郭琳洁
- 作品数：20 被引量：96H指数：6
- 供职机构：中山大学中山眼科中心更多>>
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- 嵌合型bcl-2反义寡核苷酸对体外培养葡萄膜黑色素瘤细胞存活的影响被引量：2
- 2002年
- 目的 探讨抗凋亡基因 bcl- 2表达对体外培养的葡萄膜黑色素瘤 (uveal melanoma,UM)细胞存活的影响。 方法 通过阳离子脂质体将 bcl- 2反义寡核苷酸 (antisense oligodeoxynucleotides,AS-ODN)转导原代培养 UM细胞 ,应用噻唑蓝 (3,- 4 ,5 Dimethyliazol - 2 ,5 diphenyl tetrazolium bromide,MTT)法测定 bcl- 2 AS- ODN对肿瘤细胞增生的抑制作用 ;提取肿瘤细胞 DNA,检测肿瘤细胞的凋亡情况 ;利用逆转录聚合酶链式反应 (reverse transcription polymerase chain reaction,RT- PCR)和蛋白印迹(Westernblot)技术 ,从 RNA及蛋白水平测定 bcl- 2 AS- ODN对肿瘤细胞 bcl- 2表达的影响。 结果 bcl-2 AS- ODN对 UM细胞的增生有明显抑制作用 ,并且其抑制作用随浓度的增高而增强。bcl- 2 AS- ODN在m RNA及蛋白水平对 bcl- 2基因表达产生明显抑制作用 ,而正义寡核苷酸 (sense oligodeoxynucleotides,S-ODN)对肿瘤细胞的增生则无明显的抑制作用。 结论 bcl- 2 AS- ODN在转录和翻译水平下调 bcl- 2基因表达 ,抑制 UM细胞增生并诱导其凋亡。
- 郭琳洁吴中耀张胜毛羽翔郑湖玲郑健樑
- 关键词：葡萄膜肿瘤黑色素瘤反义寡核苷酸BCL-2基因
- 葡萄膜黑色素瘤病理学特征与预后的关系被引量：21
- 2002年
- 目的 探讨葡萄膜黑色素瘤病理学特征对患者预后估计的意义。方法 按改良Callender分类 ,对 115例病理样本常规病理形态检查 ,临床随访 ,应用SPSS统计软件包 ,进行生存曲线及回归分析。结果 葡萄膜黑色素瘤患者的平均生存时间分别为 ,类上皮型肿瘤 3 5 6± 2 1 5月 ,混合型肿瘤 63 7± 3 7 0月 ,梭形细胞型肿瘤 69 5± 3 6 5月 ,类上皮型肿瘤患者生存时间较短 ;患者生存时间与肿瘤的巩膜接触最大径 ,肿瘤的最大高度及肿瘤的浸润深度呈负相关。结论 类上皮型葡萄膜黑色素瘤恶性程度较其他两型高 。
- 郭琳洁吴中耀张胜陈家祺艾思明郑湖玲
- 关键词：葡萄膜黑色素瘤病理学特征预后
- 葡萄膜黑色素瘤对化疗药物的敏感性及影响机制的研究
- 2005年
- 目的研究探讨葡萄膜黑色素瘤体外化疗对6种药物的敏感性及其影响机制。方法葡萄膜黑色素瘤体外原代与传代培养,抗HMB45免疫组织化学估计肿瘤细胞纯度,MTT法检测对5-氟脲嘧啶、顺铂、噻替哌、阿霉素、长春新碱和足叶乙甙6种化疗药物的敏感性,蛋白印迹法检测耐药基因bcl-2和LRP的表达,分析其表达程度与耐药性的关系。结果体外药敏试验显示6种化疗药物临床常规剂量,对肿瘤细胞的抑制率均不能达到50%,蛋白印迹结果显示bcl-2在体外培养的肿瘤细胞中均有较高表达,而LRP表达在不同类型的肿瘤细胞中不同,表达的高低与耐药程度呈正相关。结论葡萄膜黑色素瘤体外对临床常用6种化疗药物具有较高耐受性,LRP和bcl-2均与其天然耐药性有关,LRP可能起主要作用。
- 郭琳洁吴中耀徐霖陈家祺艾思明张胜
- 关键词：葡萄膜黑色素瘤多药耐药体外培养
- 反义bcl-2寡核苷酸对体外培养的葡萄膜黑色素瘤细胞多药耐药性的影响被引量：9
- 2003年
- 目的 探讨体外培养的葡萄膜黑色素瘤细胞对不同化疗药物的敏感性 ,并通过反义bcl 2寡核苷酸 (bcl 2antisenseoligodeoxynucleotide ,bcl 2AS ODN)特异阻断bcl 2基因的表达逆转肿瘤耐药性。方法 原代培养葡萄膜黑色素瘤细胞 ,采用噻唑蓝染色法测定肿瘤细胞对不同浓度的 5 氟尿嘧啶、噻替哌、顺铂、阿霉素、长春新碱和氮烯咪胺体外敏感性 ;通过阳离子脂质体导入bcl 2AS ODN ,阻断bcl 2基因的表达 ,利用免疫组化及Westenblot法测定肿瘤细胞bcl 2的表达情况 ,并根据多药相互作用原理测定肿瘤细胞对化疗药物敏感性。结果 葡萄膜黑色素瘤对不同种类的化疗药物均有不同程度的抗药性。bcl 2AS ODN可明显抑制bcl 2基因的表达 ,并随浓度升高抑制作用增强。bcl 2AS ODN与各种化疗药物呈协同作用 ,能够增加化疗药物对肿瘤细胞的杀伤作用。结论 所选 6种化疗药物在临床常用剂量范围对葡萄膜黑色素瘤细胞毒性作用较小 ,葡萄膜黑色素瘤细胞的多药耐药性与bcl 2基因的高表达有关 ,bcl 2AS ODN能够部分逆转肿瘤细胞的多药耐药性。
- 郭琳洁吴中耀张胜郑建樑郑湖玲
- 关键词：葡萄膜肿瘤多药抗药性反义寡核苷酸类肿瘤细胞培养
- 人葡萄膜黑色素瘤的细胞培养及生物学特性被引量：3
- 2002年
- 郑健樑郭琳洁吴中耀张洁冯官光
- 关键词：葡萄膜黑色素瘤细胞培养生物学特性眼肿瘤
- 牛pcDNA_3-bFGF真核表达重组体的构建与鉴定被引量：4
- 2002年
- 【目的】构建并鉴定牛碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)基因真核表达质粒。【方法】设计含EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的bFGFcDNA引物 ,采用PCR法从原核pET3c bFGF中扩增bFGFcDNA片段 ,纯化PCR产物 ,EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切并连接至 pcDNA3 ,转化感受态大肠杆菌DH5α ,酶切鉴定阳性重组子 ,并进行序列测定。【结果】经PCR能扩增出 4 83bp的片段 ,与预期片段大小相符 ,构建的重组体经酶切鉴定能切出插入片段 ,测序结果与预期序列完全一致。【结论】成功构建了牛bFGF真核表达重组体bFGF pcDNA3 。
- 徐霖曹开源崔蕴霞郭琳洁张胜宁波郑振声
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子基因扩增
- 牛bFGF-pcDNA_3在人脐静脉内皮细胞中的表达及鉴定
- 2002年
- 目的 :研究牛bFGF -pcDNA3 在体外培养人脐静脉内皮细胞中的表达与活性 ,及对该细胞生物学特性的影响。方法 :脂质体法将bFGF -pcDNA3 真核表达载体转染体外培养的人脐静脉内皮细胞 ,经G4 18筛选阳性克隆。通过免疫细胞化学法检测bFGF的表达部位及Ⅷ因子相关抗原的表达。应用化学发光Westernblotting法检测bFGF在转染细胞与未转染细胞中的表达。绘制细胞的生长曲线并计算倍增时间 ,采用MTT法对bFGF的生物活性进行估计。结果 :bFGF -pcDNA3 转染人脐静脉内皮细胞后 ,细胞呈梭形者增多。免疫细胞化学证实转染前后细胞均为血管内皮来源细胞 ,转染与未转染细胞均在胞浆内表达bFGF。Westernblotting证实细胞转染前后均表达 17kDbFGF ,但转染后表达量增高 ,细胞生长曲线上移 ,倍增时间缩短。MTT法证实转染细胞产生的bFGF其生物学活性约相当于持续添加外源性bFGF 5 71 4ng/L。结论 :转染bFGFcDNA的人脐静脉内皮细胞能在体外增殖 ,并具有表达与分泌活性bFGF的功能。bFGF -pcDNA3 可引起内源性bFGF表达增高 ,对血管内皮细胞产生相应的生物学活性。
- 曹开源崔蕴霞徐霖郭琳洁张胜宁波
- 关键词：成纤维细胞生长因子脐静脉内皮细胞
- 中国人前列腺特异膜抗原基因真核表达载体的构建和序列测定被引量：1
- 2004年
- 目的 :构建中国人前列腺特异膜抗原 (PSMA)基因编码区序列的真核表达载体并进行序列测定。方法 :从前列腺癌组织中提取总RNA ,采用RT -PCR技术扩增前列腺特异膜抗原的基因编码区序列 ,将序列定向克隆至真核表达载体pcDNA3 0 ,并进行序列测定。结果 :本实验所扩增的中国人PSMA基因编码区序列与Israeli等报道的序列同源性为 99 7% ,目的基因与载体正确连接。结论 :成功克隆了PSMA编码区序列 ,并构建了其真核表达载体 ,为PSMA基因修饰的树突状细胞疫苗的前列腺癌生物治疗奠定基础。
- 曹开源戴淑琴徐霖中袁广卿黄小荣丘少鹏郭琳洁
- 关键词：前列腺特异抗原逆转录聚合酶链式反应克隆分子
- 葡萄膜黑色素瘤多药耐药基因的表达与患者预后因素的分析被引量：1
- 2003年
- 目的 探讨葡萄膜黑色素瘤多药耐药基因的表达与患者预后的相关关系。 方法 选择石蜡包埋葡萄膜黑色素瘤组织 96例 ,通过脱色素免疫组织化学检测细胞周期素 D1(cyclin D1)、上皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)、转移抑制基因 2 3(non- metastasis gene 2 3,nm 2 3)、P糖蛋白 (Pglucose protein,P- gp)、多药耐药相关蛋白 (multidrug resistance relation protein,MRP)、肺耐药蛋白 (lungresistance protein,L RP)基因表达。选择病例资料较完整者 ,进行随访 ,随访结果分类统计。 结果 96例葡萄膜黑色素瘤中类上皮细胞型 2 1例、混合细胞型 5 6例和梭形细胞型 19例 ,其中眼内期 76例 ,眼外期 2 0例。随着转移抑制基因 nm 2 3表达的减低和 Cyclin D1、EGFR表达的增高 ,耐药相关基因表达有增高趋势 ,其中MRP和 L RP的表达与 nm 2 3的表达呈明显负相关关系 ,与 Cyclin D1、EGFR的表达呈明显正相关关系。随访结果显示 ,回访人数 5 8例 ,生存超过 5年者 2 6例 ,5年内死亡者 19例。结论 葡萄膜黑色素瘤多药耐药基因尤其 L RP的表达与患者预后具有明显的相关性。
- 艾思明郭琳洁吴中耀张胜陈家祺郑湖玲
- 关键词：葡萄膜黑色素瘤多药耐药葡萄膜肿瘤药物耐受性预后免疫组织化学
- 细胞周期相关基因在葡萄膜黑色素瘤中的表达与意义被引量：10
- 2001年
- 目的 探讨细胞周期相关基因与葡萄膜黑色素瘤病理分型及浸润能力的关系。 方法 采用免疫组化法定量检测 96例葡萄膜黑色素瘤标本中 cyclin D1和 Bcl- 2蛋白的表达。 结果 Bcl- 2在所有葡萄膜黑色素瘤中均有较高表达 ,与病理学分型及巩膜外浸润无关 ;cyclin D1的表达依梭型、混合型、上皮型逐渐增高 ,与肿瘤的浸润能力呈正相关。 结论 bcl- 2的表达对于葡萄膜黑色素瘤细胞的存活具有重要作用 ,cyclin
- 郭琳洁吴中耀郑湖玲张胜
- 关键词：葡萄膜黑色素病理生理学细胞周期
