王壮志
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院基础医学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- SKW6细胞在转导6A8α-甘露糖苷酶反义cDNA后对抗Fas抗体诱导的凋亡
- 2001年
- 鉴于蛋白质糖基化的重要生物学意义，以腺相关病毒为载体，把编码 ６Ａ８ α－ 甘露糖苷酶的ｃＤＮＡ ３’端１３５８ｂｐ的反向片段转导入ＥＢ病毒转化的Ｂ细胞株ＳＫＷ６， 探讨６Ａ８ α-甘露糖苷酶表达抑制对抗Ｆａｓ抗体诱导凋亡的影响．反义６Ａ８转导成功及 表达用 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交及ＲＴ－ＰＣＲ检测， ６Ａ８ α－甘露糖苷酶表达用 Ｃｏｎ Ａ结合试验检测． Ｇｉｅｍｓａ染色， Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ染色及梯形 ＤＮＡ电泳显示， Ｆａｓ抗体能诱导 ＳＫＷ６细胞凋亡，但 ６Ａ８ α－甘露糖苷酶表达抑制的细胞对Ｆａｓ抗体诱导的凋亡发生抵抗，而转导正义 ６Ａ８ 或空载载体则无影响． ６Ａ８ α－甘露糖苷酶表达状况对 ＳＫＷ６细胞表面 Ｆａｓ分子表达没有影响．
- 史耕先靳玉兰王壮志崔巍刘音王讯朱立平
- 胞膜(Ecto)-6A8α-甘露糖苷酶
- 2003年
- 68Aα-甘露糖苷酶是本实验室克隆的cDNA(GenBank的登记号为AF044414)编码的一个新的人α-甘露糖苷酶[1].该cDNA长3300bp,其开放阅读框架编码1062个氨基酸的蛋白质.蛋白质的1028～1048aa为穿膜区.6A8α-甘露糖苷酶属工型穿膜蛋白.6A8基因定位于第15号染色体q11～13区.
- 朱立平王壮志史耕先刘音王汛赵方萄
- 关键词：单克隆抗体糖基化
- 转导反向6A8α-甘露糖苷酶cDNA对抗Fas抗体诱导Jurkat细胞凋亡的影响被引量：4
- 2001年
- 用梯形DNA电泳与Gimsa染色研究人T细胞瘤细胞株Jurkat在转导编码人 6A8α 甘露糖苷酶基因的反向cDNA后 ,对抗Fas抗体诱导凋亡敏感性的变化 ,并用间接免疫荧光染色 (流式细胞仪 )检测细胞表面Fas分子的表达。结果表明 ,抗Fas抗体诱导细胞 2 4h后 ,野生型及转导空载载体的Jurkat细胞出现明显的梯形DNA ,两者之间无明显差异 ,但转导反向 6A8cDNA的细胞未见明显的梯形DNA。Gimsa染色结果显示转导反向 6A8cDNA的Ju rkat细胞中凋亡细胞数明显减少 ,而转导空载载体则无影响。Jurkat细胞为Fas(CD95 ,Apo 1)全阳性细胞 ,转导反向 6A8cDNA或空载载体对Fas表达阳性率与Fas表达强度无明显影响。以上结果提示 ,转导编码 6A8α 甘露糖苷酶基因的反向cDNA使人T细胞株Jurkat对抗人Fas抗体诱导的凋亡作用产生耐受。
- 岳玮史耕先王壮志刘音朱立平
- 关键词：细胞凋亡JURKAT细胞
- 6A8α-甘露糖苷酶酶解p-nitrophenyl-α-D-mannopyranoside被引量：5
- 2001年
- 目的明确6A8cDNA编码蛋白质的α-甘露糖苷酶性质。方法利用基因重组技术将克隆到的3个DNA片段拼接成完整6A8cDNA将其插入到真核表达载体pCDI转染COS-7细胞,用酶活性检测与Westernblot对瞬时表达的蛋白质的性质进行鉴定。结果拼接后的cDNA片段经测序完全符合6A8cDNA碱基顺序。转染重组表达载体pCDI-6A8的COS-7细胞的匀浆对p-nitrophenyl-α-D-mannopyranoside的酶解作用为转染空载体pCDI的细胞及野生型细胞的3～4倍,且这种酶解作用不能被swainsonine所抑制。Westernblot检测显示在相对分子质量(Mr)120000处有一明显蛋白带,此带的显影于转染pCDI-6A8cDNA的细胞明显深于转染空载pCDI及野生型细胞。结论6A8cDNA编码的蛋白质确为一种α-甘露糖苷酶,属于Ⅱ类α-甘露糖苷酶。
- 王壮志李琳史耕先刘音赵方萄朱立平
- 关键词：COS-7细胞
