滕毅
- 作品数：4 被引量：10H指数：1
- 供职机构：四川大学华西公共卫生学院更多>>
- 发文基金：四川省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- TaqMan^(TM)实时荧光PCR快速检测蜡样芽胞杆菌的初步研究被引量：8
- 2006年
- 目的:建立实时荧光TaqM anTM定量检测蜡样芽胞杆菌的快速检测方法,为食品中蜡样芽胞杆菌污染的调查及食物中毒的快速准确定量检测提供手段。方法:通过分析蜡样芽胞杆菌16S rDNA、23S rDNA、16S-23S ITS、gyrB、groEL、cereolysin AB、HBL(hb lA、hb lC、hb lD)、NHE(nheA、nheC、nheD)、bce-T等目的基因,对比所选取的不同目的基因优缺点,最终选择合适的目的基因16S-23S ITS进行同源性分析,并根据GenBank公布的蜡样芽胞杆菌16S-23S ITS基因的保守序列,用引物与探针专业设计软件自行设计引物和TaqM anTM探针,并利用硅胶模型TM基因组DNA提取法制备DNA标准品,通过对TaqM anTM实时荧光PCR退火温度、探针浓度、引物浓度、Mg2+离子浓度、缓冲液浓度及酶用量等反应条件的优化,初步建立蜡样芽胞杆菌的实时荧光TaqM anTM快速定量检测方法,并利用该方法对模拟样品进行检测。结果:选取的16S-23S ITS基因同源性达到99%以上,特异性好;所有蜡样芽胞杆菌均含有两段16S-23S ITS基因,有利于提高反应的灵敏度。通过对各实验条件的优化,得出蜡样芽胞杆菌TaqM anTM实时荧光PCR的最佳反应条件,初步建立起实时荧光TaqM anTM定量检测蜡样芽胞杆菌的快速检测方法,该方法能在3 h左右完成整个检测过程。结论:实时荧光Taq-M anTM定量检测法不但灵敏度好,而且特异性高,检测时间短,能提高蜡样芽胞杆菌的检出率和检测准确性,可望应用于蜡样芽胞杆菌食物中毒的快速准确定量诊断。
- 沈圣余娟滕毅丁晓贝郑萍裴晓方
- 关键词：蜡样芽胞杆菌实时荧光PCR
- 淋球菌临床分离株外膜蛋白PI基因序列与耐药性关系初探被引量：1
- 2007年
- 目的研究成都地区淋球菌临床分离株PI基因序列与青霉素和四环素耐药性的关系。方法用T-A克隆的方法得到H基因克隆重组子，对PI基因测序后，用序列分析软件进行分析。同时测定青霉素和四环素对淋球菌的最低抑菌浓度，比较耐药性与PI基因序列的相关关系。结果成功克隆并测序淋球菌H基因，17条PI序列根据blastn结果可分为PIA和PIB两类。序列在影响淋球菌耐药性的第120和121位的氨基酸序列仅有部分发生单位点的D突变，未见文献报道的双位点D突变。5-9、6-1两条序列在120位发生K突变，且2株菌的耐药性均处于中等水平，与文献报道一致。结论成都地区淋球菌临床分离株外膜蛋白PI的序列与染色体介导的青霉素和四环素耐药性可能存在一定的相关关系，是否与肼基因序列120和121位氨基酸残基突变相关，还有待调查更多的临床分离株。
- 雍刚汪东篱滕毅沈圣邱晋谢志梅裴晓方
- 关键词：淋球菌耐药性
- 脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NspA基因重组的构建和表达被引量：1
- 2008年
- 目的构建脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NspA基因重组子,实现其在大肠杆菌的高效表达。方法提取脑膜炎奈瑟菌标准株基因组DNA,PCR扩增NspA基因,插入表达质粒载体pET-30c中,构建pET-NspA重组子,转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE和Western blot检测表达蛋白,镍琼脂糖凝胶纯化NspA融合蛋白。结果获得了脑膜炎奈瑟菌NspA基因的表达重组子,得到NspA诱导表达蛋白并进行了初步纯化。结论成功构建了脑膜炎奈瑟菌NspA基因的表达重组子,实现了该基因在大肠杆菌中的高效表达,为研究该蛋白的免疫学性能、制备抗体和研制预防脑膜炎的疫苗奠定了基础。
- 谢志梅占利滕毅陈恒叶盛许欣裴晓方
- 关键词：脑膜炎奈瑟菌蛋白质表达
- 临床淋病奈瑟菌外膜蛋白PⅠ基因重组质粒的构建与生物信息分析
- 2007年
- [目的]研究淋病奈瑟菌临床分离株外膜蛋白PⅠ基因的结构特点和变异情况,为淋球菌疫苗靶位点的选取提供参考。[方法]提取9株成都地区临床分离淋球菌的基因组,PCR扩增PⅠ基因,与表达载体pET-30b(+)构建重组质粒pET-30b(+)-PⅠ,重组子经双酶切鉴定后测序,利用一系列生物软件对序列进行生物信息学分析。[结果]重组子经双酶切后,在5400 bp和900 bp左右分别得到条带,与预期片断的大小相符合;各PⅠ序列在GeneBank中均搜索到相似性大于98.9%的相似序列,根据碱基数目及序列同源性比较结果,4条属于PⅠA亚型,5条属于PⅠB亚型;PⅠA亚型较PⅠB亚型(除2-7外)含有相对较高的α-螺旋和β-折叠结构,具有单一筒状的三级结构,而PⅠB亚型含有相对较高的环或其他结构,其中的7-2具有相连接的两筒状结构。[结论]成功构建9个pET-30b(+)-PⅠ重组子;PⅠA和PⅠB两亚型核苷酸数目、对应蛋白的二级结构和三级结构均有差异,两亚型内各核苷酸和氨基酸序列的变异程度也不同,本研究结果将为PⅠ蛋白抗原靶位的筛选提供参考。
- 滕毅汪东篱雍刚谢志梅陈恒叶盛裴晓方
- 关键词：淋球菌重组质粒生物信息分析
