闫小晶
- 作品数：11 被引量：29H指数：3
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- 丙戊酸钠通过激活miR-148a-3p/Mcl-1通路促进SH-SY5Y细胞凋亡被引量：1
- 2020年
- 目的探讨抗癫痫药丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)对神经细胞的凋亡诱导作用及相关机制。方法将人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)用不同剂量VPA处理,流式分析细胞凋亡水平变化,Western blot检测Mcl-1蛋白水平变化,定量PCR分析Mcl-1 mRNA与miR-148a-3p水平变化,报告基因实验检测Mcl-1启动子活性变化。用miR-148a-3p抑制剂联合VPA处理细胞,观察miR-184a-3p在VPA下调Mcl-1表达中的作用及对VPA促SH-SY5Y细胞凋亡效果的影响。结果VPA可促进SH-SY5Y细胞凋亡,并抑制SH-SY5Y细胞中Mcl-1的蛋白和mRNA水平(P<0.05)。VPA处理不影响SH-SY5Y细胞中Mcl-1的启动子活性(P>0.05)。VPA可显著增强SH-SY5Y细胞中miR-148a-3p的表达(P<0.05),使用miR-148a-3p抑制剂可减轻VPA对Mcl-1表达的抑制作用,并减弱VPA的促细胞凋亡效果。结论VPA可能通过激活miR-148a-3p/Mcl-1信号通路促进SH-SY5Y细胞凋亡。
- 戴旭芳闫小晶闫小晶谢鹏
- 关键词：丙戊酸钠SH-SY5Y细胞MCL-1
- 左旋棉酚通过下调X连锁凋亡抑制蛋白增强表柔比星抑制肝细胞癌的体外作用
- 2022年
- 目的探讨左旋棉酚增强表柔比星杀伤肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞的作用及可能机制。方法将HCC细胞(Hep3B及HuH7)分为溶剂对照组、左旋棉酚处理组、表柔比星处理组、联合用药组、对照siRNA+表柔比星组、沉默X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)+表柔比星处理组、对照质粒+联合用药组、过表达XIAP+联合用药组,采用CCK-8方法检测各组细胞存活情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;Western blot检测剪切型聚(腺苷二磷酸-核糖)聚合酶[cleaved poly(ADP-ribose)polymerase,Cle-PARP]水平、XIAP水平及真核起始因子4E(eukaryotic initiation factor 4E,eIF4E)磷酸化水平。结果与溶剂对照相比,低浓度的左旋棉酚(5μmol/L)单独处理对HCC细胞存活无明显抑制作用(P>0.05),而将左旋棉酚与表柔比星联合使用后可显著增强表柔比星对HCC细胞的杀伤(P<0.05)、促进HCC细胞的凋亡及对剪切型PARP的诱导,同时还能抑制表柔比星诱导的XIAP上调及eIF4E磷酸化。此外,表柔比星抑制HCC细胞存活及升高剪切型PARP的能力能被沉默XIAP所增强,而被过表达XIAP所抑制。结论左旋棉酚可增强表柔比星抑制HCC细胞存活促进细胞凋亡的能力,其机制可能与抑制XIAP上调和eIF4E磷酸化有关,提示左旋棉酚可作为表柔比星治疗HCC的潜在增敏剂。
- 蒋文斌孙梁博杜烨湘肖云华黎伯胜闫小晶吴亚冉连继勤何凤田
- 关键词：表柔比星左旋棉酚肝细胞癌X连锁凋亡抑制蛋白
- 二氯乙酸盐增强盐酸吡柔比星杀伤肝癌细胞的研究被引量：2
- 2016年
- 目的探讨二氯乙酸盐(Dichloroacetate,DCA)增强盐酸吡柔比星(Pirarubicin,THP)杀伤肝癌细胞的效果及可能机制。方法用40μmol/L DCA与不同浓度(0、200、400、600、800μmol/L)盐酸吡柔比星(THP)联合处理肝癌Hep G2细胞24 h,采用CCK-8法检测对细胞增殖的影响。然后用40μmol/L二氯乙酸盐与600μmol/L盐酸吡柔比星联合处理肝癌Hep G2细胞24 h,用Western blot检测细胞中PARP的表达变化及JNK的磷酸化水平;用DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS的水平。结果 DCA可显著增强不同浓度THP对肝癌Hep G2细胞的杀伤效果,与PBS组相比具有统计学差异(P<0.05);DCA联合THP处理24 h可显著升高细胞内的ROS水平,与PBS联合THP组相比具有统计学差异(P<0.05);此外,DCA联合THP可使Hep G2细胞中凋亡相关分子PARP的剪切明显增加,并增强JNK的磷酸化水平。抗氧化剂NAC可显著降低DCA与THP联合处理对Hep G2细胞中JNK的激活作用。结论 DCA可显著增强THP杀伤肝癌细胞效应,其机制可能与ROS/JNK通路的激活有关。
- 闫小晶倪振洪吴亚冉梁书龙秦利燕何凤田连继勤
- 关键词：二氯乙酸盐肝癌盐酸吡柔比星活性氧簇C-JUN氨基末端激酶
- 二氯乙酸盐激活ROS-JNK通路增强索拉非尼对肝癌细胞增殖的抑制作用被引量：1
- 2019年
- 目的探讨二氯乙酸盐(dichloroacetate,DCA)与索拉非尼(sorafenib)联合使用对肝癌细胞Hep3B增殖抑制的效果及可能机制。方法将Hep3B细胞分为对照组(DMSO)、DCA处理组(5 mmol/L)、索拉非尼处理组(10μmol/L)和联合组(5 mmol/L DCA联合10μmol/L索拉非尼)4个组,处理24 h后,在显微镜下观察各组细胞形态;采用CCK-8检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡;通过Western blot检测凋亡相关蛋白PARP的表达和p-JNK的水平;采用活性氧(ROS)检测试剂盒检测细胞ROS的变化;用流式细胞仪检测加入抗氧化剂和阻断JNK通路后的细胞凋亡的变化。结果 DCA和索拉非尼联合处理24 h能够显著改变细胞形态,杀伤细胞。与对照组和单独用药组比较,联合组显著增强对肝癌Hep3B细胞的增殖抑制效果(P<0.05),明显增加Hep3B细胞中PARP的剪切与JNK的磷酸化水平,胞内ROS水平也明显升高;联合使用抗氧化剂NAC可显著抑制DCA和索拉非尼处理导致的JNK磷酸化水平升高和对Hep3B细胞的增殖抑制效果。结论 DCA和索拉非尼联合使用可显著抑制肝癌细胞Hep3B的增殖,其机制可能与激活ROS-JNK通路有关。
- 孙梁博姚洁李涛陈岺曦陈岺曦闫小晶何凤田
- 关键词：二氯乙酸盐索拉非尼肝癌细胞增殖
- 三结构域蛋白21通过下调自噬相关蛋白4B抑制肝细胞癌细胞增殖的实验研究被引量：7
- 2019年
- 目的探讨三结构域蛋白21(tripartite motif 21,TRIM21)抑制肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞增殖的可能机制。方法采用TCGA数据库的样本数据分析TRIM21在HCC组织中的表达水平;Western blot检测HCC细胞系中TRIM21表达情况,在HepG2细胞中过表达TRIM21,并在SMMC7721细胞中敲低TRIM21;CCK-8和细胞克隆形成实验分别检测过表达和敲低TRIM21对HepG2和SMMC7721细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡的情况;Western blot检测TRIM21对自噬相关蛋白4B(autophagy related 4B,ATG4B)水平的影响;分别在HepG2细胞中下调ATG4B表达和在SMMC7721细胞中过表达ATG4B,CCK-8检测细胞增殖变化,流式细胞术检测细胞周期变化。结果 TRIM21在HCC组织中的表达水平较正常肝组织显著下调(n=49,P<0.05);在HepG2细胞中过表达TRIM21能显著降低细胞存活率(P<0.01)、抑制细胞增殖(P<0.01),在SMMC7721细胞中下调TRIM21的表达能显著增加细胞存活率(P<0.05)、促进细胞增殖(P<0.05)。过表达或敲低TRIM21对HCC细胞凋亡影响不明显;TRIM21在HCC细胞中可以抑制ATG4B的表达;而在HCC细胞中过表达或下调ATG4B也可以发挥促进或抑制细胞增殖的效果(P<0.05),ATG4B影响HCC细胞增殖的机制主要是改变细胞周期进程。结论 TRIM21在HCC中可通过下调ATG4B而抑制细胞增殖。
- 李涛陈岺曦陈岺曦闫小晶闫小晶连继勤
- 关键词：细胞增殖
- MiR-7下调LXRβ表达而抑制HepG2细胞脂质生成的作用
- 2016年
- 目的初步探讨miR-7对LXRβ的抑制作用及其在肝细胞脂质生成中的作用。方法生物信息学分析,预测LXRβmRNA的3'-UTR上miR-7的可能结合位点。在人肝细胞系Hep G2中转染miR-7,以Real-time PCR、Western blot检测LXRβmRNA水平和蛋白水平表达的变化;构建LXRβ3'-UTR报告基因质粒p MIR/LXRβ,Report assay检测报告基因荧光素酶活性;Real-time PCR检测miR-7对LXRβ激动剂诱导的脂质生成相关靶基因FAS、ACC的表达变化。结果在人肝细胞中,miR-7能够显著抑制LXRβ的表达(P<0.05),且miR-7能降低LXRβ重组质粒p MIR/LXRβ的荧光素酶活性(P<0.05)。同时抑制其激动剂对脂质代谢相关靶基因的诱导作用。结论 miR-7可通过结合在LXRβ3'-UTR区域而抑制其表达,进而抑制FAS、ACC的表达而抑制脂质生成。
- 付晓红钟丹许志臻周鹏闫小晶赵力黄刚
- 关键词：肝细胞
- 白藜芦醇上调BATF2表达及抑制肝癌细胞增殖的研究被引量：3
- 2016年
- 目的初步探讨白藜芦醇对BATF2表达的调控作用及对肝癌细胞(HepG2)增殖能力的影响。方法用不同剂量的白藜芦醇(终浓度分别为20、40、80μmol/L)处理HepG2细胞,进行逆转录PCR(RT-PCR)、实时定量PCR(Real-time PCR)、Western blot检测碱性亮氨酸拉链转录因子2(BATF2)mRNA和蛋白水平表达的变化,并采用细胞增殖检测试剂(CCK-8)实验检测对细胞增殖能力的影响。结果在HepG2细胞中,白藜芦醇能剂量依赖性地诱导BATF2在转录和翻译水平的表达,并抑制细胞的增殖(P<0.05);基因检测发现白藜芦醇显著诱导BATF2启动区活性,-244^-152区域存在白藜芦醇的可能结合位点。结论白藜芦醇能增强HepG2细胞中BATF2的表达并抑制细胞的增殖,提示上调BATF2的表达可能是白藜芦醇抑制肝癌细胞增殖的机制之一。
- 付晓红许志臻钟丹吕细林闫小晶赵力黄刚
- 关键词：肝肿瘤细胞增殖肝癌细胞白藜芦醇
- 下调miR-4443/TIMP2信号通路增强HepG2细胞对索拉非尼的敏感性被引量：1
- 2021年
- 目的探讨下调miR-4443/TIMP2信号通路后肝癌HepG2细胞对索拉非尼敏感性的影响。方法将HepG2细胞分为对照组(DMSO)与索拉非尼处理组(10μmol/L),索拉非尼处理HepG2细胞24 h后,RT-qPCR检测miR-4443的变化;脂质体法将miR-4443模拟物与miR-4443抑制剂转染HepG2细胞,通过CCK-8检测转染miR-4443模拟物或抑制剂后联用索拉非尼对HepG2细胞活性的影响;生物信息学预测miR-4443的下游靶基因,索拉非尼处理24 h后通过RT-qPCR和Western blot分别检测下游靶基因TIMP2 mRNA及其蛋白水平的变化;转染miR-4443模拟物、抑制剂后,RT-qPCR和Western blot分别检测TIMP2 mRNA以及蛋白含量的变化;在HepG2细胞中通过脂质体法转染TIMP2 siRNA,Western blot检测TIMP2蛋白含量;CCK-8检测敲低TIMP2后联用索拉非尼对HepG2细胞活性的影响。结果与对照组相比,索拉非尼处理组HepG2细胞中miR-4443的含量显著降低(P<0.05);转染miR-4443模拟物可显著降低索拉非尼对细胞活性的抑制(P<0.05),而转染其抑制剂则可显著增强索拉非尼的这一作用(P<0.05);生物信息学预测结果显示miR-4443结合的下游靶基因为TIMP2;索拉非尼处理后HepG2细胞中TIMP2的mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.05);而在HepG2细胞中转染miR-4443的模拟物或抑制剂则可使TIMP2的mRNA表达量相应下降或上升,转染模拟物后TIMP2蛋白表达显著降低(P<0.05),表明miR-4443与TIMP2间存在调控关系;用TIMP2 siRNA降低TIMP2表达后,可显著增强索拉非尼对HepG2细胞活性的抑制效果(P<0.05)。结论下调miR-4443/TIMP2信号通路可以增强HepG2细胞对索拉非尼的敏感性。
- 肖翰希张越婷孙梁博李涛陈岺曦闫小晶何凤田连继勤
- 关键词：索拉非尼HEPG2细胞TIMP2耐药
- 盐酸吡柔比星通过上调ATG4B增强HeLa细胞保护性自噬被引量：2
- 2016年
- 目的探讨盐酸吡柔比星增强宫颈癌He La细胞自噬水平的可能机制。方法采用CCK-8检测盐酸吡柔比星单独或联用自噬抑制剂氯喹对He La细胞增殖的影响;台盼蓝染色实验检测盐酸吡柔比星单独或联用自噬抑制剂氯喹对He La细胞死亡的影响;GFP-LC3质粒转染He La细胞后观察盐酸吡柔比星对自噬小体形成的影响;Western blot检测细胞中自噬标志分子Ⅱ型微管相关蛋白轻链3(microtuble-associated protein light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)、自噬相关分子自噬相关蛋白4B(autophapy related 4B,ATG4B)的表达情况。CCK-8实验及台盼蓝染色实验观察在有或者无自噬抑制剂氯喹作用下以及shRNA下调He La细胞中的ATG4B后盐酸吡柔比星对He La细胞的杀伤效应的影响。结果盐酸吡柔比星能剂量依赖地抑制He La细胞的增殖并促进其死亡(P<0.05);盐酸吡柔比星处理能显著增加He La细胞中自噬小体的数量,并显著上调自噬标志分子LC3-II、自噬关键酶ATG4B的表达;自噬抑制剂氯喹可显著增强盐酸吡柔比星的杀细胞效应(P<0.05),shRNA干扰ATG4B可抑制盐酸吡柔比星对He La细胞中自噬的增强作用(P<0.05),并增强盐酸吡柔比星的杀细胞效应(P<0.05)。结论盐酸吡柔比星通过上调ATG4B而增强的自噬对He La细胞起保护作用。
- 吴亚冉倪振洪闫小晶郑英如何凤田连继勤
- 关键词：盐酸吡柔比星自噬宫颈癌
- 激活miR-101-3p/EZH2通路增敏索拉非尼抗肝癌HepG2细胞的效果被引量：3
- 2020年
- 目的探讨激活miR-101-3p/EZH2通路在增敏索拉非尼抗肝癌HepG2细胞中的意义。方法将人肝癌细胞HepG2分成对照组(DMSO)和索拉非尼处理组(10μmol/L),处理24 h后,定量PCR检测miR-101-3p表达水平变化;生物信息学预测miR-101-3p结合的靶基因;在肝癌细胞中过表达miR-101-3p后Western blot和定量PCR检测zeste同源蛋白2增强子(enhancer of zeste homolog 2 protein,EZH2)表达水平变化;双荧光素酶报告基因实验验证miR-101-3p和EZH2的靶向关系;Western blot检测索拉非尼处理对EZH2表达水平的影响;在HepG2细胞中过表达miR-101-3p或添加EZH2抑制剂EPZ-6438后联合索拉非尼处理,CCK-8检测对HepG2细胞存活的影响。结果索拉非尼处理后HepG2细胞中miR-101-3p表达水平显著降低(P<0.05);miR-101-3p可在HepG2细胞中下调EZH2的表达(P<0.05);miR-101-3p与EZH2 mRNA 3'-UTR存在直接结合(P<0.05);索拉非尼处理后HepG2细胞中EZH2表达水平显著升高(P<0.05);过表达miR-101-3p或EZH2抑制剂EPZ-6438均可增加索拉非尼对HepG2细胞杀伤的敏感性(P<0.05)。结论激活miR-101-3p/EZH2通路可增敏索拉非尼的抗肝癌细胞HepG2效果。
- 张越婷肖翰希孙梁博李涛陈岺曦闫小晶何凤田连继勤
- 关键词：MICRORNA索拉非尼耐药肝癌EZH2
