张文龙
- 作品数：54 被引量：85H指数：5
- 供职机构：东北农业大学更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目黑龙江省教育厅科学技术研究项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 牛化脓隐秘杆菌的分离及其主要毒力基因的PCR鉴定被引量：9
- 2013年
- 从2009-2012年多个奶牛场送检的5份以奶牛化脓性炎症为特征的病料中分离出5株细菌,根据其革兰氏染色的形态特征、培养特性、生化特性以及16SrRNA基因序列的BLAST分析,确定分离菌为化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes),并对分离菌的主要毒力因子基因进行了PCR鉴定和动物试验。结果显示,5株分离菌的16SrRNA基因序列与GenBank中收录的11株牛源化脓隐秘杆菌16SrRNA基因序列的同源性为99%以上。HLJ-1005株分离菌基因组中缺失胶原结合蛋白(CbpA)基因,但包含溶血素(PLO)基因、神经氨酸酶H(NanH)基因和神经氨酸酶P(NanP)基因,且HLJ-1005株分离菌的致病力明显弱于其他4株分离菌。证实,化脓隐秘杆菌的致病力与cbpA基因和nanP基因的存在相关。
- 徐凝刘琰张明富张文龙王君伟
- 关键词：化脓隐秘杆菌RRNA基因毒力基因
- 鹅CD3ε链胞外区单克隆抗体及其在检测鹅CD3<Sup>+</Sup>T淋巴细胞中的应用
- 本发明公开了鹅CD3ε链胞外区单克隆抗体及其在检测鹅CD3<Sup>+</Sup>T淋巴细胞中的应用。以鹅胸腺cDNA为模板扩增得到鹅CD3ε基因，根据GoCD3ε胞外区基因特点，设计1对特异性引物扩增得到鹅CD3ε胞外...
- 马波张雪莲李洪涛高明春张文龙魏双施王君伟
- 文献传递
- 鹅干扰素-α的毕赤酵母表达及其生物学活性分析被引量：2
- 2013年
- 为在毕赤酵母表达系统中表达无冗余氨基酸且具有抗病毒活性的鹅干扰素-α(IFN-α)蛋白,采用融合PCR法扩增获得鹅干扰素-α基因片段,将此片段连入pPICZαA载体,构建重组表达质粒pPICZαA-GoIFN-α,电击转化毕赤酵母感受态细胞X33,挑取阳性重组菌用甲醇进行诱导表达,对表达产物进行West-ern-blot和ELISA分析,并测定重组IFN-α的生物活性。结果显示,融合基因获得高效表达,表达的蛋白以可溶形式存在,且相对分子质量较理论值稍大。经GEF-GPMV系统检测,证实表达的蛋白具有生物学活性,约为6.55×105 U/mL,比活力为1.80×105 U/mg。结果表明,利用毕赤酵母表达系统规模化生产具有生物学活性的鹅IFN-α有广阔的应用前景。
- 朱永梅曹永生李鑫马波张文龙高明春王君伟
- 关键词：干扰素-Α巴斯德毕赤酵母分泌表达抗病毒活性
- 茨城病病毒S7基因的截短表达及间接ELISA检测方法的建立
- 茨城病病毒(Ibaraki virus,IBAV)是呼肠孤病毒科、环状病毒属成员。其VP7蛋白保守程度高,适宜作为茨城病(Ibaraki disease,IBAD)血清学检测方法的诊断抗原。本研究克隆了VP7蛋白抗原性、...
- 张文龙殷喆王君伟杨涛吴东来
- 关键词：编码基因原核表达系统
- 文献传递
- 鸡主要组织相容性复合体/肽四聚体的构建方法及其产品
- 本发明公开了一种鸡主要组织相容性复合体/肽四聚体的构建方法及由该方法得到的产品。本发明在大量表达的重组BF2－BSP、重组Chβ2m以及合成多肽的基础上，重折叠获得了BF2/肽单体复合物，进而在此基础上进行生物素化，制备...
- 吴东来刘光亮王群肖一红童铁钢白宇张维军徐树兰张文龙殷喆
- 文献传递
- 鸭肠炎病毒gB N端(60～110aa)抗原优势区的原核表达及抗血清的制备
- 2015年
- 以本实验室已克隆的鸭肠炎病毒（DEV）C-KCE株ul27基因序列为模板,设计特异性引物,PCR扩增获得编码鸭肠炎病毒gB N端第60～110aa的目的基因片段,大小为150bp。将目的基因亚克隆至原核表达载体pET-32a（＋）中,阳性质粒被命名为pET-32a（＋）-gB-1。经IPTG诱导,SDS-PAGE分析表明,重组蛋白以包涵体形式表达,大小约为27ku。用Ni-NTA柱亲和层析获得纯化的重组蛋白,鸭抗DEV阳性血清经间接ELISA检测证实其具有抗原性,并以此为免疫原免疫家兔制备抗血清,经间接ELISA检测,抗血清效价为1∶25 600。应用间接免疫荧光及Western-blot分析制备的抗血清的反应性,均证实抗血清可特异性识别DEV gB蛋白。分别以重组蛋白和DEV超离病毒为检测抗原进行间接ELISA,检测DEV免疫鸭的抗体消长规律,结果显示两者的抗体变化趋势一致。以上结果表明,制备的抗血清可作为DEV检测的候选试剂,表达的重组蛋白可作为DEV抗体检测的诊断抗原。
- 曹春秋张树栋刘琪董井泉高明春张文龙许丽于长泳马波王君伟
- 关键词：鸭肠炎病毒GB原核表达抗血清
- 抗鹅CD4胞外区单克隆抗体及其在检测禽类外周血中CD4<Sup>+</Sup>T淋巴细胞中的应用
- 本发明公开了抗鹅CD4胞外区单克隆抗体及其在检测禽类外周血中CD4<Sup>+</Sup>T淋巴细胞中的应用。本发明利用携带鹅CD4胞外区的原核表达载体pET-30a-CD4ex，采用大肠杆菌Rosetta<Sup>TM...
- 王君伟曹春秋马波张雪莲高明春张文龙郝春雪崔嘉琦
- 文献传递
- T. pyogenes PLO蛋白单克隆抗体的制备与AC-ELISA方法的建立
- 2022年
- 为了建立可以定量检测化脓隐秘杆菌(T.pyogenes)培养上清液中PLO蛋白含量的方法,试验首先制备针对毒力蛋白PLO分子第4结构域(D4)的单克隆抗体,然后应用筛选出的最佳捕获抗体,并结合辣根过氧化物酶(HRP)标记的靶向PLO分子第2结构域(D2)的单克隆抗体(HRP-AP-1A3)建立一种用于检测PLO蛋白含量的抗原捕获ELISA(AC-ELISA)方法,计算该方法的检测线,选择8种非T.pyogenes菌株验证该方法的特异性,绘制AC-ELISA方法的标准曲线,并应用该方法定量检测T.pyogenes HLJ-0912菌株培养上清液中wtPLO蛋白含量。结果表明:通过制备获得的5种单克隆抗体2G3、3G10、4C9、3C8、3C7对PLO蛋白均具有良好的特异性,其中单克隆抗体2G3、3G10、4C9、3C8是IgG2b亚型,均具有较强的抗溶血活性,靶向表位1(VEAGEATGLAWDPWWT);而单克隆抗体3C7是IgG1亚型,抗溶血活性非常弱,靶向表位2(KGTTLNPWVEDNVKS)。筛选出的最佳捕获抗体为单克隆抗体2G3,建立的AC-ELISA方法的最低检测限(OD_(450)值)为0.19。应用建立的AC-ELISA方法检测T.pyogenes HLJ-0912菌株的培养上清液为阳性,OD_(450)值为0.21;检测8种非T.pyogenes菌株的培养上清液均为阴性,OD_(450)值<0.19。标准曲线的方程为y=809.04x^(2)-85.695x,相关系数(R^(2))为0.999,拟合度较高。经AC-ELISA方法测定,在10,12,14小时时采集的T.pyogenes菌株培养上清液的OD_(450)值均高于最低检测限,培养上清液中的wtPLO蛋白含量分别为416.67,499.43,272.57 ng/mL。说明试验成功制备了针对PLO分子第4结构域的单克隆抗体,建立的AC-ELISA方法具有良好的特异性。
- 杨玉菊王海丽沙珊珊张文龙王君伟
- 关键词：化脓隐秘杆菌单克隆抗体
- 牛布鲁菌病奶液PCR检测方法的建立及初步应用被引量：5
- 2011年
- 为探讨以牛奶为材料检测牛布鲁菌感染的可行性,本试验建立了可鉴定布鲁菌属的单重PCR以及可鉴定布鲁菌种的多重PCR。结果显示,单重PCR方法的特异性强,只特异性的扩增布鲁菌DNA,对照菌株大肠杆菌、牛败血性波氏杆菌、根瘤农杆菌和苍白杆菌的扩增结果均为阴性;奶液中细菌检测灵敏度为1.08×104CFU/mL。用建立的多重PCR对7株不同种的布鲁菌体和基因组进行鉴定,表明该方法可以区分不同种布鲁菌。本试验中建立的PCR方法能够鉴定所有致病性布鲁菌并对疫苗株和野生毒株加以区分,适用于实验室布鲁菌的快速鉴定。
- 李彦伟高明春张文龙王倩王君伟K. NielsenYU Wei-ling
- 关键词：布鲁菌病多重PCR
- 鸡IFN-γ DNA壳聚糖纳米粒的制备及外源基因表达被引量：1
- 2010年
- 为检测纳米载体对表达重组质粒的保护效果,本实验构建了鸡γ干扰素(IFN-γ)真核表达重组质粒pCAGGS-ChIFN-γ;并将其与200μg/mL壳聚糖醋酸溶液制备成DNA/壳聚糖纳米颗粒(CNPs)。透射电镜观察CNPs呈不规则球形,光子相关色谱(PCS)仪测定显示CNPs的平均粒径为172.6nm±5.1nm;Zeta电位为20.8mV±2.9mV;CNPs重组质粒包埋效率和载药量分别为91.21%±2.54%和31.93%±0.16%。鸡胚成纤维细胞(CEF)体外转染实验表明:携带的外源基因能在CEF中释放、表达,其表达效率约为阳离子脂质体转染试剂LipofectamineTM 2000转染后的16.3%,同时CNPs对细胞基本无毒性。CNPs稳定实验也证实其稳定性良好。
- 殷喆张文龙刘霓红杨涛步志高王君伟吴东来
- 关键词：体外转染
