单丽伟
- 作品数：30 被引量：250H指数：6
- 供职机构：西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：中央高校基本科研业务费专项资金国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学环境科学与工程农业科学文化科学更多>>
- 小麦种子过氧化物酶WP1基因的原核表达、纯化及多克隆抗体制备被引量：18
- 2011年
- WP1是小麦种子中最主要的阳离子过氧化物酶,该酶不仅参与种子的发育过程,而且影响面粉的加工品质。首先构建了WP1基因原核表达载体pET28a-WP1,并将其转化到T7 Expression大肠杆菌菌株中诱导表达。His-tag融合的WP1主要以包涵体形式存在,使用Ni-NTA亲和层析柱在变性条件下进行纯化,获得纯度大于98%的重组蛋白。重组WP1经尿素梯度透析复性溶解后免疫新西兰大白兔,最终获得WP1多克隆抗体。ELISA分析结果显示制备的WP1兔抗血清的效价大于1∶625 000;Western blotting结果证明制备的多克隆抗体对WP1具有很好的专一性。
- 单丽伟唐如春刘三阳范三红郭蔼光
- 关键词：小麦表达纯化抗体制备
- 产甲烷菌研究进展被引量：105
- 2003年
- 产甲烷菌是重要的环境微生物,在自然界的碳素循环中起重要作用。迄今已有5种产甲烷菌基因组测序完成。基因组信息使人们对产甲烷茵的细胞结构、进化、代谢及环境适应性有了更深的理解。目前已知的甲烷生物合成途径有3种,它们以乙酸、甲基化合物、氢/二氧化碳为起始,通过不同的反应途径都形成了甲基辅酶M,在甲基辅酶M还原酶的催化下最终形成甲烷。
- 单丽伟冯贵颖范三红
- 关键词：基因组产甲烷菌
- 小麦种子过氧化物酶基因wp1的克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：4
- 2009年
- 【目的】克隆小麦种子过氧化物酶基因wp1,并利用原核系统表达纯化。【方法】通过RT-PCR从小麦未成熟种子中扩增wp1基因cDNA,构建His-tag和MBP融合表达载体,并在大肠杆菌中进行表达。使用直链淀粉亲和层析获得MBP-WP1融合蛋白,并以ABTS为底物检测酶活性。【结果】获得的wp1基因cDNA编码一种358个氨基酸残基的蛋白产物,其序列与大麦BP1相似性高达89%;空间结构预测结果表明,小麦WP1属于第三类过氧化物酶,具有该家族成员典型的血红素和钙离子结合位点;His-Tag融合的WP1主要以包涵体形式存在,而MBP融合的WP1主要以可溶形式存在,表达量分别达到总蛋白的18.2%和34.6%;纯化获得的MBP-WP1融合蛋白可检测到过氧化物酶活性。【结论】使用原核系统可高效表达出可溶性的、具有部分活性的WP1蛋白。
- 单丽伟罗海霞范三红郭蔼光
- 关键词：小麦高GC含量基因克隆
- 小麦WPBF与高分子量谷蛋白基因上游Prolamin-Like box的特异结合被引量：4
- 2012年
- 【目的】克隆普通小麦胚乳特异表达转录因子基因WPBF,对其原核表达条件进行优化,并验证其编码蛋白和小麦高分子量谷蛋白亚基基因(HMW-GS)上游Prolamin-Like box的结合特性,为小麦HMW-GS表达调控机制的阐明奠定基础。【方法】利用RT-PCR扩增得到WPBF编码区,将其连接到pET-21a-MBP载体中,并分别在E.coliT7 Express和Origami B(DE3)菌株中诱导表达。依次利用Amylose和Ni-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白,最后通过凝胶迁移阻滞试验(EMSA)对重组蛋白的DNA结合特性进行分析。【结果】在33℃的Origami B(DE3)菌株中表达含MBP和His双标签的重组WPBF大部分以可溶性形式存在,其表达量占细菌总蛋白的48.0%。重组WPBF和含HMW-GS上游Prolamin-Like box的两类DNA探针能发生特异结合,但重组WPBF和含"TGCAAAG"基序DNA探针的结合强度高于其和含"TGCAAG"基序DNA探针的结合。【结论】建立了优化的WPBF原核表达系统,并获得具有生物活性的重组蛋白;重组WPBF能与HMW-GS启动子来源的两种Prolamin-Like box特异性结合,但结合能力存在差异。
- 卫晓彬王亚楠张超单丽伟唐如春范三红
- 关键词：小麦HMW-GSBOX
- 拟南芥基因密码子偏爱性分析被引量：64
- 2003年
- 密码子偏爱性对外源基因的表达强度有一定影响 ,特别是编码蛋白质N端 7～ 8个氨基酸残基的密码子 .通过对拟南芥染色体中 2 6 82 7个蛋白质对应的基因密码子进行分析 ,得到了编码氨基酸的 6 1种密码子在拟南芥中的使用频率 ,并与大肠杆菌和哺乳动物进行了比较 ,结果表明三者间的密码子偏爱性有较大差异 .这一分析结果对于动物基因在植物中的表达 ,及植物基因在微生物中的表达具有一定指导意义 .
- 范三红郭蔼光单丽伟胡小平
- 关键词：拟南芥基因密码子植物XML
- 小麦α-双加氧酶cDNA克隆及表达分析
- 2014年
- 以普通小麦陕225为材料,同源克隆小麦脂肪酸α-双加氧酶基因(TaDOX)cDNA,全面分析其基因结构、染色体定位、进化关系及蛋白结构特征,并利用实时定量RT-PCR分析其在PEG和盐胁迫下的表达模式。克隆的cDNA片段长1 854bp,编码617个氨基酸残基的小麦脂肪酸α-双加氧酶。TaDOX基因组DNA长5 529bp,位于小麦5D染色体长臂,包含10个外显子。小麦、水稻等禾本科植物α-DOX序列高度同源,聚集在同一独立进化枝,而双子叶植物存在2类DOX蛋白,聚集在另外2个分枝中。TaDOX具有脂肪酸α-双加氧酶以α-螺旋为主的空间结构特征,包含血红素结合位点及保守氨基酸His310、Thr315、Tyr378、Arg558组成的活性中心。TaDOX主要在叶和根中表达,花序和种子中也有痕量表达;叶片中TaDOX的表达在PEG和盐胁迫条件均明显下降;根中TaDOX的表达在PEG胁迫条件下无显著变化,但在盐胁迫条件下表达水平急剧升高。
- 范三红陈志刚王欣魏少华齐亚飞单丽伟
- 关键词：小麦染色体定位
- 絮凝剂产生菌的筛选及产生絮凝剂的影响因素研究被引量：7
- 2003年
- 从活性污泥中分离出 6 3株菌株 ,培养、筛选得到具有絮凝活性的菌株 17株 ,其中 2株絮凝活性较高。研究了这 2株菌在不同培养时间的生长情况及其絮凝活性等 ,得出絮凝活性与菌生长量呈正相关关系。通过改变培养基的碳源、氮源、无机盐等因素 ,得出 2株絮凝活性较高的菌株产生絮凝剂的最佳条件 :真菌 IV- 2 1,以蔗糖为碳源 ,蛋白胨为氮源 ,Na Cl为无机盐 ,p H为 6 .0 ,培养温度为 30℃时 ,絮凝效果最好 ;细菌 I- 9,以葡萄糖为碳源 ,尿素为氮源 ,K2 HPO4 为无机盐 ,培养基初始 p H偏碱性 ,培养温度为 30℃时 ,絮凝效果最好。
- 王正林冯贵颖岳晓勤单丽伟王月红刘晓荣
- 关键词：微生物絮凝剂絮凝活性活性污泥
- 核酸酶P1的原核表达、纯化及酶学特性分析
- 2012年
- 为了建立一种核酸酶P1(Nuclease P1,NP1)的原核表达纯化系统,首先采用重叠延伸PCR将22段寡核苷酸拼接,获得人工合成的NP1基因。将其克隆至分泌型表达载体pMAL-p4X获得重组质粒pMAL-p4X-NP1,然后将重组载体转化T7 Express和Origami B(DE3)菌株诱导表达,利用Amylose亲和层析柱纯化获得重组蛋白,并对其活性、热稳定性和金属离子依赖性进行系统分析。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白MBP-NP1(Maltose binding protein-NP1)在T7 Express和Origami B(DE3)菌株中均可表达,且以可溶性形式存在。活性检测表明Origami B(DE3)菌株中获得的重组蛋白活性高于T7 Express菌株(75.48 U/mg:51.50 U/mg);利用蛋白酶Factor Xa切除MBP标签后,两种重组蛋白的比活力均有提高,分别为258.13 U/mg和139.20 U/mg。重组NP1表现出良好的热稳定性,80℃温浴30 min后重组酶仍具有90%以上的活力。2.0 mmol/L Zn2+对NP1有比较明显的激活作用,相同浓度的Cu2+则对该酶有强烈的抑制作用。该研究实现了NP1在大肠杆菌系统中的功能性表达,为NP1纯酶的制备提供一个替代途径。
- 王亚楠魏爱云王美艳卫晓彬张超单丽伟范三红
- 关键词：核酸酶P1原核表达热稳定性
- 浅谈无机及分析化学课程网络试题库与教学被引量：1
- 2017年
- 农林院校的无机及分析化学课程试题库系统除用于考试出卷外,应该结合网络成为网络试题库,应用于平时教学中,可促进教学方法改革,给学生课外进行基础训练,引入科学前沿工作,提高学生学习兴趣,引导学生自主学习。
- 蒲亮张忠王文己杨正亮单丽伟
- 关键词：无机及分析化学网络试题库教学
- 大豆类黄酮生物合成关键酶CHS基因的克隆及表达分析被引量：8
- 2012年
- 根据查尔酮合成酶(CHS)基因DNA序列的保守区域设计了PCR引物,通过RT-PCR扩增从大豆叶片中克隆出3个参与类黄酮合成的CHS基因,分别命名为GmCHS1、GmCHS2和GmCHS3。在大豆基因组数据库进行同源比对,发现这3个基因分别与大豆基因组上Gm08g11610、Gm05g28610和Gm08g11520相对应,DNA序列一致性达95%～98%,推导氨基酸序列一致性达98%以上。进化分析显示,大豆中3个CHS蛋白与决明、菜豆CHS蛋白亲缘关系较近。表达分析显示,这3个基因在不同品种间有表达水平的差异,这可能是不同大豆品种中类黄酮含量不同的重要原因之一。
- 单丽伟汪勇王美玲王中华
- 关键词：大豆异黄酮类黄酮查尔酮合成酶
