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慢病毒介导的shRNA靶向干扰β-catenin神经母细胞瘤稳定细胞株的建立被引量：4: 2013年; 目的建立稳定抑制β-catenin基因表达的人神经母细胞瘤BE2C细胞株，为探讨Wnt／β-catenin信号在神经母细胞瘤发生中的作用提供细胞模型。方法使用Real-timePCR、Westernblot的方法检测BE2C细胞中β-eatenin在基因及蛋白水平的表达。于β-catenin基因编码区选择4个siRNA靶点及1个非编码序列（NC）合成5对shRNA干扰序列，分别与质粒PgLV-H1-GFP＋Puro载体连接，构建重组质粒；将重组质粒与慢病毒包装质粒共转染BE2C细胞，筛选出干扰效果最佳的shRNA序列，经嘌呤霉素筛选并扩大培养后得到稳定克隆株。RT-PCR、Westernblot检测干扰组peatenin^0制效率。结果RT-PCR、Westernblot检测显示BE2C细胞中pcatenin在基因及蛋白水平均有较好的表达；慢病毒的滴度达到1×108TU／m1时，侵染BE2C细胞的效率可达到90％左右；通过RT-PCR和Westernblot检测结果显示G1为最有效的干扰靶点；通过嘌呤霉素筛选得到稳定靶向干扰β-catenin细胞株，抑制效率可达约90％。结论成功构建了伊cateninshRNA慢病毒表达载体，建立了稳定抑制pcatenin基因表达的人神经母细胞瘤BE2C细胞株，为进一步研究β-eatenin在神经母细胞瘤发生中的作用提供了可靠的细胞模型。; 姚伟李凯徐挺肖现民王作鹏; 关键词：神经母细胞瘤慢病毒属

普萘洛尔对婴幼儿血管瘤内皮细胞增殖与凋亡的作用被引量：8: 2013年; 目的研究普萘洛尔对体外培养的婴幼儿血管瘤内皮细胞（HemECs）增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法组织块法贴壁法原代培养、流式分选婴幼儿HemECs。采用Cell Counting Kit（CCK-8）法检测细胞活性变化，BrdU标记法检测细胞增殖状态。采用AnnexinV-FITC／PI双染流式细胞仪术与Hoechst33342荧光染色检测与观察细胞凋亡情况。应用Western印记法检测VEGF与bFGF表达，分光光度法检测Caspase-3、Caspase-8及Caspase-9的相对活性。结果与对照组相比，低剂量普萘洛尔（〈50t^mol／L）对HemECs的活性无明显影响，而100tLmol／L普萘洛尔作用24h能显著降低细胞活性至48％左右。100tanol／L普萘洛尔作用24h后，HemECs的增殖受到明显抑制，细胞早期凋亡（33．5±2．9）％较对照组的（10．7±3．2）％显著增高（P〈0．01），出现典型的凋亡细胞核形态学变化。此外，普萘洛尔能显著抑制细胞内VEGF与bFGF的表达，激活凋亡蛋白Caspase-3与Caspase-9，而对Caspase-8活性无明显影响。结论普萘洛尔对体外培养的HemECs具有明确的抗增殖、促凋亡作用，其机制可能与普萘洛尔抑制HemECs中VEGF与bFGF的表达、激活内源性凋亡通路有关。; 吉毅肖现民李凯郑珊徐挺陈思源; 关键词：血管瘤内皮细胞普萘洛尔

胚胎干细胞基因Oct-4在神经母细胞瘤组织中的表达及意义被引量：1: 2012年; 目的探讨神经母细胞瘤组织中胚胎干细胞基网Oct-4的表达情况及其意义。方法收集39例神经母细胞瘤和相应癌旁组织，应用实时定量PCR和Western印迹法检测Oct-4的表达，并分析其表达与临床病理参数的相关性。结果术前未化疗的神经母细胞瘤Oct-4的mRNA相对表达量为6．53±1．74，明显强于瘤旁组织1．04±0．65，两组间差异有统计学意义（P〈0．05）；其中Ⅲ～Ⅳ期肿瘤Oct-4mRNA相对表达量8．81±0．67较Ⅰ～Ⅱ期肿瘤4．26±0．54高，差异有统计学意义（P〈0．05）。Ⅲ～Ⅳ期肿瘤中术前未化疗的Oct4mRNA相对表达量8．81±0．67明显高于术前化疗的肿瘤3．15±0．42（P＜0．05）。神经母细胞瘤Oct-4表达与患儿性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、病理分型等参数无相关性。结论Oct-4可能与神经母细胞瘤的发生、发展相关，化疗药物的使用对其表达有抑制作用。; 杨少波郑继翠肖现民郑珊徐挺; 关键词：神经母细胞瘤

胚胎干细胞基因OCT-3／4及SOX2与神经母细胞瘤关系的研究进展被引量：1: 2011年; Oct-3／4和Sox2是一类胚胎转录调控基因，是调控胚胎发育的关键因子，在早期胚胎发育过程中对维持胚胎干细胞多潜能性和自我更新的能力具有关键性的调控作用。干细胞与肿瘤细胞有很多相似之处，其中最主要的一点就是都具备自我更新和增殖分化的能力。近年来，已有研究证实Oct-3／4和SOx2在多种肿瘤中存在异常表达，在肿瘤的发生发展过程中起重要作用。; 杨少波郑继翠肖现民郑珊徐挺; 关键词：神经母细胞瘤细胞基因胚胎发育过程调控基因

PI3K／Akt信号通路的异常活化对婴幼儿血管瘤内皮细胞凋亡的抑制作用被引量：5: 2014年; 目的对比婴幼儿血管瘤内皮细胞（HemEC）与普通的脐静脉内皮细胞（HUVEC）中PI3K／Akt信号通路活化状态，探讨其对HemEC凋亡的影响与机制。方法无血清培养环境下诱导血管内皮细胞凋亡。应用Annexinv／PI双染流式细胞仪术、Hoechst33342与TUNEL荧光染色检测观察细胞凋亡的状态。采用Westernblot技术检测VEGF、Akt与磷酸化Akt在HemEC和HU-VEC中的表达或活化状态。应用PBK抑制剂LY294002处理血清饥饿的血管内皮细胞，观察其对细胞凋亡的影响。结果无血清培养12h后，可见HUVEC凋亡明显较对照组增多（P〈0．05）；而HemEC凋亡增多不明显（P〉0．05）。无血清培养24h或48h后，HemEC中出现增多的凋亡细胞，但显著低于HUVEC（P〈0．05）。Westernblot检测发现，与HUVEC相比，HemEC中Akt的活性显著升高。使用LY294002抑制HemEC中PBK／Akt的活性后，HemEC凋亡率显著升高（P〈0．05），而LY294002对HUVEC凋亡的影响不明显（P〉0．05）。结论在离体细胞实验条件下，异常活化的PI3K／Akt信号通路能显著抑制缺血环境下的HemEC发生自发性凋亡。; 吉毅陈思源李凯肖现民郑珊徐挺; 关键词：血管瘤内皮细胞磷脂酰肌醇-3-激酶蛋白激酶细胞凋亡

普萘洛尔治疗婴幼儿血管瘤被引量：6: 2010年; 血管瘤是婴幼儿期间最常见的良性肿瘤，婴幼儿发病率为10％左右，在低体重的早产儿中发病率更高。婴幼儿血管瘤有自限性特点，大部分可自行消退，但位于特殊部位以及其他可能引起严重并发症的血管瘤需要积极干预治疗。最近文献陆续报道了普萘洛尔（心得安）治疗婴幼儿血管瘤的良好效果，本文就普萘洛尔治疗的相关问题做一综述。; 徐挺肖现民; 关键词：婴幼儿血管瘤干预治疗普萘洛尔良性肿瘤

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徐挺

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