刘忠泉
- 作品数：116 被引量：258H指数：8
- 供职机构：首都医科大学附属北京胸科医院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 脊柱结核脓液中结核杆菌的复苏培养被引量：10
- 2007年
- 目的:探讨结核杆菌复苏因子(rpf)对脊柱结核脓液中结核杆菌生长的影响。方法:由宁夏医学院第一附属医院骨科提供的临床诊断为脊柱结核的住院患者手术获取的脓液标本25份,氢氧化钠溶液常规处理后,每份标本分为低浓度培养组、高浓度培养组和对照组。高浓度和低浓度组各设6管,分别含高、低两种浓度的rpfA、B、C、D、E及各种复苏因子组合,每管中加入7ml7H9液体培养基,并加入处理后的标本和相应的rpf;对照组1管,不加rpf。37℃培养,分别在第6天、第11天、第16天、第30天检测培养物600nm处的吸光度(OD值),同时于上述各时间点每管取10!l培养物涂7H11平板培养,取第30天培养物行抗酸染色检查,以证实培养物为结核杆菌。同时将处理后的脓液标本进行集菌法涂片抗酸染色和改良罗氏培养检测结核杆菌。结果:结核杆菌复苏培养阳性率(84%)显著高于涂片阳性率(60%)和改良罗氏培养阳性率(44%)(P<0.05或0.01)。复苏培养低浓度各组与高浓度各组在培养第11天、第16天和第30天时培养物OD值均显著高于对照组(P<0.05);复苏培养同一组内第11天、第16天和第30天时培养物OD值均显著高于第6天(P<0.01),而第16天和第30天与第11天比较无显著性差异(P>0.05);对照组第11天、第16天和第30天培养物OD值与第6天比较均无显著性差异(P>0.05);同一时间、同一浓度时,5种复苏因子单独应用与联合应用之间两两比较,除高浓度rpfA、B在培养第30天时分别与同一浓度、同一时间的rpfC、D、E和组合组之间及rpfA与B之间比较有显著性差异(P<0.05)外,其余均无显著性差异;同一种复苏培养,在同一时间高、低浓度比较,第30天时高浓度rpfA、B的OD值高于低浓度rpfA、B(P<0.05),低浓度rpfD高于高浓度rpfD(P<0.05),其余均无显著性差异。11例改良罗氏培养阳性和21例复苏培养阳性者的培养生长物抗酸染色检查均为抗酸杆菌,复苏�
- 刘忠泉张宗德邢爱英马俊陈曦李自慧古淑香贾红艳杜博平马玙
- 关键词：脊柱结核结核杆菌
- 结核分枝杆菌rv3873基因原核表达载体的构建、表达和纯化被引量：1
- 2007年
- 目的构建结核分枝杆菌（M．tb）rv3873基因原核表达载体并进行表达。方法用聚合酶链反应（PCR）扩增MTBrv3873基因，并克隆入pGEM～TEasy质粒。测序正确后，再亚克隆入pET30a（＋）质粒，构建pET30a（＋）：rv3873重组体。结果以重组体分别转化DH5a和BL21（DE3）菌后，经0．4mmol／L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导，pET30a（＋）：rv3873表达出相对分子质量为47000左右的重组蛋白。SDS-PAGE分析显示，IPTG诱导4h重组蛋白的表达量最高。表达蛋白以包涵体形式存在于胞质中，表达量占全菌蛋白质的50％，Westernblot证实其具有良好的抗原性。经Ni-NTA柱纯化，获得纯度为90％的重组蛋白。结论成功地构建原核表达载体pET30a（＋）：rv3873，并获得重组Rv3873蛋白，为辅助诊断结核菌的感染奠定了基础。
- 陈曦张宗德古淑香贾红彦刘忠泉邢爱英李自慧杜博平黄海荣马玛
- 关键词：结核分枝杆菌
- 硝酸盐还原酶试验检测结核分支杆菌耐药性的研究
- ＜正＞ 随着化疗药物的临床应用,全球耐多药结核病形势日趋严峻,给结核病的防治带来很大的困难。根据2000年世界卫生组织来自52个国家的结核病耐药监测报告显示:临床结核病中1.8%的病例为多药耐药,11.1%的病例为单药耐...
- 刘忠泉李传友陈效友刘志辉王庆马玙
- 文献传递
- 结核分枝杆菌Rv2352c基因的克隆表达及其抗原活性鉴定
- 2011年
- 目的构建含结核分枝杆菌（M．tb）rv2352c基因原核表达载体，经转化E．coli以表达Rv2352c融合蛋白，并研究其抗原性。方法用PCR扩增M．tbrv2352c基因，克隆入pET30a（＋）质粒，构建pET30a（＋）：rv2352c重组质粒，阳性克隆测序验证正确后转化入表达宿主大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导Rv2352c蛋白表达。经Ni＋-NTA层析柱纯化融合蛋白，通过SDS—PAGE和结核患者血清Westernblot进行鉴定。将纯化的重组蛋白分别免疫家兔，制备抗Rv2352c抗血清，抗血清的效价测定采用酶联免疫吸附试验法（ELISA），取兔抗血清与纯化蛋白Rv2352c通过Westernblot方法，检测抗体特异性。结果经酶切鉴定和测序分析证实rv2352c原核表达质粒构建正确，SDS．PAGE和Westernblot结果显示，在45kD处呈现单一蛋白条带。用重组蛋白Rv2352c免疫接种后可诱导出高滴度的特异性抗体。纯化蛋白通过Westernblot鉴定证实为目的蛋白，有较强的免疫原性。结论成功构建原核表达重组质粒pET30a（＋）：rv2352c，制备和纯化的Rv2352c融合蛋白具有较好的纯度和生物学功能，为进一步研究结核病的潜在分子标志物奠定基础。
- 曹廷明贾红彦古淑香郑晓静李自慧杜凤娇刘洋刘忠泉邢爱英杜博平马玛张宗德
- 关键词：分枝杆菌结核细菌蛋白质类抗原细菌重组融合蛋白质类
- 结核分枝杆菌复苏因子D基因在真核细胞中的表达
- 2011年
- 目的构建结核分枝杆菌复苏因子D基因（RpfD）真核表达载体，为结核分枝杆菌复苏因子DNA疫苗的研究奠定基础。方法PCR扩增复苏因子D基因片段，克隆至PcDNA3．1（-）载体中，重组质粒测序正确后，转染至CHO细胞中。通过G418筛选，RT-PCR检测克隆基因mRNA在真核细胞的表达，Western blot检测目的蛋白的表达。结果构建了PcDNA—RpfD表达载体，RT—PCR证实构建的载体能在CHO细胞中表达RpfD基因mRNA，Western blot证实转染了载体的CHO能表达RpfD蛋白质。结论PcDNA—RpfD真核表达载体在转染细胞CHO中能表达RpfD蛋白质。
- 邢爱英刘忠泉贾红彦杜博平古淑香张宗德
- 关键词：真核表达
- 对氨水杨酸钠耐药与结核分枝杆菌胸苷酸合成酶基因突变的研究被引量：4
- 2007年
- 目的检测结核分枝杆菌临床分离株对氨水杨酸钠(PAS)耐药和胸苷酸合成酶(thyA)基因突变的关系,探讨结核分枝杆菌 PAS 耐药的分子机制。方法 95株结核分枝杆菌临床分离株中的51株 PAS 敏感株和44株 PAS 耐药株的 PAS 耐药相关基因 thyA 基因进行 PCR 扩增,扩增产物纯化后进行序列测定,与结核分枝杆菌标准株 H_(37)Rv 的野生型 thyA 基因序列进行比对,判断这些临床分离株 thyA 基因有无突变。结果 51株 PAS 敏感株 thyA 基因未检出突变,44株 PAS 耐药株中有16个临床分离株的 thyA 基因检测到突变,突变检出率为36.4%(16/44)。突变类型包括置换、颠换、插入、缺失,均为单碱基改变或单碱基缺失,其中2株为 thyA 基因2个位点联合突变。结论结核分枝杆菌 thyA 基因突变是其产生 PAS 耐药的重要原因之一。结核分枝杆菌胸苷酸合成酶是PAS 作用的重要靶位。
- 张宗德赵雁林李自慧贾红艳刘宇红陈曦刘忠泉杜博平邢爱英马玙
- 关键词：胸苷酸合酶抗药性
- 结核分枝杆菌Rpf-DNA疫苗对Mtb感染小鼠免疫保护作用的研究
- 2012年
- 目的评价Mtb复苏因子DNA疫苗（resuscitation-promoting factor DNA, Rpf-DNA）对Mtb感染宿主的免疫保护作用。方法构建复苏因子D（Rpf D—DNA）和复苏因子E（Rpf E-DNA）质粒疫苗，180只BALB／c小鼠（4周龄）分为6组，每组30只，分别用空质粒、Rpf D-DNA质粒、Rpf E-DNA质粒、BCG、生理盐水免疫，H37Rv标准株气溶胶感染。检测血清复苏因子（Rpf）抗体、IFN—γ；Rpf D、E刺激淋巴细胞后进行淋巴细胞增殖、细胞杀伤实验；检测细胞上清IFN-γ、IL-12、IL-2；对肺组织进行病理学检测和细菌负荷（CFU）计数。结果（1）疫苗免疫组血清RpfD、RpfE抗体水平：RpfD组0．32±0．1，RpfE组0．39±0．1，BCG组0．02±0．01，空质粒组0．01±0．0，生理盐水组0．09±0．04，空白对照组0．03±0．01，RpfD组与RpfE组抗体水平与BCG组、空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有显著统计学意义，F值分别为RpfD：45．6，43．2，45．1，45．7；RpfE：51．6，53．6，51．0，52．2：P值均〈0．01。血清IFN-γ：RpfD组（43．9±24．8）pg／ml，RpfE组（45．9±21．0）pg／ml，BCG组（21．0±11．0）pg／ml，空质粒组（7．9±4．9）pg／ml，生理盐水组（4．7±2．1）pg／ml，空白对照组（5．8±4．7）pg/ml，RpfD、RpfE质粒组与BCG组比较差异有统计学意义（F值分别为RDfD：10．2；RpfE：12.4；P值均〈0．05），与空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有显著统计学意义，F值分别为RpfD：15．6，17．8，17．3；RpfE：17．5，21．1，20．7P值均（0．01。（2）淋巴细胞增殖实验CCK-8：RpfD组176．0±4．2，RpfE组183．0±4．3，BCG组101．0±1．1，空质粒组100．0±6．8，生理盐水组104．0±8．4，空白对照组116．0±2．2，RDfD、RpfE质粒组与BCG组、空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有统计学意义，F值分别为RpfD：9．5，10．1，10．0，9．0；RpfE：11．2，12
- 邢爱英刘忠泉刘洋贾红彦李自慧郑晓静曹廷明杜凤娇杜博平古淑香张宗德
- 关键词：细菌蛋白质类细胞因子类
- 不同抗原酶联免疫斑点检测技术对结核性胸膜炎辅助诊断价值的比较
- 2011年
- 目的探索结核分枝杆菌不同抗原的酶联免疫斑点检测技术（ELISPOT），对结核性胸膜炎的辅助诊断价值。方法分离55例结核性胸膜炎患者和43例恶性胸腔积液患者的胸腔积液单个核细胞，经5个蛋白抗原：ESAT-6、CFP-10、ESAT-6／CFP-10融合蛋白（E／C）、Rv3873和Rv3879c共同孵育，进行ELISPOT试验，检测经抗原刺激后分泌IFN—γ的效应T淋巴细胞（即斑点形成细胞，SFC）的数量，用中位数（四分位间距）表示。结果结核性胸膜炎组ESAT-6-ELISPOT、E／C—ELISPOT、CFP-10-ELISPOT、Rv3873-ELISPOT和Rv3879c—ELISPOT每孔的SFC分别为27（13-65），26（12-52），34（18-79），26（8～50）和11（1～24），均显著高于恶性胸腔积液组的1（0～2），2（0～4），2（1～4），3（1～6）和1（0～3），均有P〈0.01。5个抗原中E／C的敏感度最高92．7％，ESAT．6和Rv3879c的特异度最高93．O％，ESAT-6的诊断准确性最高。结论ESAT-6联合新抗原Rv3879c的ELISPOT能够辅助诊断结核性胸膜炎，但其特异度易受MTB潜伏感染的影响。
- 杜凤娇陈曦刘菲刘洋曹廷明刘忠泉贾红彦邢爱英杜博平古淑香马玙张宗德
- 关键词：胸腔积液
- 结核分枝杆菌RV3121基因的的原核表达及其抗原性分析
- 目的 前期相关研究表明结核分枝杆菌(M.tb) RV3121基因具有较好的特异性,本研究将构建其原核表达载体并获得其重组蛋白,并研究其抗原性,探讨其作为新型结核病特异性标志物的可行性.方法 用PCR方法扩增M.tb RV...
- 曹廷明贾红彦邢爱英杜凤娇刘忠泉李自慧郑晓静潘丽萍吕玲娜马玙张宗德
- 关键词：结核分枝杆菌抗原免疫原性
- 结核分枝杆菌Rpf-DNA疫苗对感染小鼠免疫保护作用的研究
- 目的:评价结核分枝杆菌复苏因子DNA疫苗(Rpf-DNA)对结核分枝杆菌感染宿主的免疫保护作用。方法:分别构建Rpf D-DNA质粒疫苗和RpfE-DNA质粒疫苗。将BALB/C小鼠分为6组,每组30只,分别用空质粒、R...
- 邢爱英刘忠泉刘洋贾红彦李自慧郑晓静曹廷明杜凤娇杜博平古淑香张宗德
- 关键词：DNA疫苗结核分枝杆菌
- 文献传递
