范宝昌
- 作品数：56 被引量：288H指数：9
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技部专项基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- SARS相关病毒(BJ01株)的全序列及其比较分析被引量：23
- 2003年
- 严重急性呼吸综合征(SARS)是一种新发现的急性传染病。对一株已确认为SARS病原体的冠状病毒(BJ01)进行了全基因组序列测定,并与其他已知病毒进行了比较分析。该病毒基因组全长为29.725kb,含11个可读框(ORFs),由1个稳定区和1个可变区组成,其中稳定区编码RNA依赖性RNA聚合酶,包括两个ORFs;可变区含有4个蛋白质编码序列(CDSs),分别编码病毒的4个结构蛋白(S,E,M,N蛋白)。此外,可变区还包括5个非典型的预测蛋白(PUPs)。此病毒基因的排列顺序与其他已知的冠状病毒一致。通过与已知RNA病毒的序列比对,可以确认该病毒属于冠状病毒科(Coronaviridae)。与GenBank中已知的5个SARS相关病毒全基因组序列的比较分析显示,已在30个核苷酸位置上检出序列差异,总体突变率为0.1％,其中15个变异位点在编码区,可能会导致蛋白质的氨基酸改变(异义突变)。S蛋白中已发现3处可能引起该蛋白质物化特征变化的变异,而该蛋白质可能参与病毒与宿主间的免疫反应.与病毒包膜形成相关的M蛋白中则已发现两处氨基酸变化。进化分析表明,SARS病毒可能不是来源于人类,但没有证据证明是人为制造的。为了阐明SARS相关病毒的病因学以及排除其他可能的SARS病原体的存在,仍需进行更深入的研究。
- 秦鄂德祝庆余于曼范宝昌常国辉司炳银杨保安彭文明姜涛刘伯华邓永强刘洪张雨王翠娥李豫川甘永华李晓萸吕富双谭刚曹务春杨瑞馥汪建李蔚徐祖元李彦吴清发林伟陈维军唐琳邓亚军韩玉军李昌峰雷蒙李国庆
- 关键词：冠状病毒基因组系统发生学
- 国内首次自患者标本中同时分离的登革2型和3型病毒的鉴定被引量：1
- 2004年
- 采用间接免疫荧光方法 ,检测患者血清标本中的抗登革病毒IgM和IgG抗体 ;同时将病人急性期血清接种C6 36细胞进行病毒分离。从分离的病毒悬液中提取RNA ,进行RT PCR扩增和序列测定。结果显示 ,该患者血清中存在抗登革病毒的IgM和IgG抗体。从病人血清中分离的病毒 ,经RT PCR和序列测定证实为登革 2型和 3型病毒的特异序列。表明该患者为登革 2型和
- 于曼彭文明范宝昌邓永强秦鄂德姜涛段鸿元陈水平
- 关键词：登革热登革病毒抗体
- 我国登革3型病毒广西株基因组非编码区结构特征的研究被引量：1
- 2001年
- 应用cDNA末端快速扩增法 (RACE) ,获得我国登革 3型病毒株基因组的包括 5′和 3′端非编码区的扩增片段 ,经琼脂糖凝胶电泳观察其长度分别为 710bp和 470bp。序列分析表明 ,与登革 3型病毒菲律宾株 (H87株 )核苷酸序列同源性 >99%。进化树分析提示 ,该株病毒属于登革 3型病毒Ⅰ亚型。基因组的 5′和 3′端可能含有较强的二级结构域。
- 苑锡同李晓萸耿丽卿于曼陈水平范宝昌秦鄂德
- 关键词：RACE登革3型病毒CDNA非编码区
- 扩增我国登革2型病毒全长cDNA分子的技术方法融合PCR方法被引量：14
- 2001年
- 目的 :建立扩增登革 2型病毒基因组全长cDNA的融合PCR法 ,为深入探讨病毒基因组的结构与功能提供有效的技术途径。方法 :根据我国登革 2型病毒D2 4 3株序列设计引物 ,首先采用长链RT PCR技术扩增病毒基因组 5′及 3′半分子 ,然后以半分子采用融合PCR法将两个半分子构建成全长cDNA分子。为进一步证实所构建全长cDNA分子的特异性 ,再以融合PCR产物为模板扩增 5′非编码区序列 ,与pGEM T载体连接 ,在 377A型自动测序仪进行序列分析。结果 :通过对逆转录反应及PCR扩增条件的优化 ,建立了制备大片段cDNA及构建全长cDNA分子的融合PCR方法。扩增的我国登革 2型病毒的 5′及 3′半分子的长度均为 5kb左右 ,采用融合PCR方法制备的全长cDNA长约 11kb ,与预期大小一致 ,非编码区测序结果表明扩增产物为D2 4 3所特有。结论
- 范宝昌赵卫胡志君于曼陈水平杨佩英秦鄂德
- 关键词：登革热病毒全长CDNA融合PCR
- 登革2型病毒乳鼠神经毒力相关位点的研究
- 2002年
- pDVWS501为含有登革2型病毒全长cDNA的质粒,可利用感染性转录体技术恢复为有活力的病毒MON501.将MON501注射乳鼠脑内可引发脑炎症状,其E蛋白的62,203位分别为Glu,Asn.采用OL-PCR方法把pDVWS501 E62位氨基酸突变为Lys,得到质粒TB62;E203位氨基酸突变为Asp,得到质粒TB203.将pDVWS501,TB62和TB203酶切后体外转录得到全长登革2型病毒转录体,应用电穿孔技术转染BHK-21细胞,7天后收毒.RT-PCR证实有登革2型病毒存在,接种C6/36细胞,3～5 d可使其产生典型病变.测定突变区域的序列,结果表明得到了恢复病毒MON501和E62,E203位点突变的重组病毒HFT62,HFT203.3株病毒均在其基因组5’端加“G”,3’端则与登革2型病毒野生株相同.分别将3株病毒稀释至105～102TCID50,经脑内途径注射1日龄乳鼠,发现与MON501相比,HFT62,HFT203在同一稀释度发病乳鼠的个数减少,发病时间延长且差异显著,表明E62,E203可能是登革2型病毒乳鼠神经毒力相关位点.
- 赵卫范宝昌胡志君陈水平王鹏程苑锡同李晓萸于曼秦鄂德杨佩英
- 关键词：乳鼠神经毒力登革2型病毒点突变登革热
- 我国登革病毒全长cDNA克隆的构建及其转录体感染性研究
- 该研究首次扩增出中国登革2型病毒（D2-43株）,3型病毒（D3-80-2）和4型病毒（D4-B5）株基因组全长cDNA分子,长约11kb,与预期大小一致.为鉴定扩增产物的正确性,重新设计了新引物,以扩增的全长cDNA分...
- 范宝昌
- 关键词：登革病毒全长CDNA克隆
- 文献传递
- 我国两株登革2型病毒基因组的全序列分析被引量：9
- 2002年
- 本研究对我国两株登革２型病毒Ｄ２－４３株、Ｄ２－０４株的基因组进 行 了全序列测定，在此基础上对这两株引起不同临床症状及鼠神经毒力的登革病毒的基因组序 列进行了比较分析，结果表明Ｄ２－４３株与Ｄ２－０４株基因组全长约为１０ ７２３ｎｔ，核苷酸序列的同源性为９５．１％，氨基酸序列的同源性为９７．６％， 不存在特别的高变区。这两株序列中共有８３个核苷酸的变化导致了氨基酸的变化，其中２１个 差异氨基酸可引起所在位点电荷或极性的变化，位于登革病毒粒子表面的Ｅ糖蛋白第１２６位氨 基酸由Ｇｌｕ （Ｄ２－０４株）→Ｌｙｓ（Ｄ２－４３株）的变化对其抗原性有影响，可能引起了病毒对鼠神 经 毒力的改变。对结构糖蛋白Ｅ基因的聚类分析表明Ｄ２－４３株与新几内亚株、台湾８７株及菲律 宾 ８３株亲缘关系较近，Ｄ２－０４株与牙买加株及巴西９０年分离株的亲缘关系较近，表明我国存 在不同起源的登革２型病毒感染。
- 胡志君杨敬赵卫杨佩英范宝昌秦鄂德于曼
- 关键词：登革病毒基因组全序列分析
- 登革病毒衣壳蛋白与葡萄球菌核酸酶融合蛋白在大肠杆菌中的表达被引量：2
- 2004年
- 目的 :实现登革病毒衣壳蛋白C与葡萄球菌核酸酶SN融合蛋白在大肠杆菌中的表达。方法 :利用基因重组技术将通过BamHⅠ连接在一起的CSN基因克隆入表达载体 pLEX ,转化大肠杆菌GI72 4并以色氨酸诱导表达 ,用SDS PAGE和免疫印迹法鉴定表达的融合蛋白 ,采用TDA显色法检测融合蛋白中SN的活性。结果与结论 :成功构建重组表达载体pLEX CSN并在大肠杆菌中获得表达 ,表达的融合蛋白相对分子质量约 2 70 0 0 ,可被抗登革病毒C蛋白抗体识别 ,并具有SN的生物活性。为探讨登革病毒衣壳蛋白靶向性抗病毒作用奠定了基础。
- 秦成峰胡志君陈水平范宝昌于曼姜涛邓永强段鸿元秦鄂德
- 关键词：登革病毒衣壳蛋白葡萄球菌核酸酶融合蛋白
- 登革2型PrM基因的重组病毒对不同型别登革病毒复制的阻断作用
- 2002年
- 观察登革 2型PrM基因的pSFV重组甲病毒抗该型病毒的作用 ,进一步探讨登革 2型PrM基因的这种重组病毒对其它 3个血清型登革病毒复制的阻断作用 .采用体外转录和电穿孔 ,分别将构建的含正、反义PrM基因的重组质粒DNA和辅助载体DNA转录成RNA ,然后将这两种RNA共转染BHK细胞 ,进而包装成重组病毒颗粒 .再将激活的重组病毒感染细胞 ,分别用不同型病毒进行攻击 .然后通过免疫荧光法 ,观察对登革病毒复制的阻断作用 .结果表明 ,含登革 2型PrM基因的重组病毒不仅可阻断登革 2型病毒的复制 ,同样具有抑制其他 3个型病毒复制的能力 ,且抗登革 1、4型病毒的复制作用强于抗登革 3型病毒的作用 .用 10 3 TCID50 剂量的登革病毒攻击 ,含反义PrM基因的重组病毒可完全阻断登革 1、3、4型病毒的复制 .但含正义PrM基因的重组病毒对登革 3型病毒的复制不能完全阻断 .
- 于曼秦鄂德陈水平赵月峨范宝昌段鸿元姜涛杨佩英胡志君
- 关键词：重组病毒登革病毒病毒复制阻断作用
- pSFV1载体系统的改造
- 2001年
- 目的 获得具有多种稀有酶位点和CMVIE增强子 启动子及SV40晚期poly(A)加尾信号的pSFV1载体系统。方法 首先将含有多种稀有酶位点的人工接头插入到pSFV1的BamHⅠ和SmaⅠ位点 (获得的载体称为mpSFV1) ,然后在mpSFV1和辅助载体Helper2的SpeⅠ和SphⅠ位点分别插入SV40晚期poly(A)加尾信号和CMVIE增强子 启动子序列。以间接免疫荧光法检测构建的表达载体mpSFV1 A CMV表达登革 2型病毒PrME基因的效率 ,并用RT PCR法鉴定辅助载体Helper2 A CMV包装形成重组病毒的能力。结果 经PCR和酶切鉴定证明 ,接头、CMVIE增强子 启动子序列和SV40晚期poly(A)加尾信号序列均已导入pSFV1载体系统中 ;测序结果也与已知序列一致。间接免疫荧光法证明 ,PrME蛋白在BHK2 1细胞中获得了表达 ,同时 ,改造后的辅助载体也具有包装形成重组病毒的能力。结论 已将以RNA为基础的pSFV1载体系统构建成以DNA为基础的表达载体系统。
- 陈水平秦鄂德于曼赵卫范宝昌胡志君王鹏程杨佩英
- 关键词：启动子登革病毒
