肖林
- 作品数：10 被引量：43H指数：3
- 供职机构：四川大学华西医院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HSV-TK/GCV系统对人肺癌细胞株的杀伤效应被引量：3
- 2004年
- 目的 观察单纯疱疹病毒胸苷激酶基因HSV -TK/GCV系统对人肺癌细胞H4 4 6的体外杀伤作用。方法 利用脂质体(lipofectin)将重组逆转录病毒载体pLXSN -TK导入包装细胞PA317,G4 18筛选至抗性克隆出现 ,收获病毒液。加入聚凝胺感染H4 4 6细胞 ,并筛选出含TK基因的H4 4 6细胞。观察GCV对H4 4 6和不同比例混合的H4 4 6、H4 4 6 /TK的杀伤作用及旁观者效应。结果 经电镜及PCR检测证实TK基因已导入PA317、H4 4 6细胞。H4 4 6 /TK细胞对GCV的敏感性明显高于H4 4 6细胞 ;随着TK+ 细胞比例的增加 ,存活率进一步减低 ,提示GCV不仅杀死TK+ 细胞 ,也杀死混合培养的未转导TK基因的H4 4 6细胞 ,表明HSV -TK基因转导的H4 4 6细胞具有明显的旁观者效应。结论 HSV -TK/GCV系统赋予人肺癌细胞对GCV的高敏感性及旁观者效应。
- 宋毅刘兆雄黄光琦肖林
- 关键词：HSV-TK肺癌细胞杀伤效应旁观者效应
- 基于放线菌素D的甲状腺癌细胞系凋亡模型构建
- 2022年
- [目的]建立甲状腺细胞系细胞凋亡诱导模型。[方法]用0~64 mg/mL放线菌素D(Actinomycin D,ACT D)分别处理三种甲状腺细胞(Nthy-ori 3-1、TPC-1、BCPAP)24 h,CCK8测定ACT D对三种甲状腺细胞系的半数抑制浓度(IC_(50))。选择半数抑制浓度分别作用于这三种细胞24 h,采用流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,采用蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)方法检测凋亡相关蛋白表达情况。[结果]不同浓度ACT D处理24 h后,Nthy-ori 3-1、TPC-1、BCPAP细胞活力均降低(P<0.05),其中ACT D对三种细胞的24 h处理IC_(50)分别为为64、32、64 mg/mL。采用相对应的IC_(50)药物浓度分别处理上述细胞后,流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法结果表明三种细胞系的凋亡率相较于对照组有明显差异(P<0.05);BCPAP细胞系:对照组和实验组凋亡率分别为7.40%±0.20%和28.8%±1.50%;Nthy-ori 3-1:对照组和实验组凋亡率分别为1.99%±0.08%和5.47%±0.57%;TPC-1:对照组和实验组凋亡率分别为1.50%±0.10%和10.50%±0.40%。WB检测凋亡指标(BAX,cleaved-Caspase3,cleaved-Caspase8)结果显示,三种甲状腺细胞系BCL-2表达均降低,BAX、cleaved-Caspase3、cleaved-Caspase8表达均增高。[结论]ACT D可有效诱导3种甲状腺细胞系凋亡。
- 肖林曹师瑜李怡洁申梦佳张培川曹婷叶丰
- 关键词：甲状腺癌细胞凋亡放线菌素D流式细胞术
- 丹参酮ⅡA增强HSV-tk/GCV旁观者效应及其与Cx43 mRNA表达的关系被引量：28
- 2004年
- 目的 研究丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA ,Tan)对HSV tk/GCV旁观者效应的增强作用及其与间隙连接蛋白Cx4 3转录表达的关系。方法 应用polybrene转染、荧光定量RT PCR等技术 ,观察Tan对宫颈癌细胞ME180 (ME)、ME/TK转化细胞旁观者效应及诱导Cx4 3mRNA表达的作用。结果 在HSV tk/GCV系统中 ,Tan显著地提高了ME/TK细胞对GCV的敏感性。在 2 μg/mlGCV作用下 ,以1.3× 10 9mol/LTan与不加Tan的作用相比较 ,在ME与ME/TK不同比例混合细胞的各组中 ,细胞的存活率明显降低 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5 )。并观察到Tan对GCV旁观者效应的增强作用 ,在一定范围内为 1.3× 10 -8mol/L和 1.3× 10 -9mol/L。RT PCR结果表明 ,经 1.3× 10 -8mol/L和 1.3× 10 -9mol/LTan处理的ME细胞 ,其Cx4 3mRNA的相对拷贝数比值增高约 8.83倍及 8.4 7倍。结论 在宫颈癌ME180细胞中 ,Tan在 1.3× 10 -8mol/L和 1.3× 10 -9mol/L范围内具有明显增强HSV tk/GCV旁观者效应的作用。Tan在转录水平诱导Cx4 3mRNA表达上调 ,与旁观者效应的增强作用密切相关。
- 黄光琦宋毅张洁陆燕蓉肖林杨元郭元彪
- 关键词：旁观者效应CX43自杀基因
- Sorsby眼底营养不良的系统评价
- 2022年
- 目的系统评价Sorsby眼底营养不良(SFD)的临床表现、治疗和相关致病基因。方法循证医学研究。以Sorsby眼底营养不良、抗血管内皮生长因子治疗、脉络膜新生血管、黄斑新生血管、TIMP3基因为检索词,在中国知网、万方、美国国立医学图书馆PubMed和荷兰医学文摘Embase数据库检索相关文献。检索时间为建库至2022年4月。由两位评价员独立筛选文献、提取资料。排除重复、信息不完整或不相关文献以及综述性文献。采用SPSS26.0软件对文献进行分析,95%可信区间(CI)作为效应量的估计值。统计并记录SFD的临床表现、治疗和相关致病基因。结果根据检索策略初步检索出157篇文献,最终纳入16篇文献的35例患者49只眼进行分析。其中,男性17例,女13例,性别不明5例;左眼、右眼分别为16、19只眼,眼别不明14只眼。患者发病年龄(42.33±2.19)(28~59)岁。家族史阳性19例,总阳性率54.3%(19/35,95%CI 36%~72%)。基因变异31例,均为TIMP3基因变异;纳入文献中检测未发现变异、变异未报道位点分别为2、2例,总阳性率93.9%(31/33,95%CI 85%~100%)。基因变异的31例中,英国、德国、瑞士、中国人种分别为22、4、1、4例,检出率均为100%(22/22、4/4、1/1、4/4)。SFD的临床表现主要为眼底黄白色沉积物及黄斑区脉络膜新生血管(CNV),导致患者中心视力下降;随后沉积物向周边扩展、CNV进一步发展及周边视网膜脉络膜萎缩,导致患者视力严重下降。SFD的治疗方式有光动力疗法以及抗血管内皮生长因子药物、糖皮质激素、维生素A等药物治疗,其中抗血管内皮生长因子药物为一线治疗方案,而联合治疗比单一治疗的预后疗效更好。结论TIMP3基因变异导致了SFD;其眼底特征性表现为黄白色沉积物及CNV,由中心向周边发展,导致患者视力进行性下降;抗血管内皮生长因子药物治疗为一线方案,联合治疗比单一治疗的预后疗效更好。
- 古秋梅陈正举肖林杨智博刘陇黔
- 关键词：脉络膜新生血管化血管生成抑制剂基因突变
- 口腔鳞癌中染色体9p杂合性丢失的研究
- 2001年
- 目的 :探讨口腔鳞状细胞癌中 9号染色体短臂等位基因的杂合性丢失和微卫星不稳定与口腔鳞状细胞癌发生、发展之间的关系。方法 :采用PCR法检测 2 4例口腔鳞状细胞癌中染色体 9p上 8个微卫星多态位点。结果 :在2 4例口腔鳞状细胞癌中 ,10例 (41 6 7% )鳞癌组织至少有一个微卫星位点发生杂合性丢失。其主要发生在染色体9p2 1的D9S171(2 1 0 5 % )和D9S30 4(10 .0 0 % ) ,以及 9p2 2_2 3的D9S16 8(2 2 2 2 % )和D9S16 2 (15 38% )。然而 ,这些基因位点的杂合性丢失与肿瘤病理学类型、肿瘤的大小及转移性在统计学上无显著相关性 (P >0 0 5 )。此外 ,微卫星不稳定仅在 2例患者中出现 ,没有 1例患者符合微卫星不稳定的判定标准 ,即两个或两个以上的微卫星多态位点的异常。结论 :本研究中发现的口腔鳞状细胞癌在染色体 9p2 1_2 3区域发生高频率的杂合性丢失 ,提示在 9p2 1_2 3区域可能存在多个与部分口腔鳞状细胞癌相关的肿瘤抑制基因 。
- 肖林IOL NgZC Luo
- 关键词：口腔鳞癌杂合性丢失
- 丹参酮ⅡA对HSV-TK/GCV系统治疗肺癌细胞株的影响被引量：4
- 2004年
- 目的 观察并探讨丹参酮 A(Tan A)对逆转录病毒载体介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV- TK/GCV)系统对治疗人小细胞肺癌细胞株的影响。方法 用逆转录病毒感染 H4 4 6细胞 ,筛选出含 TK基因的 H4 4 6细胞 (H4 4 6 /TK)。用丙氧鸟苷 (GCV)及 Tan A处理不同比例混合的 H4 4 6、H4 4 6 /TK细胞 ,用 MTT比色法检测细胞存活率。结果 重组逆转录病毒滴度为 3.2× 10 5cfu/ml,电镜观察证实 HSV- TK基因已导入H4 4 6细胞。H4 4 6 /TK细胞对 GCV的敏感性明显高于 H4 4 6细胞 ,并存在旁观者效应 ;Tan A与 GCV共同作用下的肿瘤细胞对 GCV的敏感性大大增强 ,在不同比例混合的 H4 4 6、H4 4 6 /TK细胞中 ,加入 Tan A组和不加丹参酮组相比较 ,其存活率有显著性差异 (P<0 .0 5 )。结论 Tan A能显著增强 HSV- TK/GCV系统的旁观者效应。
- 宋毅袁淑兰黄光琦肖林
- 关键词：HSV-TK丙氧鸟苷旁观者效应
- 甲醛固定石蜡包埋标本不同二代测序平台性能比较被引量：4
- 2018年
- 目的应用甲醛固定石蜡包埋（FFPE）标本，以相同的建库方法，比较二代测序（NGS）技术Illumina公司的Miseq和Thermo公司的Ion Torrent PGM两个平台的性能和一致性，探讨临床应用价值。方法收集2013年1月至2016年12月的204例肿瘤FFPE标本，包括100例非小细胞肺癌（浙江大学医学院附属第一医院）和104例结直肠癌（四川大学华西医院）。采用相同的病例，一次提取DNA后，相同DNA的量采用相同试剂盒建库，质控合格后分别在Miseq和Ion Torrent PGM平台测序。使用扩增阻滞突变系统（ARMS）PCR法以及Sanger测序对双平台检测不一致的突变进行验证。结果共纳入204个FFPE标本，两个平台共同分析了197个标本。发现Miseq平台测序标本产出的reads数目高于PGM平台（中位数：391 634比298 030，P〈0.01）。与人类参照基因组进行比对，结果显示Miseq平台测序标本的比对率高于PGM平台（中位数100.0%比99.7%，P〈0.01）。Miseq平台测序标本的中位测序深度高于PGM平台（中位数853×比698×，P〈0.01）。两个平台共检测到236个突变，其中221个突变被两者同时检出（一致率93.6%）。Miseq平台比PGM多检出11个突变，而PGM平台比Miseq多检出4个突变。经ARMS－PCR方法及Sanger测序验证，Miseq平台对于低频突变的检测结果更为可靠，两者不一致的主要原因是部分假阴性是由变异频率低于试剂盒报告范围（5%）及石蜡标本保存时间较长导致。结论与PGM平台相比，Miseq平台测序在标本产生的reads数目、比对结果以及覆盖深度方面均表现出了更高的测序质量，且检测结果更为可靠。在临床实践中，应根据标本量和实际的通量需求来选择合适的平台辅助肿瘤分子检测。
- 姜瑞瑞王亚健滕晓东肖林步宏叶丰
- 关键词：甲醛
- 全反式维A酸对单纯疱疹病毒胸苷激酶基因结合更昔洛韦旁观者效应增强作用及其机制被引量：1
- 2003年
- 目的 通过研究全反式维A酸 (ATRA )对单纯疱疹病毒胸苷激酶基因结合更昔洛韦 (HSV tk/GCV)旁观者效应的增强作用及与Cx4 3表达的关系 ,为提高TK自杀基因的疗效及探索增强作用机制提供实验基础。方法 应用Polybrene转染、荧光定量RT PCR等技术 ,观察ATRA对宫颈癌细胞ME180 ,ME180 /TK转化细胞旁观者效应及诱导Cx4 3mRNA表达的作用。结果 ME180 ,ME180 /TK不同比例的混合细胞随ATRA浓度的增加而存活率降低。ME180 +ME180 /TK混合细胞的存活率随ME180 /TK细胞比例的增加而降低。在 2mg·L- 1更昔洛韦 (GCV)作用下 ,以 10 - 8mol·L- 1ATRA与不加ATRA (0mol·L- 1)的作用相比较 ,在ME180与ME180 /TK不同比例混合的各组中 ,细胞的存活率明显降低 (P <0 .0 5 )。并观察到10 - 8及 10 - 10 mol·L- 1ATRA对GCV旁观者效应的增强作用。RT PCR结果表明 ,经ATRA处理的ME180细胞 ,其Cx4 3mRNA的相对拷贝数比值增高约 1.84倍及 2 .6 5倍。结论 宫颈癌ME180细胞中 ,ATRA在10 - 8～ 10 - 10 mol·L- 1范围内 ,具有明显增强HSV tk/GCV旁观者效应的作用。其主要机制是通过ATRA在转录水平诱导Cx4 3mRNA表达上调 ,导致旁观者效应的增强。
- 黄光琦宋毅陆燕蓉张洁肖林杨元
- 关键词：维A酸旁观者效应细胞缝隙连接通讯细胞
- HSV-tk/GCV系统对人宫颈癌细胞株ME180旁观者效应的研究被引量：3
- 2003年
- 目的 研究以逆转录病毒载体介导的 HSV - tk/ GCV系统对宫颈癌 ME180细胞株的旁观者效应。方法 应用脂质体及 ploybrene转染技术 ,将重组逆转录病毒载体 PL XSN- HSV- tk,导入 PA317包装细胞 ,以其分泌的逆转录病毒感染宫颈癌 ME180细胞 (ME) ,建立 ME/ TK转化细胞株。观察 GCV对 ME、ME/ TK细胞的存活率及旁观者效应。结果 从病毒滴度、电镜及 PCR检查 ,证实 tk基因随病毒的感染已成功地导入 PA 317及 ME180细胞。 ME/ TK细胞对 GCV的敏感性显著高于亲代 ME细胞。 ME/ TK及 ME+ME/ TK混合细胞还随 GCV浓度的增加受到明显的抑制。 ME+ME/ TK混合细胞的存活率 ,随 ME/ TK细胞比例的增加而降低 ,说明 TK/ GCV系统不但能杀伤 tk+ 细胞 ,也能杀伤未导入 tk的细胞 ,存在明显的旁观者效应。结论 HSV- tk/
- 黄光琦宋毅肖林陆燕蓉张洁陈蔚蔚
- 关键词：旁观者效应宫颈癌细胞
- 甲醛固定石蜡包埋穿刺样本杂交捕获法二代测序建库质控要点
- 2020年
- 目的探讨乳腺癌甲醛固定石蜡包埋(formalin-fixed and paraffin-embedded,FFPE)穿刺样本杂交捕获法二代测序(next-generation sequencing)样本优选条件。方法纳入多中心乳腺癌FFPE穿刺样本共计435例,选取燃石36基因检测试剂盒二代测序数据分析。纳入样本保存时间、切片厚度、降解等级、建库后的浓度、核酸片段大小、下机数据质量等质控信息。结果435例样本中111例核酸总量低于30 ng,剩余28例DNA质量低于C级,最终296例进入质控分析。保存时间分布为:<1年188例;1~2年74例;>2~3年34例,其DNA降解程度分布为:A级(>2500 bp)67例(22.6%);B级(1500~2500 bp)155例(52.4%);C级(<1500 bp)74例(25.0%)。预文库质控合格样本(300 ng)的分布为:A级65例(97.0%);B级138例(89.0%);C级64例(86.0%)。终文库片段大小280 bp以上合格样本分别为:A级66例(98.5%);B级151例(97.4%);C级72例(97.3%)。保存<1年、1~2年、>2~3年样本根据下机数据插入片段质控合格(>170 bp),所占比率分别为:156例(83.0%)、45例(60.8%)和25例(73.5%)。降解程度分布分别为:A级54例(80.6%);B级127例(81.9%);C级46例(62.2%)。结论FFPE穿刺样本杂交捕获法二代测序样本优选条件:(1)切片总厚度不低于50μm;(2)保存时间优选<1年样本;(3)核酸降解优选A级。
- 王伟伟肖林姜国忠师怡陈刚吴秀凤黄榕芳赵丹珲徐婉妮颜彬刘君君叶俊毅张哲李文才
- 关键词：甲醛固定杂交捕获法石蜡包埋DNA降解
