孙桦
- 作品数：8 被引量：16H指数：3
- 供职机构：上海交通大学医学院附属新华医院更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 靶向bcl-2基因转录shRNA重组质粒的构建和筛选被引量：1
- 2008年
- 目的构建能高效抑制肝星状细胞(HSCs)bcl-2表达的小发夹RNA(shRNA)重组质粒。方法利用RNA干扰技术,设计有小发夹结构的3条DNA序列,经退火形成互补双链,克隆至转录载体psiRNA-hH1neo上构建重组质粒,予以酶切和测序鉴定。重组质粒转染HSC-T6细胞株,运用实时荧光定量PCR和Western blotting进行筛选鉴定。结果酶切及测序鉴定表明,成功构建重组质粒shRNA1、shRNA2和shRNA3。实时荧光定量PCR和Western blotting检测结果显示,shRNA1和shRNA2转染后显著抑制HSC-T6中bcl-2mRNA和蛋白表达(P<0.05),其中siRNA1的bcl-2表达抑制效率>80%。结论构建的重组质粒shRNA1能有效抑制HSCs中bcl-2的表达。实验为进一步探索肝纤维化基因治疗的新途径奠定了基础。
- 孙桦李光明刘博伟胡俊杰李定国
- 关键词：RNA干扰BCL-2重组质粒肝星状细胞
- 特异性靶向肝星状细胞治疗肝纤维化研究进展被引量：1
- 2008年
- 肝纤维化是慢性肝病进展过程必经的一种病理组织学改变,而肝星状细胞的激活和增生是肝纤维化发生进展的中心环节。目前研究通过基因调控治疗及受体介导药物靶向肝星状细胞,可提高肝纤维化治疗的特异性,为临床应用开辟了新方向。
- 孙桦李定国
- 关键词：靶向性肝星状细胞肝纤维化
- RNA干扰的组织靶向性
- 2007年
- RNA干扰是一种转录后基因沉默现象,可通过双链诱导使靶基因失活。为了增强对组织靶向性的治疗应用,目前研究有利用载体的特异性及基因重组构建进行调控作用于靶组织,也可以小分子基团特异性化学修饰小RNA双链或载体及其他微粒等方法提高组织靶向性。现已有部分RNA干扰治疗应用于临床,且通过组织靶向作用可拓展疾病治疗途径。
- 孙桦李光明李定国
- 关键词：RNA干扰SIRNA
- 靶向bcl-2基因的shRNA对肝星状细胞凋亡的影响被引量：1
- 2008年
- 目的研究短发夹RNA(shRNA)重组载体介导抑制大鼠肝星状细胞(HSCs)bcl-2基因的表达,观察其对HSCs凋亡的影响。方法重组质粒载体pGPU6-GFP-shRNA由脂质体介导转染HSC-T6细胞株。荧光定量PCR和Western blotting鉴定bcl-2表达;CCK-8法观察质粒转染对HSCs生长和增殖的影响;Hoechst 33258染色观察细胞形态学改变;流式细胞术及caspase-3和caspase-9酶活性检测分析转染后细胞凋亡情况。结果pGPU6-GFP-shRNA能抑制bcl-2 mRNA和蛋白表达;转染后HSC-T6体外生长明显受到抑制;转染后72 h时细胞凋亡率为33.34%,caspase-3和caspase-9酶活性显著增高。结论shRNA重组载体pGPU6-GFP-shRNA能有效地抑制HSC-T6中bcl-2的表达,抑制细胞生长并促进凋亡。实验为进一步探索肝纤维化基因治疗提供了实验依据。
- 孙桦李光明虢灿杰刘博伟胡俊杰李定国
- 关键词：RNA干扰BCL-2凋亡肝星状细胞
- AcSDKP对大鼠活化HSCs增殖及分泌细胞外基质的影响被引量：7
- 2008年
- 目的通过N-乙酰基-丝氨酸-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)干预,观察其对活化肝星状细胞(HSCs)的增殖以及合成和分泌细胞外基质(ECM)的影响。方法大鼠原代HSCs分离、培养和鉴定后,分别给予0.01、0.1、1、10、100nmol/LAcSDKP进行干预,设立空白对照组。MTT法检测AcSDKP干预对HSCs增殖的影响;RT-PCR技术检测活化HSCsⅠ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)mRNA表达;酶联免疫法检测培养细胞上清液透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)含量。结果与空白对照组相比,1、10nmol/LAcSDKP干预显著抑制活化HSCs的增殖;1、10nmol/L及0.1～100nmol/LAcSDKP的干预,分别显著抑制HSCsColⅠmRNA和ColⅢmRNA表达;0.1、1、10nmol/L和0.1、1nmol/LAcSDKP干预可分别显著抑制培养上清液HA和LN的表达。结论本实验发现,AcSDKP可抑制活化HSCs合成和分泌ECM,并呈现一定的剂量依赖性,以浓度为1nmol/L时作用最为显著。其作用机制可能与抑制HSCs增殖而使合成和分泌ECM的HSCs数量减少有关。
- 刘博伟陈源文孙桦李定国
- 关键词：ACSDKP肝星状细胞细胞外基质细胞增殖
- 实验性肝纤维化发病过程中脂联素水平变化的研究
- 2009年
- 目的通过观察肝纤维化大鼠血清及肝组织中脂联素的动态变化,探讨脂联素在肝纤维化形成和发展中的作用。方法将SD大鼠随机分为正常对照组与模型组,腹部皮下分别注射100%橄榄油和40%CCl4-橄榄油溶液,每周2次,共10周,于第2、6、10周末分批取材,肝组织常规石蜡制片,HE染色,光镜下观察,以ELISA法测定大鼠血清脂联素,免疫组织化学法及RT-PCR法检测肝组织脂联素和脂联素mRNA表达。结果模型组大鼠血清脂联素水平随造模时间延长逐步上升,且脂联素及脂联素基因的表达同步增加,各时间点模型组与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论脂联素水平的变化可能参与肝纤维化的发病机制。
- 沈晟晖殷于磊袁向亮孙桦
- 关键词：脂联素肝纤维化动物模型
- 肝硬化患者血清脂联素水平的变化及临床意义被引量：3
- 2008年
- 目的:观察肝硬化患者血清脂联素水平,探讨其与胰岛素、Child-Pugh分级和肝功能等指标间的关系。方法:53例肝硬化患者按照Child-Pugh分级,采用ELISA法测定血清脂联素水平,计算体质指数,并测定空腹血糖、血脂、肝功能和血清胰岛素,以20名体检健康者作为对照组进行比较。结果:肝硬化患者血清脂联素水平明显高于正常对照组(P<0.05),且Child C级>B级>A级(P<0.05)。脂联素水平与胰岛素和TBA呈正相关,与肝硬化病因、AST、ALB、TBIL等因素无关。腹水脂联素水平明显低于血清脂联素(P<0.01)。结论:血清脂联素水平在肝硬化时明显升高,且与病情具有一定的相关性,可作为临床评估肝硬化的参考指标。
- 沈晟晖袁向亮孙桦徐雯李定国
- 关键词：肝硬化脂联素
- RNA干扰bcl-2基因的筛选及对肝星状细胞生物活性的影响被引量：3
- 2008年
- 目的研究小干扰RNA（shRNA）重组载体介导抑制大鼠肝星状细胞（hepaticstellatecell，HSC）bcl-2基因的表达，初步观察其对HSC生物活性的影响。方法设计有小发夹结构的3条DNA序列构建重组质粒载体pGPU6-GFP，脂质体转染HSC—T6细胞株以荧光定量PCR和Westernblot筛选鉴定，通过CCK-8法及AnnexinV／PI双标记流式细胞术检测、观察其对HSC生长的影响。结果pGPU6-GFP—shRNA1、shRNA2均能抑制bcl-2mRNA和蛋白表达（P〈0．05），pGPU6-GFP—shRNAl转染HSC．T6株72h后对bcl-2基因抑制达80％，且HSC—T6体外生长明碌受到抑制，早期凋亡率为33．34％～44．12％。结论bel-2小发夹RNA重组载体shRNA1能最有效抑制HSC—T6中bcl-2的表达与细胞生长，促进凋亡，为下一步探索肝纤维化基因治疗提供实验依据。
- 孙桦李光明虢灿杰刘博伟胡俊杰李定国
- 关键词：小干扰RNA肝星状细胞肝纤维化
