吕彤
- 作品数：9 被引量：13H指数：2
- 供职机构：中国科学院天津工业生物技术研究所更多>>
- 发文基金：中国科学院科研装备研制项目天津市科技支撑计划中国科学院知识创新工程重要方向项目更多>>
- 相关领域：生物学环境科学与工程轻工技术与工程农业科学更多>>
- 烯酮还原酶基因的克隆与优化表达被引量：6
- 2011年
- 烯酮/酯还原酶可以专一性地还原烯酮/酯中的碳碳双键,并引入两个手性中心,是手性化合物生物催化合成的重要酶类之一;在使用烯酮/酯还原酶进行全细胞手性分子生物催化合成中,其他还原酶的存在常导致副反应的产生.为研究烯酮/酯还原酶的理化性质、底物的专一性、产物的手性特点等,需要经过纯化的烯酮/酯还原酶.为此,根据烯酮还原酶(Enoate reductase,ERs,EC 1.3.1.31)的基因序列设计引物,以丙酮丁醇梭菌(Clostridium acetobutylicum)ATCC824基因组DNA为模板,通过PCR扩增技术得到了目标酶的基因,目的片段全长为1 995 bp,共编码664个氨基酸,相对分子质量为73×103.将烯酮还原酶基因连接到pET-32a(+)上,构建表达质粒pET-32a(+)-ERs,并成功在Escherichia coli Rosetta(DE3)pLysS中表达.在摇床上优化的表达条件为:诱导温度为18℃,诱导起始时菌体D600 nm为0.6～0.8,转速为100 r/min,诱导剂IPTG浓度为0.1 mmol/L,诱导培养时间为12 h,表达的烯酮还原酶大部分以可溶性形式存在于菌体内.
- 吕彤刘扬赵青任杰王敏吴洽庆朱敦明
- 关键词：丙酮丁醇梭菌
- 生防菌枯草芽孢杆菌B073抗热保护剂的研究
- 该文研究了在高温条件下,筛选适合枯草芽孢杆菌B579喷雾干燥的抗热保护剂的方法.通过单因素试验确定了影响枯草芽孢杆菌存活的相关因素.用响应面试验对保护剂的复配进行了优化,结果表明可溶性淀粉、糊精、蔗糖、谷氨酸钠对枯草芽孢...
- 王雪莲王敏张朝正吕彤
- 关键词：枯草芽孢杆菌响应面法耐热性喷雾干燥生防菌
- 文献传递
- 毕赤酵母液滴微流控高通量筛选方法的建立与应用被引量：7
- 2019年
- 巴斯德毕赤酵母是当前应用最为方便和广泛的外源蛋白表达系统之一,为了进一步提高其表达外源蛋白的能力,文中建立了基于液滴微流控的毕赤酵母高通量筛选方法,并以木聚糖酶融合荧光蛋白为例,筛选获得木聚糖酶表达和分泌能力提高的突变株。通过PCR扩增得到木聚糖酶xyn5基因和绿色荧光蛋白gfp基因融合片段,并克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中构建出木聚糖酶融合绿色荧光蛋白的质粒pPIC9K-xyn5-gfp,电转化至毕赤酵母GS115中得到表达木聚糖酶和绿色荧光蛋白的毕赤酵母SG菌株。该菌株经过常压室温等离子体诱变后进行单细胞液滴包埋,液滴培养24h后进行微流控筛选,获得高表达木聚糖酶的突变菌株,进而用于下一轮的诱变突变库构建和筛选。以此类推,经过5轮液滴微流控筛选,获得一株高产菌株SG-m5,其木聚糖酶活为149.17U/mg,较出发菌株提升300%,分泌外源蛋白的能力较出发菌株提高160%。文中建立的毕赤酵母单细胞液滴微流控高通量筛选方法能达到每小时10万菌株的筛选通量,筛选百万级别的菌株库仅需10h,消耗荧光试剂体积100μL,对比传统的微孔板筛选方法降低试剂成本近百万倍,为高效、低成本筛选获得表达和分泌外源蛋白能力提高的毕赤酵母提供了一条新途径。
- 吕彤涂然袁会领刘浩王钦宏
- 关键词：毕赤酵母高通量筛选单细胞蛋白分泌
- 基于液滴微流控芯片的毕赤酵母高通量筛选方法
- 本发明属于微生物生物技术领域，涉及一种基于液滴微流控芯片的毕赤酵母高通量筛选方法，所述筛选方法包括如下步骤，步骤1、构建毕赤酵母菌株；步骤2，毕赤酵母菌株突变体库；步骤3，对毕赤酵母菌株突变体库种的菌株进行单液滴包埋和液...
- 涂然王钦宏吕彤
- 文献传递
- 硝化细菌的高通量检测和分离方法
- 本发明公开了一种硝化细菌的高通量检测和分离方法。本发明提供了一种富集和/或分离硝化细菌的方法：将菌液样本依次进行分散处理和稀释；将稀释液分别接种于NOB培养基和AOB培养基进行培养，然后检测培养体系中的氨氮含量、亚硝酸态...
- 涂然吕彤王钦宏
- 文献传递
- 胺脱氢酶突变体及其在手性胺合成中的应用
- 本发明公开提供了一种胺脱氢酶突变体，所述的胺脱氢酶突变蛋白与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有至少90%同一性，且所述突变蛋白具有催化羰基还原物与氨反应合成手性胺类化合物的能力，特别是合成（2R,3R）‑3‑氨基...
- 朱敦明吴洽庆吕彤罗宇阳陈曦冯进辉马延和
- 硝化细菌的高通量检测和分离方法
- 本发明公开了一种硝化细菌的高通量检测和分离方法。本发明提供了一种富集和/或分离硝化细菌的方法：将菌液样本依次进行分散处理和稀释；将稀释液分别接种于NOB培养基和AOB培养基进行培养，然后检测培养体系中的氨氮含量、亚硝酸态...
- 涂然吕彤王钦宏
- 胺脱氢酶突变体及其在手性胺合成中的应用
- 本发明公开提供了一种胺脱氢酶突变体，所述的胺脱氢酶突变蛋白与SEQ ID NO.:1所示的氨基酸序列具有至少90%同一性，且所述突变蛋白具有催化羰基还原物与氨反应合成手性胺类化合物的能力，特别是合成（2<I>R</I>,...
- 朱敦明吴洽庆吕彤罗宇阳陈曦冯进辉马延和
- 基于液滴微流控芯片的毕赤酵母高通量筛选方法
- 本发明属于微生物生物技术领域，涉及一种基于液滴微流控芯片的毕赤酵母高通量筛选方法，所述筛选方法包括如下步骤，步骤1、构建毕赤酵母菌株；步骤2，毕赤酵母菌株突变体库；步骤3，对毕赤酵母菌株突变体库种的菌株进行单液滴包埋和液...
- 涂然王钦宏吕彤
- 文献传递
