顾春燕
- 作品数：7 被引量：14H指数：2
- 供职机构：浙江省医学科学院更多>>
- 发文基金：浙江省科技计划项目浙江省医药卫生平台重点资助计划浙江省公益性技术应用研究计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生化学工程更多>>
- 中性硼硅西林瓶在甲型肝炎疫苗生产中的应用被引量：2
- 2013年
- 目前，国内已普遍采用西林瓶替代安瓿瓶分装冻干粉针剂。西林瓶直接接触制品，其质量与疫苗质量直接相关。该生产工艺的优点是灌装过程可以实现机械化半加塞，冻干结束后在冻干箱内自动加塞，然后出箱轧盖，解决了安瓿瓶的玻屑和在运输过程易碎的缺陷，这种工艺对保证制品质量十分有益。
- 黄卫新朱莲陈卓张锋沈立军顾春燕陈念良
- 微载体技术高密度培养MRC-5细胞初探被引量：2
- 2014年
- 目的 通过探索MRC-5细胞的微载体培养条件,以期建立MRC-5细胞的高密度培养方法.方法 用3种不同培养基（MEM、M199、DMEM）分别培养3.0×104/mL的MRC-5细胞,观察它们的细胞增殖及传代能力；在Spinner培养系统中,用1.0 g/L Cytopore 2和3.0 g/L Cytodex 3分别培养密度为3.70× 105/mL和2.98×105/mL的MRC-5细胞,观察两种载体对细胞生长代谢和细胞密度的影响,筛选出最适宜的培养基及微载体.使用5 L CelliGen310生物反应器对筛选获得的培养基及微载体进行MRC-5细胞的灌流培养初步摸索.结果 MRC-5细胞在MEM、M199、DMEM培养基中培养96 h细胞分别增殖了7.0、4.4和3.0倍；在MEM培养基中连续传代至5次以上,细胞增殖稳定,1：3传代72 h形成致密单层,而在M199和DMEM培养基中连续传代均未能获得理想的细胞形态.经96～120 h的培养后,使用1.0 g/L Cytopore 2培养的MRC-5细胞密度达到2.20× 106/mL高于使用3.0 g/L Cytodex 3的1.12×106/mL,且前者葡萄糖和乳酸代谢较后者更为活跃.首选MEM和Cytopore 2作为MRC-5细胞的灌流培养体系.在5L生物反应器中以1.0 g/L Cytopore 2和2.5LMEM培养基培养MRC-5细胞至144h,细胞密度达到1.54×106/mL.结论 初步建立的MEM Cytopore 2微载体细胞培养方法能够获得高密度、活性良好的MRC-5传代细胞.
- 姜云水李剑波顾春燕陈科达唐彩华包佳源毛岱敏张峰庄昉成王平
- 关键词：细胞培养技术微载体
- 人感染新型冠状病毒致中东呼吸综合征的全球流行特征被引量：1
- 2013年
- 目的 了解人感染中东呼吸综合征冠状病毒确诊病例的全球流行特征.方法 对截至2013年8月31日,全球108例感染中东呼吸综合征冠状病毒病例的相关数据进行统计,总结分析其发病地点、时间、患者年龄、性别分布和临床症状轻重等特征.结果 108例病例主要发生在中东地区,少数在欧洲及非洲地区,病例数在2013年4月开始呈上升趋势.患者主要为中老年人,占52.8％,并且男性占60.2％,明显高于女性的32.4％.死亡病例共50例,死亡率46.3％,远高于SARS的10.3％,其中60岁以上患者的死亡率为61.5％.大多数病例临床症状严重或死亡,少数病例症状轻微或无症状.结论 中东呼吸综合征冠状病毒感染患者以中老年人为主,男性多于女性,并且死亡率远高于SARS.
- 顾春燕陈卓罗永能
- 关键词：冠状病毒感染
- 发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒核衣壳蛋白优势线性B细胞抗原决定簇的预测与确定被引量：5
- 2016年
- 为了确定发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)核衣壳蛋白(N蛋白)的优势线性B细胞抗原决定簇位点,本文根据线性B细胞抗原表位拥有较强的抗原性、亲水性以及表面性等特点,运用生物信息学软件分析SFTSV N蛋白的氨基酸序列,预测潜在的线性B细胞抗原决定簇位点。根据已解析的SFTSV N蛋白晶体结构,使用PyMOL软件分析预测出的线性B细胞抗原决定簇位点的柔性及其在整个SFTSV N蛋白中的分布情况。人工合成相应多肽片段并以其为抗原,与SFTSV临床感染者的血清反应,采用多肽-酶联免疫吸附检测法检验多肽片段的免疫原性。结果共预测出六个可能的线性B细胞抗原决定簇位点,即A(40-KKLKETGGDDWVKDTK-55)、B(71-ASGKMSNSGSKRL-83)、C(94-ERAETRL-100)、D(135-LKVENYPP-142)、E(157-GVSEATT-163)和F(184-KMRGASKTEVYNSFRDP-200),均位于N蛋白表面且含有柔性较大的loop区。相应的六段人工合成多肽都与SFTSV临床病例血清呈阳性反应,确定它们均为优势线性B细胞抗原决定簇位点,其各自检测结果与商品化N蛋白抗体检测试剂盒相应检测结果进行线性回归分析表明呈正相关。综合运用上述多种方法,本研究成功地预测并确定了SFTSV N蛋白的线性B细胞抗原决定簇位点,为该病毒抗原特异性的分子基础研究以及相关疾病的诊断和治疗奠定了基础。
- 陈军孙培蓓张锋顾春燕高孟倪红霞罗永能
- 铝吸附甲型肝炎灭活疫苗抗原解离方法研究被引量：1
- 2014年
- 目的建立铝吸附甲型肝炎（甲肝）灭活疫苗中甲肝病毒（HAV）抗原的解离方法。方法选择20％二乙醇胺1．25mL、10％TritonX．1000．2mL和PBS8．55mL混合液作为解离液A；pH7．2的3％（w／v）柠檬酸缓冲液作为解离液B；20％（w／v）柠檬酸三钠为解离液C。分别检测3种解离液在不同的解离条件下对铝佐剂甲型肝炎灭活疫苗的解离情况，用ELISA法检测解离后的HAV抗原含量，计算抗原回收率，确定最佳解离液及解离条件，并验证其可重复性。结果3种解离液HAV抗原解离试验显示，解离液C在室温（20~28℃）条件下解离1h，HAV抗原的回收率最高，可达95％及以上，重复试验的变异系数均〈10％。结论20％（w／v）柠檬酸三钠可作为铝佐剂甲肝灭活疫苗的首选抗原解离剂，该解离剂配方简单，操作简便，结果重复性好，准确度高。
- 王静华潘海桦顾春燕
- 关键词：肝炎病毒甲型灭活疫苗铝佐剂
- 针对肠道病毒71型的新型重组融合蛋白类病毒颗粒疫苗研制及其免疫效果评价
- 2017年
- 目的 研制针对肠道病毒71型（EV71）的新型重组类病毒颗粒疫苗,并评价其免疫效果.方法 利用诺如病毒（NoV）衣壳蛋白（VP1）P区（NoVP）可呈现外源抗原并形成类病毒颗粒的特点,构建获得只包含NoVP或在其表面环位点串联插入EV71衣壳蛋白的三个特异性抗原位点（VP1的SP55和SP70,VP2的VP2-28）基因片段,克隆至质粒pET-28a（＋）后分别转化大肠杆菌后诱导表达,通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）、免疫印迹和透射电镜鉴定和观察表达的重组融合蛋白（NoVP＋ EV71-SP55-SP70-VP2-28）和NoVP蛋白.同时,采用随机分组法将BALB/C小鼠分成A、B和C三组,每组10只,分别用重组融合蛋白（NoVP＋ EV71-SP55-SP70-VP2-28）、NoVP和透析液免疫获得抗血清,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠血清中特异性抗体;将小鼠血清与EV71 H3-TY株混合,加入Vero细胞,通过微量中和实验检测特异性抗体效价.采用方差分析和Bonferroni检验对数据进行分析.结果 重组表达产物在大肠杆菌中以包涵体形式存在,SDS-PAGE显示重组融合蛋白和NoVP相对分子质量约为43×10^3和36×10^3;免疫印迹显示重组融合蛋白在相对分子质量约为43×10^3处有特异性条带,透射电镜观察显示重组融合蛋白呈现类病毒颗粒.ELISA显示与SP70多肽反应的小鼠血清吸光度（A490）值A组明显大于B组和C组（F=13.860,P＜0.05）;微量中和实验显示A组小鼠血清针对EV71 H3-TY株的几何平均中和滴度为1∶38.结论 本研究初步获得了针对EV71的一种新型重组融合蛋白类病毒颗粒疫苗,其具有良好的抗原性和特异性,能诱导小鼠产生较高中和滴度的特异性抗体.
- 蔡静顾春燕张锋高孟高丽美罗永能
- 关键词：肠道病毒属肠道病毒71型ENTEROVIRUS
- MRC-5人二倍体细胞培养条件的优化被引量：3
- 2015年
- 目的对MRC-5人二倍体细胞培养条件的优化比较。方法用3种不同的培养基将MRC-5人二倍体细胞在T25方瓶和Spinner培养系统Cytodex1微载体2种培养体系进行培养比较,每天观察细胞形态,进行细胞计数,绘制生长曲线,并检测葡萄糖-乳酸值,筛选出1种较适宜培养基,用不同级别的牛血清比较其生长增殖情况。结果 3种培养基在细胞形态,细胞的贴壁、分裂以及维持等方面无明显差异。但在增殖上,在2种培养体系中MEM(43.25±0.60)×104cells/m L,(12.98±1.27)×105cells/m L与M199(35.40±1.41)×104cells/m L,(10.76±1.31)×105cells/m L及DMEM/F12(36.75±1.59)×104cells/m L,(11.22±1.42)×105cells/m L比较,差异均有统计学意义(P<0.01),MEM培养液细胞增殖5.17和6.49倍,优于M199和DMEM/F12培养液。进口胎牛血清细胞增殖(4.55±0.51)×105cells/m L,优于其他3种牛血清的(4.12±1.03)×105cells/m L、(3.59±0.48)×105cells/m L和(3.53±0.52)×105cells/m L。结论 3种培养基都可以用于MRC-5人二倍体细胞的繁殖培养,但MEM培养液更佳。进口胎牛血清较其他血清有优势。
- 顾春燕唐彩华李剑波包佳源姜云水
- 关键词：细胞生长周期牛血清微载体
