李东
- 作品数：22 被引量：95H指数：7
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划教育部跨世纪优秀人才培养计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组人HSP70的制备及其提呈抗原作用的研究被引量：4
- 2001年
- 研究重组人热休克蛋白 70 (HSP70 )的制备及其提呈抗原的作用。采用不含葡萄糖的M9ZB培养基及终浓度为 0 .0 2mmol/LIPTG和 5mmol/L乳糖诱导带有人HSP70基因表达质粒的工程菌 ,表达效率达到 6 0 %,经DEAE阴离子交换层析柱可获得纯度 >90 %的HSP70。该纯化产物可于体外结合肿瘤抗原肽。利用含 5 %甘油的非变性PAGE分析可以快速鉴定HSP70与肿瘤抗原肽的结合。HSP70 -肿瘤抗原肽复合物在体外可以激活淋巴细胞的特异性杀肿瘤功能。
- 杨瑞冯作化张桂梅李东
- 关键词：热休克蛋白70抗原肽肿瘤
- 重组纤维连接蛋白多肽CH50对黑色素瘤B16细胞侵袭能力的抑制作用及机制被引量：6
- 2006年
- 目的研究重组纤维连接蛋白多肽CH50对黑色素瘤B16细胞侵袭能力抑制作用及其机制。方法将小鼠黑色素瘤B16细胞用CFSE标记,经尾静脉注射接种小鼠,分别在6 h和24 h取肺组织作冰冻切片,观察肿瘤细胞在肺部聚集和对肺组织侵袭情况;接种15 d后解剖小鼠取肺,观察B16细胞在肺表面形成转移结节数量差异;观察CH50多肽对B16细胞结合纤维连接蛋白和纤维蛋白原的影响;RT-PCR法检测B16细胞中转移相关基因的表达水平;zymography法检测MMP-9水平。结果CH50多肽短时间作用于B16细胞,注射细胞6 h后肺组织荧光结节数显著减少;而作用较长时间,注射细胞24 h后肺组织荧光结节数减少更为明显。CH50多肽处理过的B16细胞在肺部形成转移结节明显减少。CH50多肽能够显著抑制B16细胞结合纤维连接蛋白及结合后的细胞铺展能力及B16细胞结合纤维蛋白原的能力,能够显著下调B16细胞cdc2、αv、β3、MMP-9等基因的表达与MMP-9分泌。结论CH50多肽能够抑制黑色素瘤B16细胞的侵袭能力,抑制瘤细胞与黏附分子结合,抑制转移相关基因的表达,从而使肿瘤细胞的生物学特征发生改变。
- 吴丰华张桂梅刘毅耿辉李东袁野肖晗冯作化
- 关键词：纤维连接蛋白黑色素瘤纤维蛋白原
- 小鼠体内转染CH50多肽真核表达载体趋化免疫细胞在肿瘤治疗中的作用被引量：5
- 2002年
- 目的 研究体内转染表达CH5 0多肽对免疫细胞的趋化、聚集作用 ,探讨趋化聚集的免疫细胞增强抗肿瘤以及化疗后抗肿瘤的免疫力。方法 分别在小鼠后肢肌肉、接种肿瘤组织或化疗的肿瘤组织内注射 pCH5 10质粒进行转染 ,取转染部位组织制备石蜡切片 ,观察免疫细胞的聚集情况 ,并观察转染pCH5 10及联合化疗对肿瘤的治疗作用。结果 正常小鼠后肢肌肉转染 pCH5 10后 ,注射部位有大量免疫细胞聚集 ,其中主要是巨噬细胞、淋巴细胞、中性粒细胞 ,聚集的免疫细胞至少持续存在一周。肿瘤部位转染后 ,趋化聚集的免疫细胞分布于肿瘤组织周围 ,抑制了肿瘤细胞的生长。化疗后转染 ,仍有趋化聚集免疫细胞的作用 ,免疫细胞聚集数量相对只转染pCH5 10虽有所减少 ,但对肿瘤的抑制作用明显增强。结论 本文结果提示 ,在小鼠体内转染 pCH5 10表达的CH5 0多肽不仅能够趋化免疫细胞 ,提高局部抗肿瘤的免疫力 ,而且与化疗联合作用在肿瘤治疗中具有更大的研究潜力。
- 肖徽冯作化张桂梅李东
- 关键词：小鼠真核表达载体趋化免疫细胞肿瘤
- 重组多肽CH50抑制肿瘤细胞侵袭生长和血管形成能力被引量：7
- 2006年
- 目的观察纤连蛋白重组多肽CH50对小鼠肝癌细胞侵袭和肿瘤血管形成能力的影响,探讨CH50多肽治疗肿瘤可能的分子机制。方法接种H22肝癌细胞建立小鼠肿瘤模型,采用裸DNA-尾静脉注射方法在小鼠体内表达CH50多肽,进行基因治疗。HE染色观察治疗后肿瘤细胞侵袭能力和血管形成的改变；逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和明胶电泳检测肿瘤组织边缘基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA和蛋白表达及活性；体外培养H22细胞,检测CH50多肽对相关基因表达和细胞黏附能力的影响。结果小鼠体内非定位转染表达CH50多肽,对肿瘤生长具有明显的抑制作用,接种后第16天,治疗组瘤重为(0．78±0．18)g,低于质粒对照组和空白对照组(P＜0．05)；从组织水平观察,CH50多肽治疗导致肿瘤细胞大量坏死,可抑制肿瘤细胞侵袭生长和肿瘤血管生成,抑制肿瘤血管建立侧支循环。pCH510治疗组的肿瘤边缘组织中,活性型MMP-9的含量为3．2±0．7,显著低于空白对照组和质粒对照组,且活性型MMP-9占总MMP-9的比例也显著降低,是空白对照组和质粒对照组的1/4左右,但对MMP-9 mRNA表达没有明显影响。CH50多肽可下调H22细胞的αv、β3、cdc2基因的表达水平,降低H22细胞整合素αvβ3的活性。结论CH50多肽可以通过影响MMP-9和整合素αvβ3的功能起到抑制肿瘤生长、侵袭和肿瘤血管形成的作用。
- 于智睿张桂梅李东刘毅耿辉肖晗吴丰华冯作化
- 关键词：基质金属蛋白酶-9整合素ΑVΒ3
- 重组FN多肽真核表达载体pCH510衔接化疗治疗小鼠肿瘤的研究被引量：8
- 2001年
- 目的 :研究肿瘤化疗后转染 pCH5 10质粒是否提高疗效 ,以及二者衔接是否需要特定的条件。 方法 :采用瘤细胞接种建立小鼠肿瘤模型 ;通过基因转染 ,观察 pCH5 10对不同接种量所形成的小鼠肿瘤的抑制作用以及小鼠肿瘤化疗后立即进行pCH5 10转染的抑瘤效果 ;采用细胞培养技术 ,观察小鼠体内注射化疗药物后 ,其对小鼠腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞激活功能的影响 ;采用细胞计数的方法 ,观察化疗药物所致小鼠腹腔巨噬细胞和外周血免疫细胞数量变化的动力学 ;另外小鼠肿瘤化疗后第5天进行pCH5 10转染 ,观察抑瘤效果。结果 :转染pCH5 10对不同接种量形成的小鼠肿瘤生长都有抑制作用 ,并呈负相关。化疗药物可使免疫细胞代谢降低 ,活化受阻 ,在化疗后第 3天免疫细胞数降至最低 ,约 10d左右恢复正常 ;化疗后立即连续 10d转染 pCH5 10质粒 ,疗效没有增强 ;化疗 5d后 ,再连续 15d转染 pCH5 10质粒 ,则疗效明显增强。 结论 :化疗后转染 pCH5 10质粒 ,对小鼠肿瘤治疗效果更好 ,但由于化疗既降低免疫细胞数量 ,又抑制其功能 ,化疗后立即转染pCH5 10质粒是不恰当的 ,并且转染治疗时间不宜过短。pCH5 10、化疗和化疗 +pCH5 10三者对肿瘤不同抑制特点的比较显示化疗具有两面性 ,既抑瘤又促瘤。
- 黄波冯作化张桂梅李东
- 关键词：基因转染化疗肿瘤小鼠
- PD-1胞外段cDNA在真核细胞的表达与其功能鉴定被引量：11
- 2004年
- PD L PD 1是参与肿瘤免疫逃避的一条抑制性信号途径。为了用可溶性的PD 1受体阻断PD L PD 1的相互作用 ,将小鼠PD 1胞外段 (aa1 aa16 7)作为独立可溶性分子进行了真核表达 ,并对其功能进行鉴定。构建了编码小鼠PD 1胞外段cDNA(sPD 1)的真核质粒表达载体pPD 1A和编码sPD 1 GFP重组蛋白的真核质粒表达载体pPD 1B ;细胞转染实验表明其表达产物主要是分泌到细胞外的可溶性产物 (sPD 1) ,流式细胞仪检测表明sPD 1可有效结合PD 1配体 ;肿瘤细胞杀伤实验表明 ,sPD 1作用于肿瘤细胞或在脾淋巴细胞激活过程中作用于淋巴细胞 ,均可增强Hsp70 H2 2抗原肽复合物激活的脾淋巴细胞杀伤肿瘤细胞的作用。sPD 1真核表达载体的构建为在肿瘤局部表达抑制性共刺激分子的可溶性受体 ,拮抗肿瘤微环境中负调节因素对T细胞的抑制作用 ,增强机体的抗肿瘤能力 。
- 贺宇飞张桂梅王小红张慧袁野李东冯作化
- 关键词：可溶性受体质粒载体真核细胞
- 4-1BBL联合Hsp70-肿瘤抗原肽抑制小鼠黑色素瘤肺转移被引量：6
- 2005年
- 背景与目的正调节性共刺激分子表达偏低是肿瘤逃避机体免疫系统攻击的重要原因之一,增加这些分子的表达是促进抗肿瘤免疫的研究热点。小鼠黑色素瘤B16-F1细胞株是弱免疫原性癌细胞株。本研究旨在观察4-1BBL联合Hsp70-抗原肽对小鼠黑色素瘤肺转移的抑制作用,并探讨其机制。方法建立小鼠黑色素瘤肺转移模型,Hsp70-B16抗原肽小鼠皮下免疫,同时从尾静脉注射4-1BBL表达质粒p4-1BBL。于接种后第17天,解剖小鼠取肺组织,解剖显微镜下计数黑色素瘤肺转移结节的数目,并检测小鼠部分免疫学指标及肝、肾功能。结果4-1BBL联合Hsp70-B16抗原肽治疗组小鼠黑色素瘤肺转移结节数降至50±8,明显少于二者单独治疗组的500±80和450±40;联合治疗组小鼠血清IL-2和IFN-γ的分泌水平分别增加了4倍和3倍,与对照组相比均存在显著性差异(P<0.01);单独应用4-1BBL基因或与Hsp70-B16抗原肽联合应用对小鼠肝、肾的功能均无明显影响。结论表达4-1BBL联合应用Hsp70-B16抗原肽主要通过增强外周T淋巴细胞功能活性而有效抑制小鼠黑色素瘤肺转移。
- 邱惠张桂梅张慧袁野李东冯作化
- 关键词：4-1BBL小鼠
- TRAIL真核表达治疗肝细胞癌作用的研究被引量：5
- 2002年
- 目的 :构建鼠源TRAIL(mTRAIL)真核表达质粒。研究其体内、外表达对肝癌细胞的诱导凋亡作用 ,抑制肝癌生长作用及与重组人FN多肽真核表达质粒pCH5 10协同抑制肝癌生长作用。方法 :采用RT PCR及重组DNA技术构建mTRAIL真核表达质粒 ;体内、外进行基因转染 ;用流式细胞仪检测肝癌细胞凋亡率 ,用TdT mediateddUTPnickendlabeling (TUNEL)法及免疫组织化学技术检测肝癌细胞凋亡 ;小鼠实体瘤块模型研究基因转染抑制肝癌生长作用。结果 :用RT PCR方法自小鼠脾细胞RNA扩增出TRAIL基因的全长cDNA ,并克隆至真核表达载体pcDNA3 .1中获重组质粒pX1;以pX1转染BHK细胞株后攻击肝癌细胞株H2 2细胞 ,可检测到肝癌细胞凋亡 ;肌肉内注射转染质粒DNApX1,通过诱导肿瘤细胞凋亡抑制肝癌生长 ;pX1与FN多肽真核表达质粒pCH5 10有协同抑制肝癌生长作用。结论 :质粒pX1可在细胞及小鼠体内表达 ;体内、外表达可诱导肝癌细胞凋亡并可通过该机制抑制肝癌生长 ;与FN多肽真核表达质粒pCH5
- 薛胜利冯作化张桂梅张慧黎培员李东
- 关键词：真核表达TRAIL肝癌基因治疗质粒
- 肿瘤细胞混合肽诱导特异性抗肿瘤免疫应答被引量：24
- 2002年
- 采用细胞冻融、加热沉淀及酸处理等基本生化技术,从肿瘤细胞中获取混合肽;将热休克蛋白70与肽体外结合,观察热休克蛋白70-肽复合物对小鼠脾淋巴细胞的激活增殖作用以及增殖的淋巴细胞对瘤细胞的特异性杀伤作用,并运用流式细胞仪分析增殖的淋巴细胞类型;分别通过对腹腔和腿部肌肉接种了H22肝癌细胞的BALB/c小鼠进行热休克蛋白70-H22抗原肽复合物免疫注射,观察小鼠肿瘤的抑制和荷瘤小鼠的生存期情况.另外,对免疫的小鼠采血进行肝、肾功能检测.结果显示,获取的混合肽中含有肿瘤特异的抗原肽,其经热休克蛋白提呈后,体外可刺激淋巴细胞活化增殖,增殖的淋巴细胞为T淋巴细胞,对肿瘤细胞有特异性细胞毒效应,体内对腹水型和实体瘤型肿瘤的生长均可产生显著抑制作用,同时延长荷瘤小鼠的生存期,并且这种体内免疫对小鼠肝肾功能不产生影响,不会引发自身免疫反应.
- 黄波冯作化张桂梅李东王洪涛
- 关键词：肿瘤生长抑制肿瘤治疗T细胞
- SLC真核表达质粒的剂量-趋化效应及抑瘤效应研究被引量：1
- 2006年
- 目的:观察次级淋巴组织趋化因子(SLC)真核表达质粒剂量-趋化效应关系及不同剂量体内应用时对小鼠H22肝癌的治疗作用。方法:构建了小鼠SLC真核表达质粒(pSLC),体外转染检测pSLC在体外的剂量-趋化效应关系,体内不同剂量的pSLC质粒局部注射检测其表达情况及体内的剂量-趋化效应关系,并观察不同剂量的pSLC对小鼠H22肝癌治疗的剂效关系。结果:当剂量在0·5μg以下时,pSLC在体外转染的趋化效应与转染剂量呈正相关,但在0·75μg时明显下降;pSLC体内局部注射时,在所检测的200μg剂量以内,随注射质粒剂量的增加,其表达的mRNA水平逐渐增加,相应地,对淋巴细胞的趋化作用亦逐渐增强,pSLC对肿瘤的抑制作用亦随其剂量的增加而明显增强(P<0·001)。结论:体内局部转染表达pSLC,能够有效趋化聚集免疫细胞,对肿瘤产生免疫治疗效应。通过提高转染表达效果,可增加SLC趋化作用,增强肿瘤免疫治疗效应。
- 贺宇飞张桂梅王小红张慧袁野李东冯作化
- 关键词：次级淋巴组织趋化因子质粒H22肝癌
