董雅娟
- 作品数：99 被引量：176H指数：6
- 供职机构：青岛农业大学更多>>
- 发文基金：山东省科技攻关计划重大科技专项国家高技术研究发展计划现代农业产业技术体山东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金系建设专项资金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生经济管理更多>>
- 体细胞克隆牛超排胚胎玻璃化冷冻及移植试验
- 2004年
- 对体细胞克隆牛进行了超数排卵、胚胎玻璃化冷冻及胚胎移植试验。首先对体外受精卵进行了玻璃化冷冻保存试验,结果表明,体外受精囊胚经过EPS10和EPS20的TCM-199液玻璃化冷冻-解冻后胚胎形态正常率和发育率各组间差异不显著,囊胚孵出率EPS20组为31.3%(35/112)极显著高于EPS10组的12.2%(13/107)(P<0.01),选择玻璃化冷冻液EPS20作为体细胞克隆牛超排采卵获得胚胎的冷冻保存液。本试验对体细胞克隆牛“康康”和“双双”进行了超排试验,分别获得6枚(4枚可用胚)和10枚(9枚可用胚)胚胎,各取2枚1级胚胎应用EPS20玻璃化液进行玻璃化冷冻,解冻后分别移植到4头同期发情处理的中国荷斯坦奶牛的黄体侧子宫角内,结果为1头9908号受体母牛妊娠,并且产下1头健康的体细胞克隆牛“双双”的胚胎移植后代。试验结果表明,①体细胞克隆牛与正常牛一样对外源激素(FSH)具有较好的应答能力和超数排卵的能力;②体细胞克隆牛的胚胎可用于玻璃化冷冻保存。
- 董雅娟柏学进李建栋程明
- 关键词：体细胞克隆牛玻璃化冷冻超数排卵超排采卵精囊
- GnRH类似物(LHRH-A3)注射方案对奶牛超排效果的影响被引量：3
- 2006年
- 本实验对奶牛超排时LHRH-A3注射方案分别进行了研究。结果发现在其它实验条件相同的情况下,两次输精同时都注射LHRH-A3的供体(第1次注射50μg,第2次注射25μg)的平均无精卵数(0±0)显著低于只在第1次输精同时注射LHRH-A3的(剂量为50μg)(0.222±0.183)(P<0.05),其平均黄体数、平均获胚数、平均获可用胚数都稍高,但差异不显著。这说明采用两次输精同时都注射LHRH-A3的方案可以提高奶牛的超排效果。
- 李建栋史福艳董雅娟柏学进于进亮张圆王雪红
- 关键词：奶牛超排效果
- 不同浓度的牛卵泡液对牛卵母细胞体外核成熟率的影响被引量：6
- 2007年
- 通过添加不同浓度的牛卵泡液(bFF),探讨了bFF对牛卵母细胞体外核成熟率的影响;并筛选出bTCM-199(10%)培养体系与TCM-199培养体系进行核成熟效果的对比试验。结果表明:20%、30%bFF组处在GV期和MⅠ期卵母细胞比率极显著高于10%组(P<0.01),而卵母细胞核成熟(处于MⅡ期)率10%组显著高于20%和30%组(P<0.01);TCM-199培养体系与bTCM-199(10%)培养体系2组减数分裂各阶段卵母细胞比率基本一致,前者卵母细胞核成熟(处于MⅡ期)率与后者差异不显著(P>0.05)。与bTCM-199(10%)培养体系相比,TCM-199培养体系成分简单,是理想的牛卵母细胞体外成熟培养体系。
- 于进亮董雅娟柏学进董方圆赵兴史文升封纪武曹雷
- 关键词：卵泡液
- 牛骨髓间充质干细胞的分离培养和初步鉴定被引量：2
- 2006年
- 本试验采用全骨髓法和密度梯度离心法来分离纯化和体外培养牛骨髓间充质干细胞,并研究了不同培养基和血清对BMSCs的生长的影响以及对牛骨髓间充质干细胞的初步鉴定。结果表明,全骨髓法和密度梯度离心法均可获得纯化度较高的牛骨髓间充质干细胞,并且能够分化为脂肪样细胞,为利用MSCs作为种子细胞治疗多种疾病提供试验基础,同时可以利用骨髓间充质干细胞作为核供体进行核移植的研究和动物遗传资源的保存。
- 董方圆董雅娟胡亮柏学进于进亮
- 关键词：骨髓间充质干细胞
- 山羊卵母细胞体外成熟过程中细胞核迁移的研究被引量：5
- 2006年
- 本试验应用传统的醋酸地衣红染色法研究了山羊卵母细胞体外成熟过程中细胞核迁移现象，结果发现成熟分裂从GVBD现象起，其细胞核即由卵母细胞的近中央位置逐渐移向细胞表面，之后同源染色体分开，排出第一极体。卵母细胞成熟后，随着时间的延长，细胞核又逐渐远离第一极体端。试验结果采用面积积分法处理，结果为：0—5．7h山羊卵母细胞处于GV期，持续时间为5．7h；5．7—8．9h为DK期，持续时间为3．2h；8．9—15．9h卵母细胞处于MⅠ期。持续7h；15．9—17．5h为AⅠ期，持续1．6h；17．5—22h为MⅡ期，持续4．5h。
- 王雪红董雅娟柏学进岳福杰杨恕玲董方圆
- 关键词：体外成熟山羊卵母细胞
- 小鼠原核期受精卵体外培养系统的筛选
- 2006年
- 为了筛选出最佳的小鼠原核期受精卵的体外发育培养系统,分别进行了四个试验。试验I:在体外分别用自配的M16、mM16、KSOM、mKSOM、CZB进行体外发育培养,进而筛选出一种最佳的体外培养系统;试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分别:探讨了血清、PVA、rhLIF对小鼠胚胎发育的影响。结果,试验I中胚胎发育到2-细胞的比率差异不明显,但是在mM16和mKSOM中,发育到4-细胞的比率94.7%,90.7%(91/96;78/86)和发育到桑椹胚/囊胚的比率分别为78.1%,67.4%(75/96;58/86)均明显高于其他三种培养液;试验II用10%FBS代替M16中BSA时,胚胎的发育率均下降,即使在mM16中桑椹胚/囊胚率仅为4.8%(12/35)与对照组M16(40.5%)差异显著(p<0.05);试验Ⅲ用PVA取代mM16和mKSOM中的BSA其体外发育率显著下降,胚胎均无一例发育到桑椹胚/囊胚;试验Ⅳ:rhLIF能提高胚胎在体外的发育率可使mM16培养的胚胎囊胚率、囊胚脱出率分别达到84%(47/56)、39.2%(22/56)。结论:在不添减其他成分前提下,只在M16中添加0.1mMolEDTA、0.5mMol牛磺酸、1000IU/mlrhLIF便可获得84%的囊胚率,同时证明在M16或mM16添加血清都会降低其体外发育率;PVA还不能有效的取代mM16、mKSOM中的血清。
- 淡新刚董雅娟柏学进马保华胡亮杨恕玲王雪红董方圆
- 关键词：小鼠体外培养
- 昆明小鼠胚胎干细胞的体外分离培养被引量：2
- 2006年
- 利用昆明小鼠13.5dpc的胚胎制备小鼠胚胎成纤维细胞,并以小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层;收集3.5dICR小鼠的囊胚和桑椹胚进行体外培养,筛选纯化ES细胞集落,使其稳定传代后,对其形态学和生物学性状进行初步鉴定,获得阳性细胞集落。
- 杨恕玲董雅娟柏学进程明李建栋王雪红董方圆
- 关键词：昆明小鼠胚胎干细胞饲养层
- 布莱凯特黑牛PDSS1基因单核苷酸多态性分析被引量：2
- 2013年
- 为研究布莱凯特黑牛PDSS1(decaprenyl diphosphate synthase subunit 1)基因与肉质性状的相关性,采用PCR-SSCP技术对96头布莱凯特黑牛进行单核苷酸多态性检测。经PCR-SSCP检测及克隆测序发现,布莱凯特黑牛PDSS1基因各扩增片段中,P4表现为AA、AB、BB 3种基因型,P9表现为CC、CD 2种基因型,且各存在1个SNP位点:第4个外显子122bp处发生A→G的碱基突变,并引起相应氨基酸的改变(N156S);第11个外显子6bp处发生C→T的碱基突变,但未引起氨基酸的改变。经肉质性状关联性分析发现,AA、AB、BB不同基因型间差异不显著(P>0.05),但AB型的综合肉质指标较好。研究表明,布莱凯特黑牛PDSS1基因各外显子核苷酸序列的稳定性极高;外显子4内的碱基突变可能会引起PDSS1蛋白质空间结构及功能的改变,但与肉质性状相关性不显著。
- 杨莉董雅娟柏学进牛召珊宋少康赵仕全张新浩
- 关键词：单核苷酸多态性肉质性状
- 小鼠MEF的制备及ES细胞的分离培养试验被引量：4
- 2005年
- 本试验采用两种方法制备小鼠胎儿成纤维细胞饲养层(mouse embryonic fibroblast, MEF),两种方法的差别在于用丝裂霉素-C(mitomycine-C,MMC)处理后,一种是用PBS-洗净MMC后直接使用;另一种是丝裂霉素-C处理后,用胰酶消化后重新接种,待细胞融合后再使用.将获得的小鼠胚胎直接接种在MEF上,分别在5～6d后取增殖的ICM团块,消化再接种培养,观察胚胎干细胞(embryonic stem cell, ES细胞)样集落的生长情况,并对获得的ES细胞样集落进行碱性磷酸酶(AKP)染色鉴定.结果发现两种处理方法得到的MEF培养体系均具有促进ES细胞增殖以及抑制ES细胞的分化的作用,而且得到的ES细胞样集落符合ES细胞的形态特征,AKP呈强阳性.采用本试验的第一种方法的优点是简化了胎儿成纤维细胞饲养层的制备过程,并且适合做ES细胞的饲养层.
- 杨恕玲董雅娟柏学进李建栋程明
- 关键词：小鼠MEFES细胞
- 小鼠MSCs体外定向诱导分化神经及脂肪细胞的研究被引量：5
- 2008年
- 【目的】建立昆明小鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养体系,并鉴定其定向诱导分化为神经及脂肪细胞的能力。【方法】采用贴壁培养法分离培养昆明小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),通过相差倒置显微镜对其进行形态学特征观察;通过碱性磷酸酶(AKP)染色、Hoechst 33258染色、瑞士-姬姆萨复合染色检测MSCs的表型特征;通过β-ME诱导MSCs定向分化为神经样细胞,诱导后的细胞进行H.E染色,观察其形态学特性;通过NF-200、NSE免疫荧光细胞化学方法对已分化的神经样细胞进行鉴定和分化率分析;通过马血清诱导MSCs定向分化为脂肪细胞,观察其体外生长过程,并对诱导后的脂肪细胞进行油红O染色鉴定和分化率分析。【结果】分离得到的MSCs为成纤维样细胞,可见多个核仁,AKP染色阳性率为93.2%±1.5%;β-ME诱导后,MSCs分化为多种表型的神经细胞与原代培养的小鼠全脑细胞的外形相似,诱导后的神经细胞NF-200、NSE免疫荧光细胞化学染色均呈阳性,NF-200阳性率为85.4%±1.8%,NSE阳性率为82.7%±2.1%;马血清诱导后,MSCs可100%分化为脂肪细胞,油红O染色为阳性。【结论】采用贴壁培养法能够成功分离和培养昆明小鼠的MSCs,分离得到的MSCs具有定向分化成多种神经细胞和脂肪细胞的能力。
- 赵兴柏学进封纪武董雅娟
- 关键词：小鼠诱导分化神经细胞脂肪细胞
