高明春 作品数:114 被引量:185 H指数:6 供职机构: 东北农业大学 更多>> 发文基金: 国家科技支撑计划 国家现代农业产业技术体系建设项目 黑龙江省科技攻关计划 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 文化科学 更多>>
外源重组蛋白制备鹅免疫球蛋白轻链特异性多克隆抗体 被引量:2 2012年 采用RT-PCR方法扩增鹅免疫球蛋白轻链恒定区编码序列(GoIgCL),构建原核表达载体pET30a-IgCL,在RosettaTM(DE3)pLysS宿主菌中表达鹅免疫球蛋白轻链恒定区重组蛋白rGoCL,以纯化后rGoCL作为免疫原制备兔抗GoIgL多克隆抗体,对多抗进行鉴定分析。结果表明,rGoCL在大肠杆菌中获得可溶性表达,可代替天然分离的轻链作为免疫原制备轻链特异性抗体,多抗效价为1 204 800。研究为鹅免疫球蛋白的蛋白结构、功能分析以及鹅免疫诊断试剂研发奠定基础。 王君伟 郭永丽 高明春关键词:免疫球蛋白 重组蛋白 多克隆抗体 牛IFN-α基因高效表达及纯化的研究 被引量:7 2008年 基于对RNA二级结构的预测和密码子偏性计算,通过计算机辅助软件进行牛IFN-α基因优化,经人工合成优化后的基因与pWL表达载体连接后诱导表达,并对表达条件进行优化。SDS-PAGE分析表明,其产物分子量约为17ku,最优表达条件下蛋白表达量占菌体总蛋白的33%,表达产物以包涵体形式存在。经过包涵体溶解、初步复性后利用CM Sepharose Fast Flow离子交换层析柱作为蛋白质复性系统,采用梯度法进行牛α-干扰素包涵体蛋白质的纯化复性。结果表明,梯度离子交换层析法能有效地复性牛α-干扰素包涵体,复性后的重组牛α-干扰素的纯度达95%,通过离子交换层析柱纯化和复性后,重组牛α-干扰素在MDBK/VSV细胞系上的抗病毒活性为5.56×106u/mg。 孙仰峰 李文辉 李勐 高明春 王薇 魏双施 王君伟关键词:抗病毒活性 纯化 鸭肠炎病毒C-KCE株TK基因的原核表达及其多克隆抗体的制备 被引量:3 2015年 为了探究鸭肠炎病毒(DEV)TK基因编码蛋白在相关细胞上作用与功能及其在病毒感染周期、机体免疫应答中的作用,试验以DEV C-KCE株基因组DNA为模板扩增获得TK基因,在p ET-32a(+)/Rosetta(DE3)p Lys系统中原核表达,并用IPTG诱导DEV TK重组蛋白。结果表明:经SDS-PAGE分析,外源基因主要以包涵体形式表达,分子质量约为59 ku;经Ni-NTA纯化后免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,抗体效价可达到1∶4;经Western-blot分析,制备的多克隆抗体可特异性识别重组蛋白;间接免疫荧光试验证实,制备的多克隆抗体与DEV的TK基因编码产物反应性良好。说明TK基因表达蛋白在鸭肠炎感染周期及机体的免疫应答中发挥着至关重要的作用。 赵宇 田荔 母晓宇 董井泉 高明春 张文龙 马波 王君伟关键词:TK基因 原核表达 多克隆抗体 WESTERN-BLOT 间接免疫荧光试验 牛干扰素Omega24的特征和抗病毒活性研究 1.引言为了分析牛干扰素Omega24(BoIFN-ω24)基因的功能及特性,本研究从牛肝基因组中克隆了该基因,随后构建了编码BoIFN-ω24成熟肽基因的原核表达载体p ET30a-BoIFN-ω24,将重组载体转化至... 罗修鑫 郭永丽 高明春 刘莹 安东 王君伟关键词:基因克隆 抗病毒活性 鹅干扰素-α的毕赤酵母表达及其生物学活性分析 被引量:2 2013年 为在毕赤酵母表达系统中表达无冗余氨基酸且具有抗病毒活性的鹅干扰素-α(IFN-α)蛋白,采用融合PCR法扩增获得鹅干扰素-α基因片段,将此片段连入pPICZαA载体,构建重组表达质粒pPICZαA-GoIFN-α,电击转化毕赤酵母感受态细胞X33,挑取阳性重组菌用甲醇进行诱导表达,对表达产物进行West-ern-blot和ELISA分析,并测定重组IFN-α的生物活性。结果显示,融合基因获得高效表达,表达的蛋白以可溶形式存在,且相对分子质量较理论值稍大。经GEF-GPMV系统检测,证实表达的蛋白具有生物学活性,约为6.55×105 U/mL,比活力为1.80×105 U/mg。结果表明,利用毕赤酵母表达系统规模化生产具有生物学活性的鹅IFN-α有广阔的应用前景。 朱永梅 曹永生 李鑫 马波 张文龙 高明春 王君伟关键词:干扰素-Α 巴斯德毕赤酵母 分泌表达 抗病毒活性 鹅免疫球蛋白编码区及其恒定区特异性单克隆抗体与应用 本发明公开了鹅免疫球蛋白编码区及其恒定区特异性单克隆抗体与应用。本发明提供的鹅免疫球蛋白编码区包含λ链的全部编码区序列,重链的可变区、D片段和J片段编码序列、α链的恒定区编码序列以及μ链、υ链恒定区的部分编码序列。本发明... 王君伟 郭永丽 高明春 马波文献传递 Asia 1型口蹄疫病毒3A非结构蛋白抗原表位缺失感染性cDNA及其构建方法 Asia 1型口蹄疫病毒3A非结构蛋白抗原表位缺失感染性cDNA及其构建方法,它涉及口蹄疫病毒3A非结构蛋白抗原表位缺失感染性cDNA及其构建方法。它解决了现有灭活疫苗纯化过程中很难监测,所以残留的非结构蛋白会干扰对自然... 王君伟 李爽 高明春 马波文献传递 布鲁氏菌病实验室诊断技术及其适用性评析 布鲁氏菌病严重阻碍我国养牛业的健康发展,控制乃至根除布病是世界范围内各布病负担国的共识,本文就各种布鲁氏菌病实验诊断技术及其在布病净化程序中的适用性加以客观评述,谨供我国布病防控工作者参考。 高明春 王君伟关键词:布鲁氏菌病 实验室诊断技术 奶牛 肉牛 文献传递 重组牛alpha干扰素及其应用 本发明涉及重组牛alpha干扰素,其相应的基因为牛共有IFN-α基因(CoBoIFN-α)、遗传密码子优化的牛共有IFN-α基因(Y-CoBoIFN-α)和遗传密码子优化的牛IFN-αG亚型基因(Y-BoIFN-αG),... 王君伟 孙旭燕 高明春 马波 崔子寅文献传递 规模化奶牛场口蹄疫O-Asia 1型二价灭活苗不同免疫程序免疫抗体水平分析 被引量:5 2011年 口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的以感染偶蹄动物为主的急性、热性、高度接触传染性和快速远距离传播的动物疫病,以传染性强、传播速度快、危害严重而著称。世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须通报的多种动物共患传染病之一,我国将其列为一类动物传染病。根据OIE公布数据,2009年内地全年通报了16起口蹄疫疫情,感染动物主要为牛,其中的7起为我国过去未见的A型口蹄疫感染,其余均为Asial型感染。2010年又报道多起牛、羊A型FMDV猪O型FMDV。因此,口蹄疫的防控任务依然艰巨。 张润祥 高明春 刘慧环 曹永生 王晓东 王君伟关键词:规模化奶牛场 免疫程序 灭活苗 世界动物卫生组织 接触传染性 动物传染病