卫晓彬
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 供职机构：西北农林科技大学更多>>
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- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 小麦WPBF与高分子量谷蛋白基因上游Prolamin-Like box的特异结合被引量：4
- 2012年
- 【目的】克隆普通小麦胚乳特异表达转录因子基因WPBF,对其原核表达条件进行优化,并验证其编码蛋白和小麦高分子量谷蛋白亚基基因(HMW-GS)上游Prolamin-Like box的结合特性,为小麦HMW-GS表达调控机制的阐明奠定基础。【方法】利用RT-PCR扩增得到WPBF编码区,将其连接到pET-21a-MBP载体中,并分别在E.coliT7 Express和Origami B(DE3)菌株中诱导表达。依次利用Amylose和Ni-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白,最后通过凝胶迁移阻滞试验(EMSA)对重组蛋白的DNA结合特性进行分析。【结果】在33℃的Origami B(DE3)菌株中表达含MBP和His双标签的重组WPBF大部分以可溶性形式存在,其表达量占细菌总蛋白的48.0%。重组WPBF和含HMW-GS上游Prolamin-Like box的两类DNA探针能发生特异结合,但重组WPBF和含"TGCAAAG"基序DNA探针的结合强度高于其和含"TGCAAG"基序DNA探针的结合。【结论】建立了优化的WPBF原核表达系统,并获得具有生物活性的重组蛋白;重组WPBF能与HMW-GS启动子来源的两种Prolamin-Like box特异性结合,但结合能力存在差异。
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- 关键词：小麦HMW-GSBOX
- LBD家族蛋白的二聚化和DNA识别的结构基础
- LBD家族蛋白通过精确调控其下游基因的时空特异性表达来控制植物的发育模式。它们参与高等植物的许多生长发育和代谢过程，如分生组织分化、叶片发育、花序形态建成、花粉发育和侧根发育等。最近的研究显示，LBD家族蛋白还与植物再生...
- 卫晓彬
- 关键词：蛋白晶体二聚化
- 文献传递
- 小麦胚乳特异性转录因子基因WPBF的克隆、表达及DNA结合特性研究
- 小麦（Triticum aestivum L.）是人类最早的栽培植物之一，其在世界各地广泛种植，全球有35%-40%的人口以小麦为主食。随着人们生活水平的不断提高，小麦品质改良越来越受到人们的重视。小麦高分子量谷蛋白（H...
- 卫晓彬
- 关键词：原核表达及纯化DOF
- 文献传递
- 核酸酶P1的原核表达、纯化及酶学特性分析
- 2012年
- 为了建立一种核酸酶P1(Nuclease P1,NP1)的原核表达纯化系统,首先采用重叠延伸PCR将22段寡核苷酸拼接,获得人工合成的NP1基因。将其克隆至分泌型表达载体pMAL-p4X获得重组质粒pMAL-p4X-NP1,然后将重组载体转化T7 Express和Origami B(DE3)菌株诱导表达,利用Amylose亲和层析柱纯化获得重组蛋白,并对其活性、热稳定性和金属离子依赖性进行系统分析。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白MBP-NP1(Maltose binding protein-NP1)在T7 Express和Origami B(DE3)菌株中均可表达,且以可溶性形式存在。活性检测表明Origami B(DE3)菌株中获得的重组蛋白活性高于T7 Express菌株(75.48 U/mg:51.50 U/mg);利用蛋白酶Factor Xa切除MBP标签后,两种重组蛋白的比活力均有提高,分别为258.13 U/mg和139.20 U/mg。重组NP1表现出良好的热稳定性,80℃温浴30 min后重组酶仍具有90%以上的活力。2.0 mmol/L Zn2+对NP1有比较明显的激活作用,相同浓度的Cu2+则对该酶有强烈的抑制作用。该研究实现了NP1在大肠杆菌系统中的功能性表达,为NP1纯酶的制备提供一个替代途径。
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- 关键词：核酸酶P1原核表达热稳定性
