温子禄
- 作品数：7 被引量：15H指数：2
- 供职机构：上海交通大学医学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项湖北省教育厅科学技术研究项目上海市科委国际合作基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 武汉地区结核分枝杆菌氨基糖苷类抗生素耐药分离株rpsL和rrs基因特征分析被引量：7
- 2011年
- 目的阐明武汉地区结核分枝杆菌分离株氨基糖苷类药物耐药相关基因rpsL和rrs的分子突变特征。方法从武汉医疗救治中心共收集69株结核分枝杆菌的临床菌株,包括耐链霉素(SM)菌株35株(其中4株同时对卡那霉素耐药)和SM敏感菌株34株(其中全敏感20株)。采用PCR直接测序法分析rpsL和rrs基因的分子突变特征。结果 35株SM耐药株中有26株(74.3%)检测到rpsL突变,突变位点集中在第43位和第88位密码子,并发现了1个新的突变类型Lys88Glu;13株耐药株(37.1%)检测到四种不同类型的rrs基因突变,分别为A1401G(17.1%,6/35)、A514C(14.3%,5/35)、G1487A(2.9%,1/35)和C517T(2.9%,1/35),1株全敏感菌株的rrs基因发生了C1029T突变。卡那霉素耐药株中只有3株检测到了rrs突变,并发现了一种rrs基因尚未见报道的G1487A突变类型。结论结核分枝杆菌对氨基糖苷类药物的耐药与rpsL和rrs突变相关,耐药基因突变类型存在地域差异。
- 温子禄沈建国张朝宝余晓丽陈平唐神结郭晓奎张舒林
- 关键词：结核分枝杆菌氨基糖苷类耐药RPSL基因
- XTT/mPMS组合显色系统用于抗分枝杆菌药物筛选的性能评估被引量：2
- 2013年
- 目的评估一种用于抗分枝杆菌药物高通量筛选的XTT/mPMS组合显色系统。方法评估XTT/mPMS系统的检测限、稳定性、细胞毒性、培养基组分干扰作用以及药物筛选试验的信噪比、Z'因子等性能指标,进行常用抗分枝杆菌药物最低抑菌浓度(MIC)测定,与刃天青显色法(resazurin microtitre assay,REMA)结果比较。结果 XTT/mPMS对分枝杆菌的检测下限为2.4×107CFU/mL,检测上限不同菌种在1.8×108～7.5×108CFU/mL之间。XTT/mPMS和7H9培养基37℃恒温共培养时至少在7 d内保持相对稳定。XTT/mPMS能与7H9-S培养基组分的营养添加剂(OADC)发生非细胞还原反应;其工作浓度(XTT 0.2 mmol/L,mPMS 0.04 mmol/L)对分枝杆菌具有低细胞毒性;XTT/mPMS检测的Z'因子均大于0.8,信噪比较低;分枝杆菌7H9-S液体培养MIC检测5～7 d(快生菌36～48 h)即可获得结果;MIC结果除M.tuberculosis的乙胺丁醇(EMB)有差异外基本与REMA法一致。结论 XTT/mPMS组合显色系统反应快速、稳定、低毒,适合于抗分枝杆菌药物高通量快速筛选。
- 张朝宝马峻温子禄玄松花周业成余晓丽孙战强张舒林王洪海
- 关键词：分枝杆菌最低抑菌浓度药物筛选
- 武汉地区结核分枝杆菌耐药分离株rpsL和rrs基因特征分析
- 目的阐明武汉地区结核分枝杆菌分离株氨基糖甙类药物耐药相关基因rpsL和rr5分子突变特征。方法收集2009年至2010年武汉医疗救治中心结核分枝杆菌分离株,进行一线及二线抗结核药物药敏实验。随机选取69株,包括:20株全...
- 温子禄张朝宝马峻赵俊伟郭晓奎王洪海张舒林余晓丽
- 关键词：结核分枝杆菌氨基糖甙类耐药RPSL
- 文献传递
- 16SrDNA-23SrDNA间隔区序列和16SrDNA基因在抗酸阳性菌菌种鉴定中的应用
- 背景:临床上应用萋-尼氏（Ziehl-Neelsen）染色方法检测临床标本或分离株,其中染色阳性的细菌统称为抗酸染色阳性菌（acid-fast bacteria）。临床上主要表现为结核分枝杆菌（Mycobacterium...
- 温子禄张朝宝余晓丽郭晓奎张舒林
- 文献传递
- 应用PCR-ELISA技术快速检测耐多药结核分枝杆菌
- 目的 集合PCR技术、微孔板杂交和酶联免疫显色三种检测技术于一体,建立一种针对耐多药(MDR)结核分枝杆菌进行耐药快速检测的新型实验室检测技术.方法 收集2009年至2010年武汉市医疗救治中心的结核分枝杆菌临床分离株,...
- 周业成温子禄郭晓奎王洪海杨志荣张颖张舒林
- 关键词：结核分枝杆菌耐多药利福平异烟肼PCR-ELISA
- 文献传递
- 武汉地区耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因突变分析被引量：4
- 2011年
- 目的探讨武汉地区结核分枝杆菌(MTB)利福平耐药株rpoB基因的突变特征。方法对76例MTB临床分离株包括rpoB核心区域81 bp碱基在内的428 bp碱基进行PCR测定,并进行DNA序列分析。结果 76例临床分离MTB中利福平耐药株56例,敏感株20例。耐药株中92.9%(52/56)存在突变,共涉及10个密码子的18种突变类型。531、526为常见突变位点,其突变率分别为57.7%(30/52)、19.2%(10/52);联合突变率为13.5%(7/52);同时发现了509位(AGC→AGA)新的突变类型和国内少见的517位CAG缺失类型。结论 rpoB基因突变在武汉地区利福平耐药MTB中广泛存在,并存在新的突变位点。
- 马峻温子禄张朝宝郭莉张舒林王洪海余晓丽
- 关键词：结核分枝杆菌RPOB基因DNA序列分析
- 结核分枝杆菌Rv1168c蛋白的基因表达、纯化及结构分析被引量：2
- 2010年
- 【目的】应用原核表达体系对结核分枝杆菌PPE蛋白家族Rv1168c进行高效表达,进一步进行蛋白纯化和结构分析。【方法】以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,扩增Rv1168c基因,构建pET32a-Rv1168c重组质粒;转化重组质粒到大肠杆菌DH5α并在BL21(DE3)诱导表达,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺电泳(SDS-PAGE)鉴定Rv1168c在大肠杆菌中的表达情况;Ni-NTAHis﹡Bind Resin纯化重组蛋白Rv1168c;SDS-PAGE和质谱分析测定相对分子量后,用圆二色光谱(CD)和同源模建方法分析和检测重组蛋白Rv1168c的二级和三级结构。【结果】成功克隆了971bp的目的基因Rv1168c,并获得了高纯度的重组蛋白Rv1168c。重组蛋白的分子量为51.5kDa(含载体蛋白)。25℃时重组蛋白Rv1168c的二级结构包括34.4%α螺旋,33.7%β转角,31.9%无规则卷曲,它的三维模型显示为(β/α)5结构。【结论】成功得到高纯度的重组目的Rv1168c蛋白,并初步进行了结构分析,为进一步对Rv1168c结构和功能研究奠定了基础。
- 余晓丽孙战强周晨俊温子禄陈军孙庆文王洪海张舒林
- 关键词：结核分枝杆菌基因表达蛋白纯化圆二色谱
