李克勤
- 作品数：8 被引量：182H指数：3
- 供职机构：解放军第307医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 基质金属蛋白酶抑制剂4的克隆表达及性质
- 组织型基质金属蛋白酶抑制刑是天然存在于体内的基质金属蛋白酶类的抑制剂。基质金属蛋白酶及其抑制剂的分子比率失调将导致诸如肿瘤转移、关节炎、心血管病等与组织重构有关的疾病发生。目前共发现了四种组织型基质金属蛋白酶抑制剂（TI...
- 李克勤史跃年李春海
- TRAIL胞外段基因克隆及其表达与纯化被引量：1
- 2002年
- 目的:克隆TNF相关的诱导凋亡配体胞膜外段基因（the extracellular regionof the human TRAIL cDNA,TPAILex）,构建表达载体并在大肠杆菌DH5α中高效表达有生物学活性的TRAIL蛋白胞膜外段。方法:抗CD3McAb刺激正常人外周血淋巴细胞,用RT-PCR、巢式-PCR方法从活化的淋巴细胞中获得人TRAIL基因及其胞膜外段oDNA,并克隆到pGEM-T Easy载体中,DNA测序鉴定。将TRAIL的胞膜外段基因插入表达载体pGEX-2T,构建重组表达质粒pGEX/TRAILex,用IPTC诱导表达TRAIL蛋白的胞膜外段,GST-Agarose4B层析柱纯化 GST-TRAILex融合蛋白,Western-blot鉴定纯化产物。结果:抗CD3 McAb能诱导正常人外周血单个核细胞TRAIL的高表达,成功地克隆了TRAIL胞膜外段基因,构建了重组表达载体pGEX/TRAILex,IPTG诱导后得到高效表达的TRAIL蛋白胞膜外段,经12％SDS-PAGE分析,可观察到一分子量和理论值相符（约54kD）的诱导表达带。Kodak软件分析表面GST-TRAIL胞膜外段融合蛋白的表达量占菌体蛋白总量的28％,进一步分析证实TRAIL蛋白的胞膜外段主要以可溶性的形式表达,用GST-Agarose4B层析柱纯化超声破菌后的上清,每升细菌培养液可得到9.8mg纯度的95％以上的GST-Tex。Western-blot结果证实54kD的表达带可与鼠抗TRAIL McAb起特异性反应。结?
- 周海胜田方肖凤君张立新李克勤
- 关键词：基因克隆基因表达蛋白质纯化肿瘤生物治疗
- TNF相关的凋亡诱导配体表达、纯化及其功能初步分析
- TNF 相关的诱导凋亡配体（TNF-Related Apotosis Induced -Ligand,TRAIL）是 TNF 超家族中一种新成员,也是一种Ⅱ型跨膜蛋白,与 Apo-1L（FasL）有较高的同源性,又称为 ...
- 周海胜田方肖凤君张立新李克勤
- 关键词：TRAIL基因克隆细胞凋亡融合蛋白表达
- 文献传递
- 黏附诱导卵巢癌细胞基质金属蛋白酶-9基因的表达被引量：21
- 2002年
- 目的 观察黏附纤黏连蛋白后肿瘤细胞基质金属蛋白酶 (MMP)基因的表达 ,揭示细胞侵袭发生的机理。方法 纤黏连蛋白与A2 780人卵巢癌细胞相互作用后 ,用反转录PCR观察MMPmRNA的表达 ;从HT10 80细胞基因组DNA克隆MMP9启动子区基因 ,构建MMP 9 pGL2报告基因载体 ,瞬时转染A2 780细胞 ,通过测定萤火虫酶活性 ,观察纤黏连蛋白对MMP9启动子活性的影响。结果 A2 780细胞不表达MMP基因 ,黏附后细胞内MMP 9mRNA含量明显增加 ,这一作用与黏附时间有关。克隆MMP 9基因启动子并转染细胞 ,黏附后转染细胞内MMP 9基因启动子活性明显增强。结论 细胞 细胞外基质黏附可刺激MMP基因转录活性 ,诱导MMP基因表达 ,进而促进细胞侵袭。
- 颜春洪田方肖风君李克勤李春海
- 关键词：卵巢肿瘤基质金属蛋白酶基因表达卵巢癌
- 肿瘤转移过程中的微血管生成的分子机制
- 肿瘤的侵袭和转移是癌症患者死亡的主要原因之一,在肿瘤转移的复杂过程,肿瘤的微血管生成起了非常关键的作用。对肿瘤转移及微血管生成的分子机制及其相互关系的研究将有助于克服肿瘤转移和探索新的治疗方法。近几年来,关于肿瘤新生血管...
- 李克勤李春海
- 肿瘤微血管生成的机制与肿瘤侵袭和转移被引量：145
- 2000年
- 李春海李克勤
- 关键词：肿瘤微血管生成肿瘤侵袭肿瘤转移
- 人基质金属蛋白酶抑制剂-4（TIMP-4）的重组表达、基因转染和抗肿瘤转移生物学性质研究
- ＜正＞ 目的:肿瘤细胞发生侵袭和转移与蛋白水解酶水解胞外基质成分密切相关,其中,基质金属蛋白酶（ma-trix metalloproteinases,MMPs）是参与此过程的一个关键性蛋白酶。人体内有组织型基质金属蛋白酶...
- 李克勤李春海肖凤君田方Yuenian Eric Shi
- 文献传递
- 人组织型基质金属蛋白酶抑制剂-1在Pichia pastoris酵母中重组表达研究被引量：16
- 2001年
- 为研究组织型基质金属蛋白酶抑制剂 (TIMPs)的分子作用机制 ,探讨了在 Pichia pastoris酵母中高效表达分泌型人组织型基质金属蛋白酶抑制剂 - 1 (TIMP- 1 )的技术路线 ,并对产物性质进行初步研究 .通过 PCR从含有 TIMP- 1基因的 p BS质粒获得了该基因的全长序列 ,构建了 p PIC9/T1表达载体 ,电击法转化酵母 ,通过表型筛选和 PCR鉴定证实了目的基因已稳定整合入 Pichiapastoris酵母基因组中 .SDS- PAGE表明表达量高达 40 mg/L培养上清 .用免疫印迹法确定了产物的正确性 ;同时 ,反向明胶酶谱法证明了重组蛋白具有抑制基质金属蛋白酶的活性 .
- 李克勤李春海颜春洪
- 关键词：酵母表达系统
