陈晓宇
- 作品数：9 被引量：20H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划甘肃省科技重大专项计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- Tsol18基因密码子优化对其表达及重组蛋白免疫效果的影响被引量：5
- 2009年
- 定点突变猪带绦虫六钩蚴(oncosphere)Tsol18基因的4个碱基,并截去其N端16氨基酸信号肽的编码序列,构建pGEX-Tsol18-sp表达载体,IPTG诱导表达后进行产物的SDS-PAGE、Western blot及稳定性分析;取该基因修饰前、后所表达的重组蛋白免疫猪,以ELISA检测抗体水平,并通过屠宰检虫评价、比较免疫效果。结果显示:修饰后的Tsol18-sp基因共有7个碱基发生同义突变,表达产物主要是约38.7 ku的可溶性融合蛋白,在4℃保存2个月后约降解20.1%,能与猪带绦虫六钩蚴阳性血清反应;TSOL18和TSOL18-sp抗原免疫试验猪后均能诱导高水平抗体的产生,但TSOL18-sp抗原的保护率较TSOL18抗原有明显的提高(100%vs 20%)。表明Tsol18经修饰后,其重组表达产物的生物学活性和稳定性都有很大改善,可作为囊虫病免疫预防的候选抗原。
- 丁军涛骆学农王颖张少华陈晓宇郑亚东景志忠才学鹏
- 关键词：猪带绦虫六钩蚴基因修饰抗原性
- 猪囊尾蚴病重组基因、疫苗及其制备方法
- 本发明公开一种猪带绦虫六钩蚴重组基因和这种重组基因的制备方法，以及这种重组基因的用途，特别是采用这种重组基因制备的用于防治猪囊虫病的口服疫苗和制备这种疫苗的制备方法。本发明的重组基因是将猪带绦虫六钩蚴的TsoL18基因原...
- 才学鹏丁军涛王颖陈晓宇骆学农郑亚东景志忠
- 文献传递
- 表达猪带绦虫六钩蚴TSOL18抗原的重组活载体疫苗株的构建被引量：9
- 2008年
- 【目的】构建表达猪带绦虫六钩蚴TSOL18抗原的重组鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗株。【方法】克隆并改造TSOL18基因,构建重组质粒pYA3341-TSOL18,电转入鼠伤寒沙门氏菌终宿主菌株X4550,体外鉴定重组菌X4550(pYA3341-TSOL18)表达蛋白的免疫原性、稳定性、生长曲线、安全性和小鼠免疫试验进行评价。【结果】酶切鉴定和基因序列测定证实重组质粒构建成功;尿素-SDS-PAGE检测有目的蛋白条带,Western Blot证实该抗原具有免疫原性;重组菌株在体外营养选择压力下可稳定地携带重组质粒传代繁殖;蛋白的表达对重组菌株的生长基本没有影响;小鼠实验证实重组菌安全可靠,二免后ELISA检测产生抗体。【结论】成功构建了能稳定表达TSOL18蛋白的可口服减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株X4550(pYA3341-TSOL18)。
- 丁军涛陈晓宇骆学农王颖张少华刘斌郑亚东景志忠才学鹏
- 关键词：猪带绦虫六钩蚴TSOL18减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白基因的克隆及表达
- 2009年
- 根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核酸序列设计引物,用RT-PCR扩增出PRRSV甘肃株的核衣壳蛋白(N)基因,将N基因克隆至pGEM-T easy载体上,获得含N基因的阳性重组质粒pGEM-T easy-N.对质粒中的插入片段进行测序,应用DNAStar分析所测序列与GenBank中已登录的PRRSV毒株的同源性,再将其亚克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,得到重组表达载体pGEX-4T-1-N,转化E.coliBL21(DE3)细胞,用SDS-PAGE检测表达产物,并对其进行纯化.结果表明:PRRSV甘肃株N基因核甘酸序列与PRRSV-VR2332株的同源性为93.3%,与欧洲LV株的同源性为66.1%;构建的重组表达载体在大肠杆菌中获得了成功表达,表达产物为40ku的可溶性融合蛋白.
- 刘斌才学鹏郭爱疆贾万忠骆学农陈晓宇刘振勇丁军涛刘英
- 关键词：N基因
- TSOL18抗原重组减毒鼠伤寒沙门菌活载体疫苗对小鼠的免疫保护作用被引量：6
- 2008年
- 用构建好的活载体疫苗X4550(pYA3341-TSOL18)免疫小鼠,检测小鼠血清中IgG、IgM和肠液中IgA抗体的产生及各免疫组织重组疫苗株的分布情况,分析小鼠脾细胞亚型的分化,探讨了重组疫苗的免疫保护效果。结果显示,在免疫后第7 d,小鼠血清中有抗TSOL18 IgM产生,在二免后第28 d,IgG的D492 nm值达到0.645,在二免后第42 d,肠液中有抗TSOL18分泌性IgA抗体产生,表明重组疫苗能诱导小鼠产生较强的抗体水平和激发多种方式的免疫应答;小鼠免疫后第21 d在脾中仍能检测到大量的重组疫苗株,表明TSOL18重组蛋白的表达没有影响重组疫苗X4550(pYA3341-TSOL18)的定居能力;免疫小鼠的CD4+、CD8+T淋巴细胞数目明显增多,CD4+/CD8+T细胞比值也显著增高(P<0.01),提示重组疫苗可能通过提高CD4+/CD8+T细胞比值来发挥免疫作用。
- 丁军涛王颖陈晓宇骆学农郑亚东景志忠才学鹏
- 关键词：小鼠免疫保护
- 表达TsoL18抗原的口服减毒鼠伤寒沙门氏菌重组活载体疫苗的构建
- 囊尾蚴病(Cysticercosis)是由猪带绦虫(Taenia solium)的幼虫囊尾蚴(Cysticercus cellulose)寄生于人或猪等而引起的人畜共患寄生虫病，是公认的世界经济病之一。囊尾蚴病在中国大部...
- 陈晓宇
- 关键词：猪囊尾蚴猪带绦虫囊虫病鼠伤寒沙门氏菌
- 文献传递
- 猪囊尾蚴DNA疫苗pVAX1/TSOL18的安全性评估被引量：1
- 2008年
- 目的探讨pVAX1/TSOL18重组表达质粒作为DNA疫苗在小鼠体内的组织分布和生物安全性。方法将pVAX1/TSOL18重组质粒经肌肉注射免疫昆明系小鼠,免疫后在不同时间剖杀小鼠,分别采集心、肝、脾等组织样品,抽提gDNA,利用PCR技术分析pVAX1/TSOL18在组织内的分布及残留时间。同时,以PCR技术检测免疫动物粪便,分析pVAX1/TSOL18重组表达质粒在外界环境中的释放情况。结果免疫pVAX1/TSOL18重组表达质粒后1 d和5 d,在小鼠组织gDNA均扩增出目的片段,不同个体小鼠,扩增出目的片段的组织也不完全相同,但在血液中均扩增出了目的片段,d5较d1扩增出的目的片段明显变暗。免疫后15 d,仅在一只小鼠的血液中检测到TSOL18基因;免疫后30 d在所有动物组织中均未检测到重组表达质粒。同时,免疫1 d、5 d小鼠的粪便中均未检测到TSOL18基因。结论pVAX1/TSOL18重组表达质粒作为疫苗对动物和环境是安全的。
- 刘斌才学鹏郭爱疆骆学农陈晓宇丁军涛刘英
- 关键词：猪囊尾蚴DNA疫苗安全性
- 猪带绦虫TSOL18-SP蛋白的原核表达及其多抗的制备
- 2008年
- 对TSOL18基因中4个碱基进行定点突变，并截去N端16个氨基酸的信号肽，构建pGEX—TSOL18-SP原核表达载体，IPTG诱导表达后进行产物的SDS-PAGE及Western blot分析；用改造的纯化蛋白免疫家兔后采集血清，经琼脂双扩散试验检测血清抗体效价．结果表明：TSOL18基因改造后长度为345 bp，共有7个碱基发生突变，但氨基酸序列没有改变，与GenBank收录的TSOL18基因核苷酸序列相似性为97％，氨基酸序列相似性为100％．SDS-PAGE及Western blot分析表明：改造的重组菌诱导后可高效表达可溶性目的蛋白，且TSOL18-SP分子量约为38．7kD，与猪带绦虫六钩蚴阳性血清反应性强；琼脂双扩散法测定免疫兔血清抗体效价为1：32～64，说明表达的TSOL18-SP蛋白具有较好的免疫原性．
- 陈晓宇丁军涛骆学农王颖刘斌张少华郑亚东景志忠才学鹏
- 关键词：猪带绦虫六钩蚴TSOL18基因改造原核表达高免血清
- 猪囊尾蚴病重组基因、疫苗及其制备方法
- 本发明公开一种猪带绦虫六钩蚴重组基因和这种重组基因的制备方法，以及这种重组基因的用途，特别是采用这种重组基因制备的用于防治猪囊虫病的口服疫苗和制备这种疫苗的制备方法。本发明的重组基因是将猪带绦虫六钩蚴的TsoL18基因原...
- 才学鹏丁军涛王颖陈晓宇骆学农郑亚东景志忠
- 文献传递
