刘永奎
- 作品数：13 被引量：61H指数：5
- 供职机构：中国水产科学研究院珠江水产研究所更多>>
- 发文基金：公益性行业(农业)科研专项国家现代农业产业技术体系建设项目农业科技跨越计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 草鱼呼肠孤病毒HZ08株的分离与鉴定被引量：27
- 2010年
- 从浙江省湖州地区采集发病草鱼(Ctenopharyngodon idellus)样本中,取症状明显病料的肝、脾、肾组织,经过滤除菌处理后接种草鱼肾脏细胞(CIK)。盲传8代,CIK细胞未出现明显细胞病变,但感染细胞固定后经电镜观察发现,细胞质内有大量病毒聚集,病毒无囊膜,近球形,直径约70nm,形态与已报道的草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,GCRV)相似。将病毒提纯后分别经DNA酶、RNA酶和绿豆核酸酶消化,证实为双链RNA(dsRNA)病毒。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示,病毒基因组由11个dsRNA组成,呈现水生呼肠孤病毒基因组典型特征。采用RNA水平3'末端加接头的方法获得了S6节段的全长序列,测序结果表明,S6由2030个核苷酸组成,推测其编码一个分子量约为68.4kD的蛋白。聚类分析结果显示,该病毒为水生呼肠孤病毒,但在氨基酸水平上与草鱼呼肠孤病毒代表株873株的差异较大,同源性为33%,提示该病毒为一株新型的草鱼呼肠孤病毒。本研究旨在为草鱼出血病防治方法的深入研究奠定基础。
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- 关键词：草鱼呼肠孤病毒病毒分离病毒鉴定
- 草鱼呼肠孤病毒JX-0902株的分离和鉴定被引量：14
- 2011年
- 收集江西南昌地区患典型草鱼出血病的病鱼组织,进行超薄切片电镜观察,结果显示,在脾、肾样品中发现大量病毒颗粒,病毒无囊膜,近球形,直径约70 nm,形态与已报道的草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)相似。取病鱼肌肉、内脏研磨,组织液经离心、过滤除菌后进行鱼体人工感染试验和细胞感染实验,结果发现,人工感染试验鱼出现死亡,且具有典型出血症状;组织滤液感染草鱼肾细胞系(CIK)细胞后,盲传6代未观察到典型细胞病变效应,但感染细胞固定后经超薄切片电镜观察,细胞质内有大量病毒存在,与病鱼组织切片观察到的病毒形态一致。SDS-PAGE结果进一步揭示,新分离病毒株(暂命名JX-0902)基因组由11条dsRNA组成,呈现水生呼肠孤病毒基因组典型特征,但基因组带型与GCRV 873株存在差异,而与HZ08株接近。根据GenBank上已提交的草鱼呼肠孤病毒S6序列(GQ896337)设计特异引物,以JX-0902株的cDNA作为模板,可扩增出特异性条带。基于S6序列的聚类分析结果显示,JX-0902与GCRV HZ08株、GD108株S6同源性高达98%、99%,该分离株应为草鱼呼肠孤病毒。
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- 关键词：草鱼出血病呼肠孤病毒
- 区域草鱼呼肠孤病毒引发出血病的风险评估研究
- 草鱼出血病是一种发病率高、致死率高、严重危害当年草鱼种及二龄草鱼的病毒性疾病，其病原为草鱼呼肠孤病毒。引发草鱼出血病的因素很多，为了消除或降低该病发生的可能性或者减少其发生时造成的损失，本研究以江西省南昌市及周边地区为基...
- 刘永奎
- 关键词：草鱼出血病呼肠孤病毒风险评估综合评分法
- 文献传递
- 草鱼呼肠孤病毒分离株HZ08基因组L节段的全长克隆与序列分析被引量：3
- 2011年
- 从浙江省湖州地区采集发病草鱼(Ctenopharyngodon idellus)样品,取症状明显病鱼的肝、脾、肾组织,经过滤除菌处理后接种草鱼肾脏细胞(CIK)进行病毒分离。盲传8代,CIK细胞未出现明显细胞病变,但感染细胞固定后经电镜观察发现,细胞质内有大量病毒聚集,病毒无囊膜,近球形,直径约70nm,形态与已报道的草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,GCRV)相似。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示,病毒基因组由11个dsRNA组成,呈现水生呼肠孤病毒基因组典型特征。为了从分子水平上进一步了解该病毒的特性,应用单引物扩增技术获得了该病毒基因组L节段的全长。序列分析结果表明:完整的L1、L2、L3节段分别由3 927、3 870、3 753个碱基对组成,每个节段正链RNA仅含有1个开放阅读框,通过同源性比较,推测分别编码病毒的结构蛋白VP1、VP2、VP3,其中VP1推测为病毒RNA转录的鸟苷酸转移酶和甲基化酶,VP2为病毒的RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp),VP3为病毒NTP酶及解旋酶。3个推测结构蛋白的序列与GCRV 873株的同源性最高,分别为31%、45%、36%,并且具有与其他呼肠孤病毒相同的基序(motif)。各节段都具有相同的5'端和3'端保守序列,即5'-GUAAUUU......UUCAUC-3'。利用RdRp构建系统进化树,HZ08株与水生呼肠孤病毒聚为一簇,但单独列为1支,应为水生呼肠孤病毒属新成员。
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- 关键词：草鱼呼肠孤病毒
- 一株草鱼呼肠孤病毒弱毒株的分离、鉴定及免疫原性初步分析被引量：32
- 2011年
- 从江西南昌患出血病草鱼体内分离出的草鱼病毒(暂命名为JX09-01)能使草鱼肾脏细胞(CIK)、草鱼肝细胞(L8824)、草鱼吻端成纤维细胞(PSF)产生明显的细胞病变效应(CPE)。感染CIK细胞固定后经电镜观察,发现细胞质内有大量病毒聚集,形态和排列方式与已报道的草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)相似。针对GCRV 873株S6基因设计的简并引物可以从病料组织和感染细胞中扩增出目的条带,而针对GCRV HZ08株S6基因设计特异性引物未能扩增出目的条带。对JX09-01株的S6全基因进行序列分析表明,其核苷酸序列同GCRV 873株和HZ08株的同源性分别是99.3%和30.4%,推导出的氨基酸序列同源性分别是98.6%和30%,说明草鱼病毒JX09-01株为草鱼呼肠孤病毒。用JX09-01株接种当年8—10 cm左右的草鱼,没有明显的临床症状,不能致草鱼死亡。用传代至15代的CIK细胞病毒液进行免疫保护试验,结果显示其对强毒株的免疫保护率达到86.7%。实验结果初步显示,新分离到的JX09-01为草鱼呼肠孤病毒弱毒株,可作为弱毒疫苗的候选毒株。
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- 关键词：草鱼呼肠孤病毒免疫原性
- 草鱼呼肠孤病毒JX-NC09株的分离和鉴定
- 2009年9月下旬江西省南昌市一龄、二龄草鱼大面积暴发出血病,在排除细菌和寄生虫感染可能性后,取具有典型症状的病鱼组织进行电镜观察,在脾、肾样品中发现大量病毒颗粒,病毒无囊膜,近球形,直径约70nm,形态与已报道的草鱼呼...
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- 关键词：草鱼呼肠孤病毒
- 草鱼呼肠孤病毒NC09株的分离、鉴定及分子生物学检测方法建立
- 江西省是我国草鱼养殖主产区之一,每年5月份至10月份一龄及二龄草鱼种因暴发出血病而给渔民带来了巨大损失.为了最终实现对该病进行防控的目的,对病原的鉴定及检测方法的建立是最基础也是最重要的环节.本人手2009年9月下旬在江...
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- 关键词：草鱼呼肠孤病毒
- 草鱼呼肠孤病毒HZ08株VP4蛋白多克隆抗体的制备及其特性分析
- 目的：表达草鱼呼肠孤病毒(GCRV)HZ08株VP4蛋白及制备VP4蛋白高效价多克隆抗体并对其特性进行初步分析。方法：采用PCR方法扩增草鱼呼肠孤病毒HZ08株s6基因(表达VP4蛋白)部分节段，经BamHI和Xho I...
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- 关键词：草鱼呼肠孤病毒蛋白基因多克隆抗体
- 草鱼呼肠孤病毒HZ08株S4基因序列分析被引量：4
- 2012年
- 草鱼呼肠孤病毒HZ08株是本实验室从患出血病草鱼体内分离到的一个新毒株,已完成部分基因序列的分析,其氨基酸序列的同源性和873株相比,仅为20%～30%之间。因序列差异较大,无法通过设计特异性引物来扩增和分析其基因序列,采用单引物扩增技术,对HZ08株S4基因进行序列分析表明:S4全长为2263 bp,最大的ORF编码717个氨基酸,推导出其表达的蛋白约为79 kDa。正如其他基因节段,基因末端也含有保守碱基序列5'(GUAAUUU…UUCAUC),3'。S4基因推导的氨基酸序列与同宿主的其他呼肠孤病毒的非结构蛋白NS1同源性最大,其次是和哺乳动物正呼肠孤病毒的非结构蛋白mu-NS以及禽呼肠孤病毒非结构蛋白NS1同源性较大,表明S4可能表达细胞骨架相关蛋白。基于S4推导出的氨基酸序列构建的系统进化树HZ08株单独作为一个分支,与同宿主的其他呼肠孤病毒亲缘关系比较近,而与其他呼肠孤病毒则相对较远。这提示HZ08株可能是多个毒株的遗传信息经长期的遗传进化而得,综合其它已知序列信息,推测HZ08株可能为呼肠孤病毒的一个新成员。
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- 关键词：草鱼呼肠孤病毒遗传进化树
- 草鱼呼肠孤病毒NC09株的分离、鉴定及分子生物学检测方法建立
- 刘永奎王庆石存斌曾伟伟吴淑勤
- 关键词：草鱼呼肠孤病毒
