孙宪锋
- 作品数：5 被引量：46H指数：3
- 供职机构：中国预防医学科学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 人朊病毒多肽抗体的制备及应用被引量：13
- 2000年
- 目的 利用人工合成人朊病毒蛋白(PrP)多肽制备特异性抗PrP抗体,以期用于朊病毒相关疾病的临床诊断。方法 根据PrP基因编码的氨基酸序列合成多肽,与载体偶联后免疫动物,所制备的抗血清用ELISA及Westernblot鉴定。结果 ELISA检测表明所制备的抗血清可同多种PrP发生阳性反应;Westernblot结果显示抗血清可与正常组织PrPc和病理组织的PrPsc反应;用蛋白酶K处理,可鉴别二者。此外,人、小鼠和兔的脑组织细胞膜提取物在Westernblot中显示一相对分子质量约30×103的条带,而相应肝、脾细胞膜提取物中无此条带出现。结论 所制备的PrP多肽抗血清可识别正常的PrPc和病理的PrPsc,合成肽抗原是制备抗朊病毒PrP抗体的一条有效的途径,可用于临床病例的检测。
- 孙宪锋董小平张宝云周伟王长安赵同兴洪涛
- 关键词：朊病毒多肽抗体病毒
- 人PrP特异性多肽抗体的鉴定和应用被引量：3
- 2001年
- 目的 为了进一步检测制备的人PrP特异性多肽抗体的免疫反应性和特异性。方法 构建人PrPN端缺失原核表达质粒 ,表达并纯化N端缺失的PrP蛋白 ;Westernblot检测多肽抗体与纯化的各种人全长、N端缺失以及C端缺失PrP蛋白的反应能力 ;免疫荧光法检测多肽抗体与真核表达的人PrP蛋白反应能力 ;提取Creutzfeldt Jakob病 (CJD)病人以及Scrapie感染的仓鼠脑组织 ,Westernblot检测多肽抗体与致病性PrP res蛋白的反应能力。结果 所制备的PrP多肽抗体能与原核及真核细胞表达的各种不同长度的PrP蛋白反应 ,同时还能特异性识别Scrapie感染鼠脑组织中和CJD病人脑组织中的PrP res蛋白。结论 多肽抗体具备良好的免疫反应性和特异性 。
- 孙宪锋董小平张宝云张福萍周伟洪涛
- 关键词：羊瘙痒病
- 14-3-3蛋白多克隆抗体的制备和应用被引量：3
- 2000年
- 目的 制备 14 3 3特异性抗体并试用于朊病毒病患者脑脊液标本检测。方法 以原核细胞表达的谷光甘肽 S 转移酶 (GST) 14 3 3蛋白为抗原 ,免疫家兔。用酶联免疫吸附测定法(ELISA)及Westernblot方法检测制备的抗血清效价和特异性。结果 ELISA检测显示所制备的抗体与纯化的GST 14 3 3蛋白反应效价为 1∶40 96 0 0 0 ;Westernblot结果证实所制备的抗体可有效识别原核细胞表达的及脑组织提取物中存在的 14 3 3蛋白。对 2例具有较为典型脑电图改变、临床可疑诊断为克罗伊茨费尔特 雅各布病 (Creutsfeldt Jacobdisease,CJD)病人的脑脊液检测发现其 14 3 3蛋白为阳性 ;另外 4例伴有痴呆、昏迷症状病人脑脊液 14 3 3蛋白为阴性 ,其中 3例进行的脑组织活检显示致病性朊蛋白 (PrPSc)阴性 ,无典型CJD病理改变 ;其余 2 4例无痴呆症状的脑炎及脑病病人脑脊液 14 3 3蛋白均为阴性。以上结果与用标准 14 3 3抗体所获结果完全吻合。结论 利用原核细胞表达的GST 14 3 3蛋白可有效地诱导免疫动物产生特异性抗体 ,所制备的抗体可用于CJD病人脑脊液 14 3 3蛋白的检测。
- 张福萍董小平孙宪锋周伟赵同兴洪涛
- 关键词：蛋白类朊病毒病脑脊髓液多克隆抗体
- 羊瘙痒因子263K毒株感染金黄地鼠后鼠脑组织中检出PrP-res蛋白及其神经病理学研究被引量：28
- 2001年
- 羊瘙痒病是累及山羊及绵羊的可传播海绵状脑病。为了观察羊瘙痒因子 (Scrapie)的病原特征及病理组织改变特点 ,将羊瘙痒因子 2 6 3K毒株颅内接种至金黄地鼠。经过 81～ 110天的潜伏期 ,89%的动物发病 (17/19只 )。对发病地鼠的神经病理学检测发现 ,海绵状空泡变性的检出率为 5 9% ,淀粉样斑的检出率为 17 6 %。利用免疫组化和蛋白酶消化后的Westernblotting检测证实 ,10 0 %的发病地鼠的脑组织中都出现蛋白酶抗性朊蛋白 (PrP res)。17只发病地鼠脑组织提取物中 ,PrP res的泳动位置和分子量大小完全一致 ,出现两条分子量在 2 5kD～ 31kD的反应带。尝试应用快速玻片印迹法检测病变组织中的PrP res,结果显示 ,与常规固定包埋切片的免疫组化检出效果相似。这提示脑组织印片法可成为临床检测克 雅氏病 (Creutzfeldt Jacobdisease ,CJD)患者脑组织活检标本中PrP res的快速、有效的方法。羊瘙痒因子 2 6 3K成功感染金黄地鼠再次证明 ,金黄地鼠是TSE感染因子良好的动物模型 ,发病率高 ,潜伏期短 ,发病动物PrP res的检出率明显高于典型病理改变的检出率。新生成的PrP res的电泳类型与接种的TSE因子有关 ,与宿主的个体差异无关 ,提示TSE感染因子的确存在“株”的现象。
- 孙宪锋董小平张宝云侯星生胥爱源赵同兴洪涛
- 关键词：羊瘙痒病
- 人朊蛋白基因外显子Ⅰ及其上游序列具有启动子样活性被引量：3
- 2000年
- 目的 鉴定朊蛋白 (PrP)基因转录启动子位置。方法 利用聚合酶链反应 (PCR)扩增人PrP基因外显子Ⅰ及其上游序列 ,序列鉴定后插入CAT报道质粒pBL CAT6 ,分别转染HeLa、COS7和Sh sy5y细胞系 ,检测CAT表达值 ;提取三种细胞蛋白 ,以条带移动实验检测细胞转录激活因子SP1含量。结果 人PrP基因外显子Ⅰ及其上游序列为GC富含 ,带有多个SP1可能性结合位点 ,但无明显TATA盒 ;瞬时转染结果显示这段序列可诱导 2～ 3倍的CAT表达增强 ;定量移动条带实验证明HeLa细胞中含有较高浓度的SP1,而COS7和Sh sy5 y细胞中SP1含量极低。结论 人PrP基因外显子Ⅰ及其上游序列具有启动子样功能 ,为弱的非TATA盒启动子 ;不同组织来源的细胞中SP1含量不同 ,在神经细胞系Sh
- 孙宪锋董小平周伟洪涛
- 关键词：朊蛋白基因转染
