王立民
- 作品数：69 被引量：71H指数：5
- 供职机构：新疆农垦科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项转基因生物新品种培育专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生经济管理更多>>
- 一种单细胞克隆培养方法
- 本发明公开了一种单细胞克隆培养方法，包括：步骤1，制备培养液微滴；步骤2，准备显微操作系统；步骤3，筛选单克隆细胞；步骤4，利用步骤2所述的显微操作系统将操作针内的目标细胞以每个液滴放一枚细胞逐一放入步骤1的培养液微滴内...
- 王立民周平甘尚权唐红郭延华张译元
- 文献传递
- 5号染色体两候选SNP基因定位以及与绵羊臀尾性状的关联分析被引量：1
- 2016年
- 脂尾(臀)性状是绵羊逆境生存的耐逆性状,其臀尾部大量储积脂肪的基因组变异研究目前仍是空白。本研究以国外新近报道的5号染色体上存在的可能与尾脂性状相关联的两处SNP为研究对象,分别采用PCR-RFLP和PCR-SSCP的方法检测两SNP在我国尾型极端差异的阿勒泰羊、湖羊、细毛羊以及藏羊群体中的多态性、基因型与等位基因分布,验证两SNP是否可作为我国低脂绵羊新品种培育的分子标记。研究结果表明:两SNP在我国脂尾(臀)型阿勒泰羊、湖羊与瘦尾型中国美利奴羊细毛羊和藏羊群体中高度分化,两SNP的T等基因与A等位基因在瘦尾型绵羊品种中高频出现,存在与瘦尾性状密切相关的趋势,提示此两个SNP可作为选育低脂绵羊新品种的有效分子标记。
- 唐红徐梦思孟季猛周平王立民沈敏高磊石国庆刘守仁王新华杨井泉甘尚权
- 关键词：等位基因
- 一种辅助鉴定绵羊的脂尾性状的方法及其专用分子标记
- 本发明公开了一种辅助鉴定绵羊的脂尾性状的方法及其专用分子标记。本发明提供了一种辅助鉴定待测绵羊群体为哪种脂尾性状的群体的方法，包括如下步骤：（1）从待测绵羊群体中随机抽取具有统计意义的待测样本；（2）检测待测样本中X染色...
- 王新华刘守仁甘尚权张伟沈敏周平王立民高磊杨井泉梁耀伟宿俊吉李晓兰王开胜吴向未
- 文献传递
- 不同品种绵羔羊超数排卵及胚胎体外生产技术研究被引量：13
- 2012年
- 探讨品种对羔羊超数排卵效果和卵母细胞发育能力的影响,并将体外受精胚胎进行了移植,为研究利用绵羊羔羊卵母细胞生产后代提供理论和技术方法。对4～8周龄不同品种羔羊用FSH+PSMG处理后获得的平均卵母细胞数量和体外胚胎卵裂率和囊胚率进行了比较,并比较成熟液中有无β-巯基乙醇对胚胎卵裂率和囊胚率的影响。结果:各品种获得的平均卵母细胞数分别为:哈萨克为210.22枚,湖羊为0枚,美利奴为135.80枚,湖羊与哈萨克的杂交后代为37.80枚,湖羊羔羊和湖羊与哈萨克羊的杂交羔羊获得的平均卵母细胞数显著低于哈萨克羔羊(P<0.01,P<0.05)。哈萨克羔羊卵裂率(69.0%)显著高于湖羊与哈萨克羊杂交羔羊(66.4%,P<0.05);哈萨克羔羊囊胚率(17.5%)和美利奴羔羊囊胚率(16.2%)显著高于湖羊×哈萨克羔羊(13.8%)(P<0.01,P<0.05)。β-巯基乙醇对羔羊胚胎卵裂率影响不显著,对囊胚率影响极显著(P<0.01)。哈萨克羔羊卵子体外受精获得的2-8细胞胚胎进行输卵管移植,14只受体羊中7只妊娠,妊娠率为50.0%;共产羔9只,其中8只存活。
- 郭洪万鹏程石文艳倪建宏代蓉周平王立民石国庆
- 关键词：羔羊超数排卵发育能力胚胎移植
- 转IGF-1基因超细毛羊培育的研究
- 为进一步培育高产超细毛羊新品种,利用转基因体细胞克隆获得的转IGF-1基因超细毛羊,采用染色体步移、基因组重测序的方法明确插入基因的位点,结合定量PCR和western-blot,检测了IGF-1基因在不同组织和不同代次...
- 周平王立民唐红郭延华张译元刘守仁王新华
- 一种快速检测外源基因对羊毛作用的方法
- 本发明公开了一种快速检测外源基因对羊毛作用的方法，将外源基因用活体转染试剂包裹注射到绵羊真皮层作为实验区，在该绵羊的不同部位注射稀释外源基因的溶质作为对照区，通过实验区和对照区的对比检测外源基因表达及其对羊毛作用。本发明...
- 周平王立民代蓉唐红王新华刘守仁
- 文献传递
- 绵羊胚胎FGF5基因单碱基突变体系的建立被引量：1
- 2021年
- 研究旨在利用单碱基编辑技术定点修饰绵羊(Ovis aries)成纤维细胞生长因子5(fibroblast growth factor 5,FGF5)基因第1外显子以引入终止密码子,获得定点编辑类型的绵羊胚胎,为培育具有长毛性状的绵羊提供试验材料。首先设计合成4个单导向RNA(single guide RNA,sgRNA)寡核苷酸链(sgRNA-T1~sgRNA-T4),构建4组不同的重组表达载体;将构建好的pGL3-U6-sgRNA-PGK-puromycin和pCMV-AncBE4max-P2A-GFP质粒以共转染的方法分别转入4组绵羊成纤维细胞,随后用CruiserTM酶对转染的细胞进行活性检测并在胚胎水平进行测序验证。结果显示,sgRNA-T1和sgRNA-T4组细胞的PCR产物可被CruiserTM酶酶切,且测序结果表明都具有靶向效果,编辑效率分别为68.75%和47.37%。利用显微注射技术将不同浓度的AncBE4max mRNA与有效sgRNA混合注射到绵羊孤雌激活胚胎中,并检测胚胎卵裂率、囊胚率和编辑效率,结果显示,胚胎水平的最佳注射浓度组合为AncBE4max(ng/μL)∶sgRNA(ng/μL)=100∶50,从该浓度组中随机挑选的单枚胚胎测序结果显示,引入终止密码子的编辑效率为80%。而sgRNA-T1在不同浓度组合的注射胚胎中均未检测到编辑。本研究针对FGF5基因的第1外显子,通过在成纤维细胞转染表达载体,成功筛选到高效靶向绵羊FGF5基因的2个sgRNA(T1、T4);通过显微注射绵羊孤雌激活胚胎,成功在胚胎上实现FGF5基因第1外显子打靶位点C→T的转变,为后期FGF5基因定点编辑羊的生产奠定基础。
- 蒙亚琦姚旭东任秀美奥郭延华唐红张译元王立民周平
- 关键词：绵羊
- 获取miRNA候选靶基因的方法及其专用反转录引物
- 本发明公开了获取miRNA的候选靶基因的方法及其专用反转录引物。该方法包括：1）以带茎环结构和目的miRNA种子序列的DNA为反转录引物，获取与目的miRNA种子序列互补的mRNA对应的cDNA第一条链，得到A库；2）以...
- 甘尚权高蕊王立民沈敏王新华刘守仁
- 文献传递
- 利用CRISPR/Cas9n系统编辑绵羊成纤维细胞生长因子5(FGF5)基因
- 2022年
- 成纤维细胞生长因子5(FGF5)是影响毛囊周期性活动及毛发生长的重要生长因子。本研究利用CRISPR/Cas9n系统靶向编辑绵羊成纤维细胞中FGF5基因。首先利用Gibson Assembly法将U6启动子引导表达单导向RNA(sgRNA)的原件构建至pX461质粒中,获得pX461-U6质粒;再将设计并合成好的1对靶向FGF5基因第3外显子的sgRNA及其互补链,经退火连接形成sgRNA-sg1和sgRNA-sg2双链后,分别克隆至带有BbsⅠ和BsaⅠ黏性末端的pX461-U6质粒。构建好的重组质粒pX461-U6-sg1+sg2经测序鉴定后,以电转染的方式转入绵羊成纤维细胞,72 h后收集细胞进行检测分析。经T7E1酶切检测分析表明,成功获得1对具有靶向效果的sgRNA,PCR扩增的FGF5基因片段经TA克隆后进行测序鉴定,结果sgRNA-sg1+sg2在靶位点的打靶效率为100%;缺失的核苷酸数从10到64个不等;基于预测的3D模型和RT-PCR结果显示,FGF5基因的突变将会影响FGF5蛋白与其受体的结合,导致FGF5蛋白失去其生物学功能。本研究构建了可以在同一载体中同时表达2条sgRNA和Cas9n以及绿色荧光蛋白(GFP)的质粒,瞬时转染至绵羊成纤维细胞后,成功获得了高效靶向绵羊FGF5基因的sgRNA位点,为精确和高效的靶向基因工程提供了科学依据。
- 蒙亚琦姚旭东任秀美奥郭延华唐红张译元王立民周平
- 关键词：绵羊基因敲除
- 一种布病检测反应装置
- 本实用新型公开了一种布病检测反应装置，涉及检测装置技术领域，本实用新型包括试管座装置、转动装置、驱动电机、支撑装置以及箱体装置，所述试管座装置的一表面与转动装置的一表面连接，所述转动装置的一表面与驱动电机的输出端连接，所...
- 杨杨代蓉刘昱成张倩王立民赵卓
