叶丰
- 作品数：12 被引量：49H指数：4
- 供职机构：四川大学华西医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学电子电信更多>>
- 人工合成小分子多肽P16抑制大鼠肾小管上皮细胞纤维化的初步研究被引量：1
- 2007年
- 目的观察人工合成的与结缔组织生长因子(CTGF)同源的16个氨基酸小分子多肽(P16)能否与CTGF竞争性地和CTGF受体相结合,以阻止大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)转分化为肌纤维母细胞,并抑制细胞纤维化的发生。方法以NRK-52E细胞株为实验对象,用异硫氰酸荧光素标记P16(FITC-P16),激光共聚焦显微镜观察P16和CTGF与细胞竞争性结合能力。用CTGF诱导NRK-52E细胞并加入P16竞争结合,通过细胞免疫荧光和RT-PCR分别在蛋白和基因水平上检测反映NRK-52E细胞向肌纤维母细胞转化的α-平滑肌肌动蛋白(α-smoothactionmuscleprotein,α-SMA)和反映NRK-52E细胞纤维化的胶原和。结果CTGF能诱导NRK-52E细胞高表达α-SMA和胶原、。P16可与CTGF竞争性结合细胞表面的整合素аvβ3,并显著抑制CTGF诱导的α-SMA和胶原、高表达。结论人工合成的小分子多肽P16可通过与CTGF竞争性结合于细胞表面,显著抑制CTGF的促细胞转分化和纤维化作用,可望成为抗纤维化治疗的一种新策略。
- 王巍石毓君张立李青涂智丹叶丰王进京步宏
- 关键词：P16CTGF转分化纤维化
- 应用荧光定量聚合酶链反应对疑似结核组织的DNA分析被引量：13
- 2013年
- 目的探讨应用荧光定量聚合酶链反应（qPCR）对疑似结核组织中结核分枝杆菌检测的可行性。方法利用荧光qPCR对四川大学华西医院2011至2012年间1000例连续疑似结核组织中特异性结核分枝杆菌复合物IS6110DNA片段进行扩增。齐-尼抗酸染色作为对照。扩增片段测序后与比对结核分枝杆菌基因序列比对验证其一致性。结果1000例疑似结核组织中抗酸染色阳性513例，检出率为51．3％；荧光qPCR阳性546例，检出率54．6％。抗酸染色与荧光qPCR的符合率为73．1％。抗酸染色与荧光qPCR同时检测，可提高检出率14．4％。综合抗酸染色和qPCR分析结果，检出结核分枝杆菌外的抗酸染色阳性菌感染病例7例，其中包括3例麻风分枝杆菌感染，4例非结核分枝杆菌感染。结论荧光qPCR对石蜡组织结核分枝杆菌检测敏感性略高于齐-尼抗酸特殊染色。同时应用两项检查可以提高检出率，并且可排除非结核分枝杆菌感染的漏诊。
- 叶丰陈昱何度简书玉郑可李甘地步宏
- 关键词：结核分枝杆菌感染聚合酶链反应
- RT-qPCR法定量检测乳腺癌FFPE样本ER、PR、HER2、Ki-67表达的初步分析被引量：12
- 2018年
- 目的初步探索实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)法与免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)法检测乳腺癌福尔马林固定石蜡包埋(formalin fixed and paraffin embedded,FFPE)样本ER、PR、HER2、Ki-67的一致性及评估RT-qPCR法的应用前景。方法纳入术前穿刺诊断为乳腺浸润性导管癌、临床病理资料完整、肿瘤成分大于20%的FFPE样本73例。RT-qPCR采用人乳腺癌分子分型定量检测试剂盒(MammaTyper)检测。结果 RT-qPCR法与IHC法一致率ER、PR、HER2、Ki-67分别为90. 41%、87. 67%、84. 93%、94. 52%;一致性分析Kappa值分别为0. 777 5、0. 752 2、0. 701 2、0. 800 8。结论 RT-qPCR法与IHC法检测ER、PR、HER2、Ki-67具有较高的一致性;但在检测ER、PR和HER2时应注意导管原位癌和残存乳腺组织的可能影响,并进一步扩大检测样本量,不断优化RT-qPCR的截断值。与ER、PR和HER2相比,RT-qPCR法检测Ki-67可能具有更好的应用前景。
- 韦晓霞姜瑞瑞雷婷叶丰步宏
- 关键词：乳腺肿瘤分子分型RT-QPCR免疫组织化学
- 基于放线菌素D的甲状腺癌细胞系凋亡模型构建
- 2022年
- [目的]建立甲状腺细胞系细胞凋亡诱导模型。[方法]用0~64 mg/mL放线菌素D(Actinomycin D,ACT D)分别处理三种甲状腺细胞(Nthy-ori 3-1、TPC-1、BCPAP)24 h,CCK8测定ACT D对三种甲状腺细胞系的半数抑制浓度(IC_(50))。选择半数抑制浓度分别作用于这三种细胞24 h,采用流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,采用蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)方法检测凋亡相关蛋白表达情况。[结果]不同浓度ACT D处理24 h后,Nthy-ori 3-1、TPC-1、BCPAP细胞活力均降低(P<0.05),其中ACT D对三种细胞的24 h处理IC_(50)分别为为64、32、64 mg/mL。采用相对应的IC_(50)药物浓度分别处理上述细胞后,流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法结果表明三种细胞系的凋亡率相较于对照组有明显差异(P<0.05);BCPAP细胞系:对照组和实验组凋亡率分别为7.40%±0.20%和28.8%±1.50%;Nthy-ori 3-1:对照组和实验组凋亡率分别为1.99%±0.08%和5.47%±0.57%;TPC-1:对照组和实验组凋亡率分别为1.50%±0.10%和10.50%±0.40%。WB检测凋亡指标(BAX,cleaved-Caspase3,cleaved-Caspase8)结果显示,三种甲状腺细胞系BCL-2表达均降低,BAX、cleaved-Caspase3、cleaved-Caspase8表达均增高。[结论]ACT D可有效诱导3种甲状腺细胞系凋亡。
- 肖林曹师瑜李怡洁申梦佳张培川曹婷叶丰
- 关键词：甲状腺癌细胞凋亡放线菌素D流式细胞术
- Ki-67对浸润性乳腺癌患者新辅助化疗疗效的预测作用分析被引量：10
- 2017年
- 目的 探讨浸润性乳腺癌纳入与不纳入Ki-67的2种分子分型[雌激素受体（ER）＋孕激素受体（PR）＋HER2＋Ki-67与ER＋PR＋HER2]对患者接受新辅助化疗疗效预测作用的差异,以及肿瘤组织中的Ki-67、ER、PR和HER2的表达与新辅助化疗疗效的相关性.方法 收集2007年1月至2009年12月就诊于四川大学华西医院,经活检确诊并接受新辅助化疗的127例浸润性乳腺癌,分析2种分子分型与临床及病理疗效评估的相关性,以及新辅助化疗前后肿瘤标记、组织学级别与临床及病理疗效的相关性.结果 依据2种分子分型方法,各亚型组的临床疗效评价差异均具有统计学意义（纳入Ki-67的分型：χ2=22.40,P〈0.01;未纳入Ki-67的分型：χ2=9.202,P=0.027）,病理疗效评价差异均不具有统计学意义（P＆gt;0.05）.临床病理指标和临床疗效评价的多因素分析中,Ki-67是预测临床完全缓解（P=0.041）和临床总体有效（P〈0.01）的独立因子.临床病理指标和病理疗效的多因素分析中,只有Ki-67是独立的预测因子（P=0.041）.结论 纳入Ki-67的分子分型法能更好地区分出对新辅助化疗缺乏敏感性的乳腺癌.
- 韦晓霞张锐蒲天婕杨李波叶丰步宏
- 关键词：抗肿瘤联合化疗方案KI-67抗原分子分型
- 靶向二代测序检测结直肠癌肠镜活检标本的可行性分析被引量：6
- 2018年
- 目的评估结直肠癌患者肠镜活检标本中的DNA是否足以进行基于扩增法建库的二代测序（NGS）检测以得到合格、准确的基因分析结果并对甲醛固定石蜡包埋（FFPE）小组织行NGS检测提出质控建议。方法依据标本纳入标准收集2012年1月至2016年6月四川大学华西医院和北京大学第三医院组织病理学确诊的结直肠癌109例患者的肠镜活检FFPE标本109份，提取DNA，采用OncoAim^TM Gene Panel在Miseq平台进行基于扩增法建库的靶向NGS检测，分析DNA及文库产量、测序数据质量、检测成功率。利用常规检测方法验证NGS的检测结果。最后，比较其中12个内镜活检标本与其相应手术根治石蜡标本的NGS检出突变结果以评估检测结果的一致性。结果97.2%（106/109）的肠镜活检FFPE标本可得到足量用于NGS的DNA并产生合格的测序文库，测序深度中位数为848×，均一度中位数为95.7%，测序数据合格率为95.4%（104/109）。NGS和临床常规检测的一致性为100.0%。12对内镜活检与手术根治配对标本结果显示，临床可行性突变（KRAS、BRAF）的检测结果全部一致，而一致突变的变异频率均有明显差异。结论合理质控的条件下，肠镜活检FFPE标本可用于靶向NGS检测，得到合格、准确的突变检测结果以指导靶向治疗。
- 王亚健姜瑞瑞刘海静张波叶丰步宏
- 关键词：结直肠肿瘤内窥镜检查标本制备
- 分子指标结合临床特征预测乳腺癌新辅助化疗疗效
- 目的：筛选出与乳腺癌新辅助化疗疗效相关的分子指标，并结合与化疗疗效相关的临床特征，建立模型，精确预测乳腺癌患者新辅助化疗疗效。方法：分析公共数据库中全基因组表达谱芯片数据，在达到病理完全组和未达到病理完全缓解组中，通过差...
- 杨李波叶丰王利亚李艳步宏
- 关键词：乳腺癌新辅助化疗
- 纺锤体检测点蛋白BUB1B在三阴型乳腺癌中的表达及意义被引量：1
- 2021年
- 目的高通量筛选三阴型乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)预后相关的重要分子标志物,探讨纺锤体检测点蛋白BUB1B表达与TNBC临床病理特征及预后相关性。方法收集2009—2017年四川大学华西医院诊断TNBC的临床病理资料和预后信息。选取符合纳入标准的新鲜样本47例,肿瘤原发灶石蜡样本139例。对新鲜肿瘤样本进行转录组测序(RNA-seq)与基因表达综合数据库(gene expression omnibus,GEO)数据集GSE38959和GSE65194差异分析并取交集,进行富集分析和蛋白相互作用(protein-protein interaction,PPI)分析。利用Kaplan-Meier Plotter数据库分析目的基因的表达水平与TNBC预后的关系。采用免疫组织化学染色验证其在TNBC中的表达情况及与临床病理特征和预后的相关性。结果利用edgeR对47例TNBC肿瘤组织与其中12例正常组织进行差异分析得到1559个上调基因和1376个下调基因,与GEO2R对GSE38959和GSE65194差异分析后的差异基因取交集后得到131个基因。富集分析主要富集在细胞周期、JAK-STAT信号通路、p53信号通路。利用Cytoscape分析得到Degree最高的10个基因:TOP2A、BUB1B、MKI67、PLK1、RRM2、PCNA、KPNA2、SMC4、PBK、IGF1。Kaplan-Meier Plotter数据库中分析发现BUB1B表达与TNBC预后显著相关[总生存期,HR=0.52,95%CI(0.35~0.77),P=0.001;无远处转移生存期,HR=0.72,95%CI(0.52~0.98),P=0.038]。139例肿瘤原发灶石蜡样本免疫组织化学的结果显示BUB1B低表达与TNBC预后不良具有显著相关性[HR=0.41,95%CI(0.18~0.95),P=0.024]。结论BUB1B蛋白低表达与TNBC预后不良相关,其预后相关分子机制和潜在治疗靶点有待进一步研究。
- 张培川钟晓蓉郑鸿李丽陈菲申梦佳李怡洁陈红曹师瑜步宏叶丰
- 关键词：乳腺肿瘤生物学标记预后
- 组蛋白乙酰化酶调控肝损伤后的迅速再生
- 临床上肝移植病人或者活体肝移植供者的术后常常出现肝脏再生缓慢并由此导致“小肝综合症”，给病人后期治疗和康复带来严重影响。因此，手术后肝脏的迅速再生对于肝损伤或者肝移植病人尤为重要。随着分子病理学的迅速发展和基因敲除技术等...
- 步宏叶丰石毓君
- 关键词：组蛋白乙酰化酶肝损伤肝再生
- 甲醛固定石蜡包埋标本不同二代测序平台性能比较被引量：4
- 2018年
- 目的应用甲醛固定石蜡包埋（FFPE）标本，以相同的建库方法，比较二代测序（NGS）技术Illumina公司的Miseq和Thermo公司的Ion Torrent PGM两个平台的性能和一致性，探讨临床应用价值。方法收集2013年1月至2016年12月的204例肿瘤FFPE标本，包括100例非小细胞肺癌（浙江大学医学院附属第一医院）和104例结直肠癌（四川大学华西医院）。采用相同的病例，一次提取DNA后，相同DNA的量采用相同试剂盒建库，质控合格后分别在Miseq和Ion Torrent PGM平台测序。使用扩增阻滞突变系统（ARMS）PCR法以及Sanger测序对双平台检测不一致的突变进行验证。结果共纳入204个FFPE标本，两个平台共同分析了197个标本。发现Miseq平台测序标本产出的reads数目高于PGM平台（中位数：391 634比298 030，P〈0.01）。与人类参照基因组进行比对，结果显示Miseq平台测序标本的比对率高于PGM平台（中位数100.0%比99.7%，P〈0.01）。Miseq平台测序标本的中位测序深度高于PGM平台（中位数853×比698×，P〈0.01）。两个平台共检测到236个突变，其中221个突变被两者同时检出（一致率93.6%）。Miseq平台比PGM多检出11个突变，而PGM平台比Miseq多检出4个突变。经ARMS－PCR方法及Sanger测序验证，Miseq平台对于低频突变的检测结果更为可靠，两者不一致的主要原因是部分假阴性是由变异频率低于试剂盒报告范围（5%）及石蜡标本保存时间较长导致。结论与PGM平台相比，Miseq平台测序在标本产生的reads数目、比对结果以及覆盖深度方面均表现出了更高的测序质量，且检测结果更为可靠。在临床实践中，应根据标本量和实际的通量需求来选择合适的平台辅助肿瘤分子检测。
- 姜瑞瑞王亚健滕晓东肖林步宏叶丰
- 关键词：甲醛
