王文明
- 作品数：13 被引量：16H指数：3
- 供职机构：青岛农业大学更多>>
- 发文基金：山东省科技攻关计划重大科技专项国家高技术研究发展计划山东省自主创新成果转化重大专项项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 不同饲养层对牛胚胎干细胞培养的影响被引量：2
- 2010年
- 本研究建立牛胚胎干细胞(Bovine Embryonic Stem Cells ESCs)的分离培养体系,摸索牛ESCs的培养条件。对牛运用FSH减量注射法进行超数排卵获取胚胎。从获得的胚胎中分离ESCs,在不同的饲养层(牛骨髓间充质干细胞、牛成纤维细胞、牛乳腺干细胞)上培养,对牛ESCs进行形态学观察及鉴定。牛MSCs做饲养层与牛SFCs、牛MaSCs相比差异显著,牛MSCs的效果最佳(P<0.05)。牛ESCs在牛MSCs做饲养层的条件下更易生长。分析了不同饲养层对牛ESCs分离培养的影响,建立了一种分离培养牛ESCs的饲养层体系,为进一步深入研究ESCs的诱导分化和应用打下基础。
- 张守宝柏学进朱金香王文明刘玮董雅娟
- 关键词：超数排卵饲养层
- 体外诱导牛骨髓间充质干细胞向乳腺样上皮细胞分化的初步研究被引量：5
- 2012年
- 为培育转基因肉牛提供种子细胞及进一步丰富牛骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)的多向分化潜能,本试验利用细胞免疫荧光染色方法和分子生物学方法初步探讨在表皮生长因子、胰岛素、催产素和孕酮等条件下,体外诱导牛BMSC向乳腺样上皮细胞分化的可能性。利用不同浓度的诱导液对纯化稳定的P4、P8和P12代牛BM-SC进行体外诱导,并对诱导后的细胞进行细胞免疫荧光观察和RT-PCR鉴定。结果显示,诱导后部分BMSC细胞呈多角形,而不再呈明显的梭形和纺锤形,经细胞角蛋白18免疫荧光染色后出现明显的荧光。P4代牛BMSC在诱导液Ⅱ的诱导作用下分化效果显著。RT-PCR结果显示,诱导分化后细胞角蛋白19基因、β-酪蛋白基因及αs1-酪蛋白基因在细胞中表达。因此,在体外,多因子联合诱导可使牛BMSC初步分化为乳腺样上皮细胞并且在诱导液Ⅱ的联合诱导下分化作用最明显。
- 朱孟芝董雅娟龚宜超王文明刘玮柏学进
- 关键词：骨髓间充质干细胞表皮生长因子催乳素孕酮
- 奶牛乳腺上皮细胞的分离培养及分子生物学鉴定被引量：4
- 2010年
- 利用贴壁筛选法分离培养奶牛乳腺上皮细胞,并对其进行核型分析和RT-PCR鉴定。结果表明,体外培养的奶牛乳腺上皮细胞生长旺盛,具有典型的上皮细胞形态特征,体外传代15次后核型未发生改变。RT-PCR鉴定结果表明,分离培养的细胞明显表达奶牛乳腺上皮细胞的2种特异性基因,即as1酪蛋白基因(1 736 bp)和k酪蛋白基因(780 bp)。
- 刘玮董雅娟柏学进王文明张守宝董懿为
- 关键词：乳腺上皮细胞
- 黑牛繁育漫谈（一）
- 2009年
- 一直被养殖户认为，周期长、投资大、效益不明显的肉牛产业，曾几何时被冠以“天价牛肉”而被炒得沸沸扬扬？曾几何时，“听音乐、喝啤酒”成为高档肉牛生产时尚流行的宣传词？“天价牛肉”可能存在．而“听音乐、喝啤酒”的饲养方法是不可推崇的，这样的宣传不但会打击农民养牛的积极性．而且也不科学。
- 董雅娟柏学进封纪武肖超柱李兴芳董懿为刘伟王文明张守宝
- 关键词：黑牛肉牛产业肉牛生产饲养方法养殖户牛肉
- 不同培养条件对牛核移植胚胎体外发育的影响被引量：3
- 2008年
- [目的]进一步优化牛核移植胚胎的体外培养体系。[方法]在培养液中添加谷胱甘肽和胚胎培养的0～3d采用5％O2浓度，在不同培养条件下对牛核移植重构胚胎进行体外培养，测定卵裂率、8细胞发育率、桑椹胚率以及囊胚发育率。[结果]结果表明，试验组B的8细胞发育率（38.3％）、桑椹胚率（17．0％）和囊胚率（8.5％）与对照组A（17．9％、1．3％、1．3％）差异显著（P〈0．05）。试验组B和试验组c的桑椹胚率（17.0％、11.8％）、囊胚率（8．5％、7．8％）与对照组A（1．3％、1．3％）均差异显著（P〈0．05）。[结论]在培养液中添加谷胱甘肽和胚胎培养的0～3d采用低O2浓度（5％O2），能够提高牛核移植胚胎的体外发育率。
- 史文升村上正夫柏学进王文明刘玮董雅娟
- 关键词：核移植胚胎体外发育
- 牛朊蛋白基因真核表达载体的构建及其在牛骨髓间充质干细胞中的稳定表达
- 2012年
- 试验构建牛朊蛋白(prion protein,PRNP)基因的真核表达载体,为进一步研究牛朊蛋白的生理功能和从细胞水平研究抗疯牛病转基因克隆牛奠定基础。采用重叠延伸PCR(splicing overlap extension PCR,SOE-PCR)法扩增获得牛PRNP基因序列,并克隆到带有DsRED2报告基因的真核表达载体pDsRED2-N1中,将双酶切、PCR、测序鉴定的阳性质粒经脂质体转染牛骨髓间充质干细胞(BMSC);通过荧光显微镜观察转染细胞,并用800μg/mL G418对转染的细胞进行药物筛选。琼脂糖凝胶电泳显示基因合成的片段大小和构建的载体大小与预期相符;重组表达载体转染BMSC后有红色荧光出现;通过药物筛选出了稳定转染的细胞单克隆。通过SOE-PCR成功扩增了牛PRNP基因序列,并构建成真核表达载体,得到稳定表达目的蛋白的BMSC细胞。
- 宋少康董雅娟柏学进王文明刘玮牛召珊赵仕全杨莉
- 关键词：疯牛病SOE-PCRBMSC
- 不同培养液对牛卵母细胞成熟及核移植效率的影响被引量：1
- 2010年
- 在牛卵母细胞成熟液中分别添加促卵泡素(FSH)10μg/L、胰岛素-转铁蛋白-硒(ITS)10μL/mL、表皮生长因子(EGF)10μg/L,配成3种不同体外成熟液对牛卵母细胞进行成熟培养,结果FSH组卵母细胞成熟率84.2%显著高于ITS组75.9%和EGF组70.2%。卵母细胞成熟后构建牛体细胞核移植胚胎,结果FSH、ITS组卵裂率分别为87.2%、81.9%,显著高于EGF组(73.6%),但三组间囊胚率差异不显著(P>0.05)。
- 王文明董雅娟柏学进村上正夫刘玮张守宝
- 关键词：卵母细胞成熟促卵泡素ITS表皮生长因子
- 体细胞核移植技术的研究进展及应用前景
- 从克隆羊“多莉”诞生以来虽然核移植技术已得到了长足的发展，但在胚胎质量和各技术环节中仍然存在许多问题。本文对体细胞核移植技术的研究现状及应用前景进行了简单综述，并阐述了核移植技术中的一些问题。为核移植技术的进一步发展和完...
- 王文明董雅娟柏学进村上正夫史文升封纪武肖超柱
- 关键词：体外发育体细胞核克隆羊胚胎质量核移植技术
- 文献传递
- 黑牛繁育漫谈（二）
- 2009年
- 5．2加强黑牛繁育的科研投入
黑牛繁育的特点是在保持鲁西黄牛和渤海黑牛的维持需要低、适应性强、抗病力强及浓厚的牛肉风味等优点的基础上，以提高生长率、个体产肉量和肉质为选育核心。建立黑牛肉用性能选育的分子标记辅助育种体系．加快选育速度．借鉴国外的育种经验．最终育成具有中国地方特色的黑牛肉用新品种。
- 董雅娟柏学进封纪武肖超柱李兴芳董懿为刘伟王文明张守宝
- 关键词：渤海黑牛分子标记辅助肉用性能鲁西黄牛育种经验
- 牛MSCs核移植胚胎发育潜能的研究
- 本实验通过贴壁筛选法分离培养牛骨髓间充质干细胞(BMSCs)，对分离培养的牛MSCs生物学特性进行了分析，并以牛MSCs为供核细胞进行了核移植实验，研究了牛MSCs核移植重构胚的体外发育能力，同时还对比研究了不同种类供体...
- 王文明
- 关键词：体外成熟核移植胚胎移植
- 文献传递
