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黑暗胁迫下拟南芥叶片衰老突变体的筛选及鉴定被引量：1: 2018年; 叶片衰老作为叶片发育的最后阶段,是营养物质从叶片到其他器官的重新配置过程,对植物的适应环境至关重要。衰老突变体及衰老相关基因的鉴定,对在分子水平上理解叶片衰老具有重要意义。本研究以拟南芥野生型为植物材料,通过EMS诱变技术构建突变体库,并建立了合理的黑暗胁迫体系诱导叶片衰老。利用该系统筛选到1个衰老表型加剧的衰老异常突变体accelerated senescence in dark1-1(asd1-1)。通过黑暗胁迫条件下对该突变体的叶绿素含量分析及叶片总蛋白含量的测定,确定了该突变体确实为叶片衰老加剧突变体,为寻找新的叶片衰老调控基因及揭示植物衰老途径的分子机制提供依据。; 祁蒙贾敏刘夏燕; 关键词：叶片衰老拟南芥突变体筛选

拟南芥ERA-1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备: 2017年; 将拟南芥ERA-1基因除信号肽外的剩余编码序列克隆到原核表达载体p ET28a上,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中表达,发现表达的目的蛋白位于包涵体中,大量表达目的蛋白并用镍柱亲和层析法进行纯化,获得足量的重组蛋白后将其作为抗原免疫家兔,获得抗血清。用重组蛋白亲和纯化抗血清中的ERA-1多克隆抗体。利用野生型拟南芥、ERA-1敲除突变系和ERA-1过表达系的叶片总蛋白进行免疫印迹试验,检测ERA-1多克隆抗体的特异性,发现纯化后的ERA-1多克隆抗体(1∶1 000体积比稀释)能特异地检测到拟南芥中的ERA-1蛋白。本试验成功制备了ERA-1蛋白的多克隆抗体,可以用于今后对ERA-1基因功能的研究。; 付世英刘夏燕; 关键词：原核表达抗血清多克隆抗体制备

拟南芥Mg^(2+)转运蛋白AtMGT10的原核表达及多克隆抗体制备被引量：1: 2017年; 【目的】在大肠杆菌系统中原核表达拟南芥叶绿体Mg^(2+)转运蛋白AtMGT10,通过免疫健康成年家兔,获得针对AtMGT10蛋白的多克隆抗体,为研究AtMGT10蛋白在植物生长发育中的功能奠定基础。【方法】利用PCR技术克隆AtMGT10基因编码区187~786bp的cDNA片段,连接到pET-28a中构建原核表达载体pET-28aAtMGT10^(63-262),转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达带有His标签的His-AtMGT10^(63-262)截短重组蛋白。用镍柱亲和纯化后的重组蛋白作为抗原皮下注射免疫家兔,制备针对AtMGT10蛋白的多抗血清。提取拟南芥野生型叶片总蛋白,用AtMGT10多抗血清进行蛋白免疫印迹检测。【结果】经PCR扩增获得了600bp的AtMGT10基因cDNA片段,成功构建原核表达载体pET-28a-AtMGT10^(63-262),在大肠杆菌系统中表达出His-AtMGT10^(63-262)蛋白,经亲和纯化后免疫家兔获得了Anti-AtMGT10多抗血清。在拟南芥野生型总蛋白中用Anti-AtMGT10经免疫印迹检测到大约50ku的蛋白条带,利用抗原竞争试验进一步证明检测到的信号就是拟南芥内源AtMGT10蛋白。【结论】原核表达了His-AtMGT1063-262蛋白,成功制备了特异性较强的AtMGT10蛋白多克隆抗体。; 周亚媚梁爽齐亚飞刘夏燕; 关键词：拟南芥原核表达抗体制备

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刘夏燕