβ2 m基因在双转基因小鼠自发性炎性疾病发病过程中的作用 ,为研究B2 7相关性疾病的病因学、预防和治疗提供有力的工具。 方法 将HLA B2 70 4和hβ2 m转基因阳性小鼠交配后出生的子代 ,应用PCR、斑点杂交、Southern杂交、RT PCR、流式细胞术和免疫组织化学等方法进行筛选鉴定和表达检测。同时隔日观察小鼠的发病情况 ,发病鼠行HE染色观察病理变化。 结果 有 8只高拷贝双转基因小鼠 2周左右出现皮肤病变 ,关节炎和趾甲变化等自发性炎性疾病表现 ,正常小鼠、B2 7单转基因小鼠和HLA B2 7/hβ2 m双转基因小鼠流式细胞计的检测结果分别为 0 6 3%、7 87%、35 87% ,双转基因小鼠的细胞膜表面可见HLA B2 70 4高表达 ,而在B2 7单转基因小鼠表达不明显。 结论 HLA B2 70 4重链可诱发转基因小鼠发生自发性炎性疾病 ,hβ2 m可与B2 7形成稳定的复合体 ,从而稳定和增强HLA B2 70 4在细胞膜表面的表达。
- 王东吕厚山张斌陈占昆蒋东芳艾京
- 关键词：强直性脊柱炎动物模型
- 人β_2m转基因小鼠的制备、筛选及鉴定被引量：3
- 2001年
- 目的 :制备人β2 m转基因小鼠 ,研究HLA B2 70 4的表达。方法 :应用显微注射将人 β2 m基因注入C5 7BL/6×昆明鼠和昆明鼠×昆明鼠F1代受精卵 ,出生动物及其后代经PCR筛选 ,采用斑点杂交和Southern杂交对阳性鼠基因组DNA标本行进一步鉴定和测定整合拷贝数 ,利用RT PCR检测阳性鼠中人 β2 m转基因的表达。结果 :6只原代仔鼠及 7只它们的下一代 (F1)带有人 β2 m基因。由微注射基因后移卵出生的 86只小鼠中 ,C5 7BL/6×昆明鼠杂交仔鼠 35只 ,其中 4只阳性 (11.4% ) ,昆明鼠×昆明鼠杂交仔鼠 5 1只 ,其中 2只阳性 (3.9% ) ,含有人 β2 m基因的原代鼠×昆明鼠杂交仔鼠 2 0只 ,其中 7只阳性。整合的转基因均为单拷贝。Southern杂交证实上述阳性鼠确有转基因整合。阳性鼠的皮肤、结肠、睾丸和脾脏组织中均有人 β2 m转基因mRNA的表达。结论 :在转基因动物制备中 ,C5 7BL/6×昆明鼠F1代明显优于昆明鼠×昆明鼠F1代。与人HLA B2 70 4基因相比 ,人 β2 m基因不易整合 ,其整合率与整合拷贝数均较低。得到的人 β2 m转基因小鼠能够将人 β2 m基因传给下一代并可与人HLA B2 70 4转基因鼠交配。
- 陈占昆吕厚山艾京蒋东芳丁海明王东王申五冯传汉
- 关键词：转基因小鼠基因组
- 白三烯促进类风湿关节炎患者滑膜细胞的IL-1β和TNF-αmRNA表达被引量：4
- 2005年
- 目的探讨在类风湿关节炎(RA)患者滑膜细胞中,白三烯B4(LTB4)对肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA表达的作用。方法在RA患者滑膜细胞培养体系中,加入LTB4、脂多糖(LPS)、MK-886(5-脂氧化酶激动蛋白的抑制剂),采用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测RA患者滑膜细胞中TNF-α和IL-1βmRNA表达的改变。结果原代培养的RA滑膜细胞表达基本的IL-1β和TNF-α[IL-1β/糖酵解甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)和TNF-α/GAPDH],分别为0.16±0.09和0.02±0.00(n=6)。加入外源性的LTB410-9～10-8mol/L后,使TNF-α和IL-1β的mRNA表达显著增高。LPS刺激内源性的LTB4增高后,也使IL-1β和TNF-αmRNA表达显著增高。在LPS存在时,MK-8861μmol/L和10μmol/L使TNF-α的mRNA表达分别下降了15%和66%(n=7,P<0.05),使IL-1βmRNA表达下降了41%和71%(n=6,P<0.01)。结论LTB4可以调节RA滑膜细胞TNF-α和IL-1βmRNA的表达。
- 许少华吕厚山林剑浩陈占昆蒋东芳
- 关键词：白三烯类风湿关节炎滑膜细胞白细胞介素-1Β
- HLA-B2704转基因小鼠的银屑病样皮肤病
- 2001年
- 目的 通过对HLA B2 70 4转基因小鼠的皮肤疾病表型的研究 ,证实HLA B2 70 4在银屑病样皮肤病发病中的作用。方法 应用聚合酶链式反应 (PCR)、斑点杂交和Southern杂交对转基因小鼠进行筛选和鉴定 ,并用图象处理测定其整合拷贝数 ,发病鼠行皮肤HE染色和免疫组织化学染色检测病理和HLA B2 70 4的表达。结果 有 6只转基因阳性鼠出现明显的皮肤银屑病样改变 ,皮肤HE染色可见表皮明显增生、角化 ,免疫组织化学表皮细胞内可见HLA B2 70 4高表达。结论 HLA B2 70
- 王东吕厚山丁海明张斌陈占昆蒋东芳艾京
- 关键词：关节炎牛皮癣HLA-B27抗原小鼠转基因
- HLA-B2704转基因小鼠自发性前葡萄膜炎被引量：4
- 2000年
- 目的 观察HLA B2 70 4转基因小鼠葡萄膜炎发病情况和糖皮质激素治疗的初步疗效。方法 应用PCR、斑点杂交、Southern杂交、免疫组织化学和流式细胞术进行阳性动物筛选和表达检测。隔日观察眼部症状 ,可疑动物行眼底镜以及裂隙灯检查 ,眼球组织切片行HE染色 ,房水行细胞计数和分类统计。结果 部分HLA B2 70 4转基因阳性鼠出现明显畏光 ,眼科检查发现角膜后沉淀。病理发现角膜上皮细胞增生 ,排列紊乱。房水总细胞数增加 ,炎性细胞与总细胞数之比为9 2 4%。正常对照比值为 0 75 %。 χ2 检验显示二者差异存在显著性 ,P <0 0 5。地塞米松治疗可以减轻症状 ,停药后症状加重。符合前葡萄膜炎诊断。结论 首次在转基因小鼠观察到类似人的HLA B2 7相关性前葡萄膜炎。
- 丁海明吕厚山蒋东芳陈占昆
- 关键词：转基因小鼠HLA-B27抗原
- 人类白细胞抗原B2704基因在转基因小鼠中的整合与表达被引量：1
- 2005年
- 目的研究人类白细胞抗原(HLA)-B2704基因在转基因小鼠中的整合与表达。方法应用显微注射技术将HLA-B2704基因注入C57BL/6×昆明鼠和昆明鼠×昆明鼠F0代受精卵,出生动物进行聚合酶链反应(PCR)筛选及Southern杂交鉴定。阳性者进行反转录(RT)-PCR和流式细胞光度术检测其在mRNA和蛋白水平的表达。结果101只F0代仔鼠中,10只F0代仔鼠基因组中有HLA-B2704基因整合。其中昆明鼠×昆明鼠F0代3只,整合率为4.7%,C57BL/6×昆明鼠F0代7只,整合率为18.9%(字2检验,P<0.05)。阳性小鼠的皮肤、结肠、睾丸和脾脏组织中均有HLA-B2704基因的mRNA水平表达,其外周血淋巴细胞膜上HLA-B2704基因的蛋白表达为7.87%(直方图统计表,5%以上为阳性)。结论尽管受精卵的注射成活率差异无统计学意义,在注射浓度相同的情况下,含有C57BL/6基因背景的受精卵更易整合外源基因,而单纯昆明鼠的受精卵不易接受外源基因。C57BL/6×昆明鼠F0代比单纯昆明鼠F0代更适合于转基因动物的制备。HLA-B2704的重链分子与小鼠茁2微球蛋白结合的复合物不稳定,不易于在细胞表面表达。
- 陈占昆吕厚山王东蒋东芳丁海明
- 关键词：人类白细胞抗原转基因小鼠流式细胞光度术细胞表面表达X^2检验
- 携带HLA-B2704基因转基因小鼠技术的建立被引量：4
- 2002年
- 应用显微注射法制备携带HLA B2 70 4基因的转基因小鼠 .对 2 86只昆明小鼠激素注射进行超排卵 ,采集受精卵 ,将含HLA B2 70 4基因的基因组DNA片段 (简称HLA B2 70 4DNA)显微注射到受精卵原核内 ,把注射存活的两细胞期受精卵移入假孕鼠的输卵管内使其发育产生后代 .用PCR方法进行F0代仔鼠及F1代仔鼠的转基因整合的检测 .利用RT PCR检测阳性鼠中的HLA B2 70 4转基因的表达 .采集了 84 11个卵 ,可注射卵 6 6 0 9个 ,其中注射存活的两细胞期受精卵 4 2 77个 ,卵的注射存活率为 6 4 7%.将卵移入 15 3只假孕鼠 ,其中 2 6只怀孕产仔 ,存活 10 1只 .在 10只F0代仔鼠基因组中有HLA B2 70 4基因整合 ,整合率为 9 9%.转基因阳性鼠F0代之间以及与正常鼠之间进行交配 ,产生的F1代仔鼠 78只 ,其中 15只为阳性 .阳性鼠的皮肤、结肠、睾丸和脾脏组织中均有HLA B2 70 4转基因mRNA的表达 .在HLA B2 70 4转基因阳性小鼠中 ,6只小鼠皮肤出现脱毛 ,1只小鼠的足部及足趾明显红肿 ,2只在脱毛同时明显畏光 ,1只出现腹泻 .结果表明 ,成功地建立了HLA B2 70 4的转基因小鼠技术 ,该小鼠类似强直性脊柱炎的小鼠模型 .
- 陈占昆吕厚山蒋东芳王东艾京丁海明王申五
- 关键词：转基因小鼠疾病模型
- hβ2m/HLA-B2704双转基因小鼠的制备及β2m对HLA-B2704表达的影响
- 2002年
- 制备hβ2m HLA B2 70 4双转基因小鼠 ,研究hβ2m对HLA B2 70 4表达的影响 .通过hβ2m转基因小鼠和HLA B2 70 4转基因小鼠交配 ,出生动物及后代经PCR初步筛选 ,采用Southern杂交对经PCR初步筛选的hβ2m HLA B2 70 4双转基因阳性小鼠基因组DNA标本作进一步鉴定 .阳性者进行RT PCR和流式细胞光度术检测其在mRNA和蛋白水平的表达 .hβ2m阳性小鼠和HLA B2 70 4阳性小鼠交配 ,生仔鼠 6 7只 ,其中 2 8只仔鼠同时整合hβ2m和HLA B2 70 4基因 .Southern杂交证实 ,阳性鼠同时都含有hβ2m和HLA B2 70 4基因 .阳性小鼠的皮肤、结肠、睾丸和脾脏组织中均有HLA B2 70 4和hβ2m基因的mRNA表达 ,其外周血淋巴细胞膜上HLA B2 70 4基因的蛋白表达为 35 87% ,在HLA B2 70 4单转基因小鼠外周血淋巴细胞膜上HLA B2 70 4基因的蛋白表达为 7 87% (Histogramsta tistics) .成功地制备了hβ2m HLA B2 70 4双转基因小鼠 .在hβ2m HLA B2 70 4双转基因小鼠的外周血淋巴细胞膜上 ,HLA B2 70 4基因在蛋白水平表达较高 ,而在HLA B2 70 4单转基因小鼠中则表达不明显 .hβ2m可与HLA B2 70 4重链分子结合 。
- 陈占昆吕厚山王东蒋东芳艾京王申五
- 关键词：转基因小鼠强直性脊柱炎
- 人β_2m转基因小鼠的制备及鉴定(英文)被引量：2
- 2001年
- 制备人 β2m转基因小鼠 ,研究HLA B2 70 4基因的表达 .应用显微注射将人 β2m基因注入C5 7BL 6×昆明鼠和昆明鼠×昆明鼠F1代受精卵 .出生动物及其后代经PCR筛选 ,采用斑点杂交和Southern杂交对阳性鼠基因组DNA标本进行进一步鉴定和测定整合拷贝数 ,利用RT PCR检测阳性鼠中人 β2m转基因的表达 .6只原代仔鼠及 7只它们的下一代鼠 (F1)带有人 β2m基因 .由微注射基因后移卵出生的 86只小鼠中 ,C5 7BL 6×昆明鼠杂交仔鼠 35只 ,其中 4只阳性 (11 4 % ) ,昆明鼠×昆明鼠杂交仔鼠 5 1只 ,其中 2只阳性 (3 9% ) ,含有人 β2m基因的原代鼠×昆明鼠杂交仔鼠 2 0只 ,其中 7只阳性 .整合的转基因均为单拷贝 .Southern杂交证实上述阳性鼠确有转基因整合 .阳性鼠的皮肤、结肠、睾丸和脾脏组织中均有人β2m转基因mRNA的表达 .在转基因动物制备中 ,C5 7BL 6×昆明鼠F1代明显优于昆明鼠×昆明鼠F1代 .与人HLA B2 70 4基因相比 ,人 β2m基因不易整合 ,其整合率与整合拷贝数均较低 .得到的人 β2m转基因小鼠能够将人 β2m基困传给下一代 ,并可与人HLA B2 70 4转基因鼠交配 。
- 陈占昆吕厚山艾京蒋东芳丁海明王东冯传汉王申五
- 关键词：转基因小鼠
- 白三烯B4对人破骨细胞直接分化和激活功能的实验研究被引量：4
- 2005年
- 目的探讨白三烯(LT)B4能否不依赖细胞核因子资B受体激活剂配体(RANKL)直接促进人破骨细胞的分化和激活。方法阳性对照组用25ng/ml巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和30ng/mlsRANKL来诱导人外周血单核细胞的培养,实验组用25ng/mlM-CSF和10-9、10-8、10-7mol/LLTB4来诱导。通过抗酒石酸磷酸酶(TRAP)染色及10mm×10mm玻片上多核性TRAP染色(+)的破骨细胞样细胞计数,来确定LTB4的直接分化作用,并与RANKL的作用比较。通过甲苯胺蓝染色10mm×10mm牛皮质骨片上的骨质吸收陷窝并计数,来确定LTB4直接功能激活作用,并与RANKL的作用比较。结果当M-CSF存在时,LTB4能够直接分化人外周血单核细胞为破骨细胞样细胞,并能激活其骨质吸收功能。且随LTB4浓度的增加而增强,但要弱于RANKL。结论LTB4对人破骨细胞有不依赖RANKL的直接分化和激活作用。
- 姜军吕厚山林剑浩蒋东芳陈占昆黄建
- 关键词：白三烯B4人外周血单核细胞细胞核因子ΚB破骨细胞样细胞甲苯胺蓝染色受体激活剂
