刘斌
- 作品数：24 被引量：43H指数：4
- 供职机构：甘肃农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：甘肃省科技重大专项计划国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学经济管理化学工程更多>>
- 一种牦牛卵泡液外泌体的提取方法及其应用
- 本发明公开了一种牦牛卵泡液外泌体的提取方法及其应用，属于外泌体技术领域。该提取方法将收集的牦牛卵泡液，第一次离心后取上清液一；将上清液一第二次离心取上清液二，之后经第一次超速离心得沉淀一，将沉淀一重悬后第二次超速离心得沉...
- 潘阳阳许瑞华王靖雷余四九崔燕刘斌王萌王立斌
- 小反刍兽疫N5蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立被引量：4
- 2017年
- 【目的】建立一种适用于PPRVN蛋白抗体的间接ELISA检测方法,应用于PPR防疫.【方法】根据GenBank中登录小反刍兽疫病毒(PPRV)Nigeria 75/1株N基因序列进行人工合成,设计1对特异引物对N5基因扩增,经测序分析后将N5基因片段和原核表达载体pET-32a(+)相连接,成功构建pET-32a-N5质粒.将pET-32a-N5转化于TransB(DE3)原核表达感受态细胞后用IPTG诱导表达获得重组蛋白,经SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定,重组蛋白分析具有良好的反应原性.【结果】利用原核表达纯化的PPRV N重组蛋白作为包被抗原,初步建立了一种能够检测针对PPRV N蛋白抗体的间接ELISA方法.用建立的方法对112山羊份血清进行了抗体检测,该方法与竞争ELISA试剂盒对比,临床符合率94.8%.【结论】该方法具有较好的敏感性、重复性和特异性.
- 刘斌陈晓宇牟筱黄银君牟克斌祁光宇许涛胡永浩
- 关键词：小反刍兽疫间接酶联免疫吸附试验
- 牦牛MT-Ⅲ基因cDNA克隆及其核酸与蛋白质序列分析
- 金属硫蛋白/(MTs/)是一类低分子量、富含半胱氨酸的金属结合蛋白,广泛存在于细菌、真菌、植物、无脊椎动物和脊椎动物中。MT具有重要的生物学功能,如重参与金属解毒、金属离子稳态的维持、自由基的清除、抗紫外线辐射以及肿瘤等...
- 刘斌
- 关键词：牦牛分子克隆
- 文献传递网络资源链接
- 水利阀门
- 1.本外观设计产品的名称：水利阀门。;2.本外观设计产品的用途：用于水利工程中控制水流大小的水利阀门。;3.本外观设计产品的设计要点：在于形状。;4.最能表明设计要点的图片或照片：立体图1。;1.本外观设计产品的名称：水...
- 高国琰魏铭皓刘斌禄迪王相相银敏华
- 1日龄牦牛肺泡毛细血管的扫描电镜观察被引量：6
- 2008年
- 本文运用血管铸型和扫描电镜技术对1日龄牦牛肺实质内微血管的铸型进行研究,旨在发现新生牦牛肺微血管的分布特征,为探讨牦牛肺微血管在出生后的发生与生长规律奠定基础。结果显示:低倍镜下肺泡微血管网呈现不规则的、类似于蜂窝样的肺泡群结构,局部区域的肺泡血管网伸展不完全,血管网形成肺泡腔的形态和大小差异很大,可以看到完全开张的肺泡、半开张的肺泡、轻微开张的肺泡以及未开张的肺泡。根据血管管径的粗细、血管网孔的大小、血管分布的疏密以及局部区域血管分布的形态差异可以将局部区域肺泡壁的毛细血管网分为3种形式:即板块状血管网、筛孔状血管网以及网络状血管网。肺泡隔内微血管网的存在形式和毗邻关系不尽相同,可以分为单层型血管网、双层型血管网以及毗邻型血管网。肺泡毛细血管的铸型表面还可见到内皮细胞核的压迹。
- 杜晓霞俞红贤刘英杜晓华郭建强赵建红王宇柳东阳李仁阁赵海涛刘斌
- 关键词：微血管铸型扫描电镜
- 口蹄疫基因工程疫苗不同佐剂水相配比优化研究被引量：1
- 2017年
- [目的]选择一种适合口蹄疫基因工程疫苗生产的佐剂。[方法 ]通过ISA 206和ISA201 VG油佐剂乳化后物理性状检验,参照现有口蹄疫灭活疫苗乳化工艺,选用ISA 206和ISA201 VG油佐剂,分别用4.6:5.4、1:1、5.4:4.6的水相和油相比例进行乳化,制备疫苗,于2~8℃保存15个月,分别于第3、6、9、12、15个月取样,进行疫苗物理性状检验。[结果 ]ISA201VG佐剂疫苗物理性状好于ISA 206油佐剂;疫苗水相和油相最佳配制比例为1:1;疫苗的外观、剂型、稳定性和黏度均符合产品的质量要求。[结论 ]ISA201VG佐剂可以作为口蹄疫基因工程疫苗佐剂使用。
- 刘斌陈晓宇黄银君牟克斌张云娟胡永浩
- 关键词：乳化疫苗佐剂口蹄疫
- LPA对牦牛卵丘细胞扩张因子HAS2、PTGS2和PTX3表达的影响
- 2024年
- 本研究以溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)在卵丘细胞扩张中的作用为切入点,旨在探讨不同浓度LPA对牦牛卵丘细胞(yak cumulus cells,YCCs)中卵丘扩张因子(透明质酸合成酶2(hyaluronate synthase 2,HAS2)、前列腺素内过氧化物合酶2(prostaglandin-endoperoxide synthase 2,PTGS2)和正五聚蛋白3(pentraxin 3,PTX3))表达的影响。本研究以健康成年(3~4岁)雌牦牛的YCCs为研究对象,取对数生长期的YCCs,将不同浓度的LPA(空白对照、阴性对照、5、15、30和50μmol·L^(-1))作用于体外培养的YCCs,分别培养12、24、36、48 h后,CCK-8检测YCCs的细胞活性,采用RT-qPCR和Western-blot法检测YCCs中HAS2、PTGS2和PTX3 mRNA和蛋白相对表达量,细胞免疫荧光染色法检测卵丘扩张因子HAS2、PTGS2和PTX3在YCCs中的分布。试验中每个处理组3个重复。结果显示,LPA孵育12、24、36和48 h,对YCCs的活性有着明显的促进作用。当孵育时间为24 h时,LPA对YCCs活性的促进作用最明显。相比较于对照组而言,当LPA浓度为15μmol·L^(-1)时,不同孵育时间中YCCs的活性提升最为显著(P<0.05)。当LPA浓度为15μmol·L^(-1)时,与空白对照组相比,HAS2、PTGS2和PTX3的mRNA和蛋白相对表达量最高(P<0.05),且YCCs中HAS2、PTGS2和PTX3的荧光强度明显增强。当LPA浓度大于15μmol·L^(-1)时,HAS2、PTGS2和PTX3的mRNA和蛋白相对表达量逐渐下降。本研究表明,LPA对YCCs活性具有促进作用。当孵育时间为24 h,并且LPA浓度为15μmol·L^(-1)时,活性提升最为显著(P<0.05)。LPA可以增强YCCs中卵丘扩张因子HAS2、PTGS2、PTX3的表达,且其作用浓度具有剂量依赖性,最佳浓度为15μmol·L^(-1)。研究结果为阐明LPA促进牦牛卵丘细胞扩张的分子机制提供了理论依据,为进一步提高牦牛卵母细胞的质量和体外受精(in vitro fertilization,IVF)成功率提供理论基础。
- 刘斌王萌潘阳阳王靖雷徐庚全
- 关键词：牦牛溶血磷脂酸卵丘细胞
- 表达猪带绦虫六钩蚴TSOL18抗原的重组活载体疫苗株的构建被引量：9
- 2008年
- 【目的】构建表达猪带绦虫六钩蚴TSOL18抗原的重组鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗株。【方法】克隆并改造TSOL18基因,构建重组质粒pYA3341-TSOL18,电转入鼠伤寒沙门氏菌终宿主菌株X4550,体外鉴定重组菌X4550(pYA3341-TSOL18)表达蛋白的免疫原性、稳定性、生长曲线、安全性和小鼠免疫试验进行评价。【结果】酶切鉴定和基因序列测定证实重组质粒构建成功;尿素-SDS-PAGE检测有目的蛋白条带,Western Blot证实该抗原具有免疫原性;重组菌株在体外营养选择压力下可稳定地携带重组质粒传代繁殖;蛋白的表达对重组菌株的生长基本没有影响;小鼠实验证实重组菌安全可靠,二免后ELISA检测产生抗体。【结论】成功构建了能稳定表达TSOL18蛋白的可口服减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株X4550(pYA3341-TSOL18)。
- 丁军涛陈晓宇骆学农王颖张少华刘斌郑亚东景志忠才学鹏
- 关键词：猪带绦虫六钩蚴TSOL18减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白基因的克隆及表达
- 2009年
- 根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核酸序列设计引物,用RT-PCR扩增出PRRSV甘肃株的核衣壳蛋白(N)基因,将N基因克隆至pGEM-T easy载体上,获得含N基因的阳性重组质粒pGEM-T easy-N.对质粒中的插入片段进行测序,应用DNAStar分析所测序列与GenBank中已登录的PRRSV毒株的同源性,再将其亚克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,得到重组表达载体pGEX-4T-1-N,转化E.coliBL21(DE3)细胞,用SDS-PAGE检测表达产物,并对其进行纯化.结果表明:PRRSV甘肃株N基因核甘酸序列与PRRSV-VR2332株的同源性为93.3%,与欧洲LV株的同源性为66.1%;构建的重组表达载体在大肠杆菌中获得了成功表达,表达产物为40ku的可溶性融合蛋白.
- 刘斌才学鹏郭爱疆贾万忠骆学农陈晓宇刘振勇丁军涛刘英
- 关键词：N基因
- 猪带绦虫TSOL18-SP蛋白的原核表达及其多抗的制备
- 2008年
- 对TSOL18基因中4个碱基进行定点突变，并截去N端16个氨基酸的信号肽，构建pGEX—TSOL18-SP原核表达载体，IPTG诱导表达后进行产物的SDS-PAGE及Western blot分析；用改造的纯化蛋白免疫家兔后采集血清，经琼脂双扩散试验检测血清抗体效价．结果表明：TSOL18基因改造后长度为345 bp，共有7个碱基发生突变，但氨基酸序列没有改变，与GenBank收录的TSOL18基因核苷酸序列相似性为97％，氨基酸序列相似性为100％．SDS-PAGE及Western blot分析表明：改造的重组菌诱导后可高效表达可溶性目的蛋白，且TSOL18-SP分子量约为38．7kD，与猪带绦虫六钩蚴阳性血清反应性强；琼脂双扩散法测定免疫兔血清抗体效价为1：32～64，说明表达的TSOL18-SP蛋白具有较好的免疫原性．
- 陈晓宇丁军涛骆学农王颖刘斌张少华郑亚东景志忠才学鹏
- 关键词：猪带绦虫六钩蚴TSOL18基因改造原核表达高免血清
