郑健樑 作品数:57 被引量:176 H指数:7 供职机构: 中山大学中山眼科中心 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 广东省自然科学基金 国家教育部“211”工程 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
三氧化二砷诱导的视网膜母细胞瘤SO-Rb50细胞自噬的研究 被引量:2 2012年 背景细胞的自噬是肿瘤细胞非凋亡形式的死亡过程,研究证实三氧化二砷(As2O3)可诱导肿瘤细胞凋亡,但As2O3是否可致SO—Rb50细胞发生自噬的研究鲜有报道。目的探讨As2O3体外诱导SO—Rb50细胞自噬的作用。方法用浓度为0.5、1.0、2.0、4.0μmol/L的As2O3培养液及不含As2O3的未处理组处理SO—Rb50细胞系48h,采用MTT法测定各As2O3,浓度组SO—Rb50细胞的吸光度(As2O3)值。构建自噬标志物磷酸化绿色荧光蛋白(pGFP)-LC3体外转染SO—Rb50细胞,并分为新鲜RPMI一1640培养组(未处理组)、As2O3,RPMI一1640培养组(As2O3处理组)和rapamycin培养组(阳性对照组),于48h后行激光共焦显微镜检测细胞自噬;用自噬特异性染料单丹磺酰戊二胺(MDC)行荧光染色检测SO—Rb50细胞的自噬,并用透射电子显微镜检测SO—Rb50细胞的自噬表现,采用流式细胞仪定量检测不同浓度As2O3,处理组自噬泡阳性细胞百分比。结果未处理组和0.5、1.0、2.0、4.0txmolAs2O3,作用48h后SO—Rb50细胞的A570值分别为2.194+0.066、1.841±0.213、1.035±0.046、0.374±0.042和0.167±0.019,总体比较差异有统计学意义(F=547.636,P〈0.05),其中各浓度As2O3组A。值均明显低于未处理组,差异均有统计学意义(均P=0.000)。As2O3处理组和阳性对照组可见GFP—LC3融合蛋白呈点状聚集在相应的自噬泡,未处理组GFP—LC3呈弥散分布。透射电子显微镜检查可见未处理组SO—Rb50细胞超微结构正常,As2O3处理组和阳性对照组见大量双层膜状结构及自噬溶酶体。未处理组48h见极少量MDC阳性荧光颗粒,As2O3处理组及阳性对照组48h可见明显的MDC阳性荧光颗粒,聚集在细胞质相应的自噬发生区。流式细胞术检测发现未处理组和0.5、1.0、2.0、4.0μmol/LAs2O3及rapamycin作用48h后自噬泡阳性的SO—Rb50细胞百分比分� 孟永 黄丽琴 郑健樑 张文忻 林健贤 李永平 张平关键词:视网膜母细胞瘤 自噬 颌下腺组织培养上清液对结膜上皮细胞生物学活性的影响 2005年 【目的】探讨颌下腺分泌液对结膜上皮细胞生物学活性的影响。【方法】培养正常兔结膜细胞,传代接种后分别加入兔颌下腺及泪腺组织培养上清液,然后用流式细胞仪检测各样本的细胞生长周期时相,甲基噻唑基四唑(MTT)比色法测定细胞生长曲线。【结果】颌下腺细胞培养上清液对结膜上皮细胞具有促生长作用,且与其所加入的量相关,增加其细胞生长曲线的峰值,提高 S 期及 G_2期细胞的百分比,减少 G_1期细胞的百分比,但这些作用略低于泪腺上皮细胞培养上清液。【结论】兔颌下腺组织培养上清液能促进培养的兔结膜上皮细胞的分裂、增殖,并维持其正常的细胞形态及生物学活性。 沙翔垠 陈家祺 郑健樑 郭海波 杨瑞明 郑瑜关键词:颌下腺 结膜上皮细胞 细胞生物学 活性 IL-1ra对IL-1α诱导的眼眶成纤维细胞合成糖胺多糖的抑制作用 被引量:2 2003年 目的 :明确白介素 1受体拮抗剂 (IL 1ra)是否对白介素 1α(IL 1α)诱导的眼眶成纤维细胞合成糖胺多糖 (gly cosaminoglycans,GAG)有抑制作用 ,探讨IL 1ra在Graves’眼病(GO)治疗及预防中的临床应用前景。方法 :以下述方法分别处理培养的GO患者和正常人眼眶成纤维细胞 :IL 1α 30U/ml或 /和不同浓度的IL 1ra孵育 4 8h ;用IL 1α 30U/ml处理后 ,再加入IL 1ra 75ng/ml共孵育不同时间 (2 4h、4 8h、72h)。用 [3 H]葡萄糖胺掺入法测定 [3 H]GAG的产量。结果IL 1α 30U/ml明显刺激GO患者和正常人成纤维细胞合成GAG ,增加率达 4 6 .6 %~ 12 7.9% (平均 10 3.5 % ,P <0 .0 0 1)。与IL 1α 30U/ml克分子浓度比为 2 5∶1、4 0∶1和 10 0∶1的IL 1ra ,分别抑制IL 1α诱导的GO患者和正常人成纤维细胞合成GAG达 (30 .93± 11.4 6 ) %、(5 9.34± 9.3) %和 (83.15± 8.5 6 ) % (P <0 .0 0 5 )。在 2 4h、4 8h、72h时 ,IL 1ra分别抑制IL 1α诱导的眼眶成纤维细胞合成GAG(2 4 .18± 6 .3) %、(6 0 .4 8± 12 .83) %和 (73.0 4± 7.14 ) % (前两组相比 ,P <0 .0 0 1;后两组相比 ,P =0 .15 9)。结论 :IL 1ra能够剂量和时间依赖性地抑制IL 1α诱导的眼眶成纤维细胞合成GAG ,IL 1ra可望用于GO的治疗和预防。 刘桂琴 吴中耀 杨华胜 郑健樑 颜建华 卢汉平 林征关键词:IL-1RA IL-1Α 眼眶成纤维细胞 糖胺多糖 白介素1受体拮抗剂 白介素1Α 深低温保存角膜缘组织的结构和增殖活性研究 被引量:6 2003年 目的 探讨深低温保存材料角膜缘组织的结构和增殖活性。方法 应用常规切片 ,HE染色及电镜检查观察深低温保存 4个月的角膜缘组织的结构变化。应用免疫组织化学染色法对 6片深低温保存 4个月的角膜缘材料在刚复温时及于培养液中放置 6d后的增殖细胞核抗原 (PCNA)表达进行检测 ,2片新鲜角膜缘材料作为对照。结果 深低温保存 4个月的角膜缘材料基本保持了其形态结构的完整性。新鲜角膜缘材料PCNA呈弱阳性表达 ,6片深低温保存材料在复温时其PCNA呈阴性表达 ,但当置于培养液中 6d后 ,其PCNA呈阳性表达。结论 深低温保存 4个月的角膜缘材料结构完整 ,且保持其增殖活性 。 徐军 陈家祺 郑健樑关键词:角膜缘 深低温保存 免疫组化 人视网膜母细胞瘤细胞系SO-Rb_(50)克隆株染色体畸变的观察 被引量:1 1998年 目的:研究SO-Rb_(50)细胞系三个克隆株MC_2、MC_3、MC_4染色体畸变的差异。方法:对MC_2、MC_3、MC_4的第11代进行G-显带核型分析。结果:三个克隆株细胞的染色体数目和结构均有异常,出现不同类型的染色体畸变。细胞染色体核型分析见假二倍体核型,13号染色体畸变仅见于个别核型且在三个克隆株中畸变情况不同。发现5个标记染色体,其中标记染色体M_1出现频率最高,几乎见于每个细胞,是由1号染色体长臂部分重复构成(t(1;1)qter-p35::q24-ter);另外还有几个异常标记染色体M_2,M_3,M_4和M_5分别见于各个克隆株细胞。标记染色体M_4和M_5为2号染色体的变化,是在该细胞系染色体变化动态研究中首次发现。结论:SO-Rb(50)在体外培养连续传代后仍存在不同的克隆株,结合以往对该细胞系染色体畸变的动态研究,不同代数的瘤细胞染色体结构畸变有差异,进一步证明体外培养连续传代过程中染色体结构畸变呈动态变化。我们认为13号染色体的畸变不是Rb发生的唯一原因;1号染色体的变化与本细胞系的永生关系密切,其与Rb发生、发展的关系值得深入研究;其它染色体变化为继发改变。眼科学报1998;14:220~223。 李红 冯官光 李永平 郑健樑 易玉珍 方嬿关键词:视网膜母细胞瘤 染色体畸变 人视网膜色素上皮细胞培养方法及鉴定 郑健樑 李永平 张平HE和Giemsa染色在结膜刮片检测嗜酸粒细胞的染色比较 被引量:5 2005年 目的:通过HE和Giemsa对嗜酸粒细胞的染色效果比较,寻找最佳染色方法。方法:对春季结膜炎20例病人进行结膜刮片,并分别作HE和Giemsa染色,最后用光学普通显微镜观察。结果:在显微镜下,Giemsa染色的嗜酸粒细胞比HE染色的嗜酸粒细胞清晰。结论:实验表明,检测嗜酸粒细胞,采用Giemsa染色,可获得满意的染色效果。 林健贤 张平 李永平 郑健樑 钟秀风 张文忻 聂莉 张波关键词:GIEMSA染色 嗜酸粒细胞 春季结膜炎 微镜观察 HE染色 染色效果 羊膜和结膜基质诱导胚胎干细胞分化为上皮样细胞的初步研究 被引量:2 2007年 目的观察小鼠胚胎干细胞在保存人羊膜及兔眼表结膜基质上分化的情况。方法36只新西兰兔随机分为3组,每组12只。A组:将表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的小鼠ES-GFP细胞用5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)标记后行实验兔结膜下移植;B组:将小鼠ES-GFP细胞接种到人羊膜上共培养4d,用BrdU标记后移植到实验兔结膜缺损区;C组:采用保存羊膜移植到实验兔兔结膜缺损区。分别于移植后1、2、3、4,6和8周,摘取各组实验眼行荧光显微镜、组织学和免疫组织化学检查,荧光检测ES-GFP细胞在组织中的荧光表达,组织学检查移植到结膜基质的ES-GFP细胞的存活、形态变化以及移植局部的反应等情况;免疫组织化学检测移植到结膜基质的带有BrdU标记的ES-GFP细胞CK3/CK12和CK13的表达。结果小鼠ES-GFP细胞接种到人羊膜后能在羊膜上贴附生长,与羊膜共培养4 d后部分ES-GFP细胞分化为多角形上皮样细胞,免疫组化显示β1整合素阳性。将负载有ES-GFP细胞的羊膜移植到兔结膜缺损区,术后荧光显微镜可在结膜上皮层检测到绿色荧光带,免疫组织化学检测结膜上皮层CK13表达阳性,CK3/CK12表达阴性,在重建的结膜上皮层可检测到BrdU核阳性细胞,未见异常增殖细胞。结论采用保存人羊膜负载小鼠ES细胞行兔结膜移植,小鼠ES细胞能在兔结膜基质存活并增殖。 黄丹平 葛坚 高前应 卢蓉 郑健樑关键词:胚胎干细胞 羊膜 结膜上皮细胞 硫化嵌合型LRP反义寡核苷酸逆转葡萄膜黑色素瘤多药耐药性 被引量:2 2002年 目的 :探讨体外培养的葡萄膜黑色素瘤细胞对不同化疗药物敏感性 ,并通过硫化嵌合型反义寡核苷酸 (AS -ODN)特异阻断肺耐药基因 (LRP)的表达逆转肿瘤多药耐药性。方法 :通过原代培养葡萄膜黑色素瘤细胞 ,采用噻唑蓝 (MTT)法测定肿瘤细胞对氟脲嘧啶 ,噻替哌 ,顺铂 ,阿霉素 ,长春新碱 ,氮烯咪氨 6种药物体外敏感性。检测不同浓度药物作用 96小时后对肿瘤细胞的杀伤情况。利用RT -PCR ,Westernblot法测定肿瘤细胞LRP的表达 ,并通过阳离子脂质体导入LRPAS -ODN ,阻断LRP的表达 ,测定该基因对肿瘤细胞化疗药物敏感性的影响。结果 :葡萄膜黑色素瘤对不同的化疗药物均有抗药性。LRPAS -ODN可下调该基因的表达 ,且与剂量呈正相关。LRPAS -ODN在 15 0nM以下对葡萄膜黑色素瘤的增殖活性无明显影响 ,但可逆转肿瘤的多药耐药性。结论 :临床常用化疗药物及化疗剂量对葡萄膜黑色素瘤细胞杀伤作用较小 ,LRP的高表达与肿瘤的多药耐药性密切相关。 郭琳洁 吴中耀 张胜 杨琨 郑健樑 郑湖玲关键词:葡萄膜黑色素瘤 多药耐药 反义寡核苷酸 人视网膜母细胞瘤SO-Rb_(50)细胞系单克隆方法探索 1996年 目的:为了使培养细胞的遗传性状、生物学特性相似,利于多种实验研究,而对视网膜母细胞瘤SO-Rb_(50)细胞系进行克隆。方法:用多孔塑料板克隆细胞法,对SO-Rb_(50)细胞进行克隆及分离培养。结果:没有菊花团形成的Rb细胞克隆成功,而有菊花团的Rb细胞、连续三次克隆均不能成功。结论:提示分化好的Rb细胞难以克隆成功。眼科学报 1996;12:79—82。 郑健樑 冯官光 李永平 易玉珍关键词:视网膜母细胞瘤 单克隆 细胞系