刘斌
- 作品数：34 被引量：101H指数：5
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省中医药科技计划项目北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学核科学技术更多>>
- mRNA氧化损伤检测方法的优化及p53 mRNA氧化损伤分析被引量：3
- 2013年
- 目的建立并优化检测真核细胞mRNA氧化损伤的方法——反转录阻断-双引物扩增法,检测p53 mRNA氧化损伤。方法建立非细胞体系和细胞体系mRNA氧化损伤模型,提取RNA并反转录成cDNA,根据所检测mRNA的5'端和3'端各设计一对引物,以cDNA为模板进行实时定量PCR。结果非细胞体系和细胞体系氧化处理组GAPDH和p53 mRNA的氧化损伤程度均明显高于对照组,且随着过氧化氢浓度增加RNA氧化损伤增强;同时一定限度内降低反转录酶用量能提高检测灵敏度。结论本研究建立并优化的RNA氧化损伤检测方法能检测特定mRNA对氧化的敏感性及损伤程度,为分析相关疾病造成的RNA氧化损伤以及探索其发病机制和治疗方法提供了技术支持。
- 马春花铁轶付汉江刘斌邢瑞云朱捷丁勇郑晓飞
- 关键词：RNAP53MRNA
- Skp2参与HeLa细胞G_2/M周期检查点的调控被引量：5
- 2005年
- 具癌基因特性的Skp2在大多数肿瘤组织和肿瘤细胞中异常高表达,它作为SCFSkp2复合物的底物识别亚基调控p27KIP蛋白的稳定性而促进细胞G1/S期转换.为进一步明确Skp2与G2/M周期检查点的关系,在HeLa细胞中过表达Skp2以及通过反义寡核苷酸抑制Skp2表达.结果发现:Skp2能促进细胞周期运转,表现为S期细胞增多和G2/M期细胞减少,其中F-box结构域具有重要的功能意义;反义寡核苷酸抑制Skp2表达后,HeLa细胞发生显著的G2/M期阻滞;MTT检测结果表明,400nmol/L的Skp2的反义寡核苷酸能明显抑制HeLa细胞的增殖活性;Western印迹结果表明,HeLa细胞中Skp2可能通过负调控p21WAF的稳定性来参与G2/M检查点调控,这在用放线菌素D处理HeLa细胞的实验中得到验证.这些结果初步揭示了Skp2参与HeLa细胞G2/M周期检查点调控的分子机制.
- 钱俊杰孙国敬孟祥兵宋宜梅柱中刘斌董燕孙志贤
- 关键词：SKP2
- 电离辐射造成的DNA损伤反应中PML调控p53凋亡信号转导通路机制的研究
- 早幼粒细胞白血病蛋白PML(promyelocytic leukemia)在Fas、TNF、 IFN、神经酰胺、电离辐射等多种因素诱发的细胞凋亡反应中均发挥着关键性的调控作用,它借助其N末端的RBCC结构募集将近50种分...
- 田宝磊宋宜钱俊杰董燕刘华刘斌瞿文全刘继来祝晓梅孙志贤
- 关键词：P53MDM2电离辐射凋亡
- 文献传递
- TSA诱导MOLT-4细胞中p21^(WAF1/Cip-1)表达的功能机制研究被引量：2
- 2005年
- 为了研究去乙酰化酶抑制剂TSA诱导MOLT-4细胞周期阻滞和凋亡反应中p21WAFl/Cip-1的表达及其功能, 以组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA处理急性淋巴细胞白血病细胞系MOLT-4,流式细胞仪和细胞吖啶橙染色、瑞士染 色检测细胞周期和凋亡,Western检测p21p21WAFl/Cip-1的表达。结果表明:组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA可有效的诱导 MOLT-4细胞发生G2／M阻滞和凋亡,并且呈现明显的剂量效应关系和时间效应关系;在此周期阻滞与凋亡反应过 程中,p21WAFl/Cip-1蛋白的表达水平在周期阻滞前快速增高,而在凋亡早期开始下降。p21WAFl/Cip-1分子在细胞中的表 达规律与TSA诱导的细胞G2／M阻滞和凋亡反应间存在明显的剂量效应关系和时间效应关系;蛋白酶体抑制剂 MG-132提升p21WAFl/Cip-1分子在细胞中的表达可以增进细胞的G2／M阻滞反应而延缓凋亡。结论:蛋白酶体途径参 与TSA诱导的MOLT-4细胞周期阻滞向凋亡转换过程中p21WAFl/Cip-1分子的降解调控;p21WAFl/Cip-1在TSA诱导的 MOLT-4细胞G2／M阻滞和凋亡反应中起着重要调节作用。
- 宋宜刘梅菊赵国伟钱俊杰董燕刘华孙国敬梅柱中刘斌田宝磊孙志贤
- 关键词：TSAMOLT-4细胞MG-132
- ^(60)Co源意外受照者红细胞血型糖蛋白A变异频率被引量：3
- 2001年
- 血型糖蛋白A(glycophorinA ,GPA)是体细胞突变研究的重要分子标志之一。为了了解射线作用与GPA突变的效应关系 ,采用GPA突变分析技术对 3例钴源意外受照个体外周血红细胞GPA变异频率进行了检测。经淋巴细胞染色体畸变分析方法进行估算 ,这 3例个体受照的生物剂量分别为 2 .5 ,2 .9和 1.9Gy ,所测GPA变异细胞频率分别是正常对照个体均值的 3.9,4 .3和4 .1倍 ,提示射线所致GPA变异细胞频率增高效应。受照个体外周血中长期持续存在的GPA变异细胞 ,来源于突变的造血干细胞 。
- 董燕毛建平刘斌孙志贤
- 关键词：红细胞血型糖蛋白A^60CO照射
- 电离辐射反应中PML调控CXCR4的表达被引量：3
- 2016年
- 目的：观察电离辐射反应中，肺癌细胞中受辐射感应分子早幼粒细胞白血病蛋白（PML）表达影响的信号分子，探讨PML是否参与调控辐射诱导的肿瘤转移过程。方法本实验采用特异性靶向PML的siRNA构建PML敲低表达细胞模型，钴-60辐照，而后用康成公司的基因表达谱芯片检测获得差异表达基因，经聚类分析挖掘与细胞间通讯、肿瘤转移有重要相关性的基因，进一步用反转录实时定量多聚酶链反应法（RT-qPCR）和蛋白质免疫印记法（WB）进行验证。结果应用基因表达谱芯片比较检测电离辐射反应中受PML影响的基因，筛选获得在非小细胞肺癌侵袭转移中发挥重要作用的C-X-C细胞因子受体4（CXCR4）在PML敲低表达的非小细胞肺癌A549细胞中表达显著上调；RT-qPCR和WB进一步在mRNA和蛋白水平验证PML敲低细胞中CXCR4的表达增高。结论在肺癌侵袭转移中发挥重要功能的CXCR4基因的表达受辐射感应分子PML的调控。
- 楼炜姚婉楼敏铭刘斌宋宜
- 关键词：电离辐射
- 肿瘤细胞中Ro60的表达及其对肿瘤细胞辐射敏感性的影响被引量：1
- 2013年
- 目的检测肿瘤细胞中RNA结合蛋白Ro60的表达定位,研究Ro60在肿瘤增殖和辐射敏感性中的作用。方法构建带绿色荧光素酶标签的Ro60真核表达载体,转染肿瘤细胞,观察电离辐射引发的DNA损伤反应中Ro60的表达定位规律;CCK8和锥虫蓝染色实验检测Ro60蛋白对肿瘤细胞增殖和辐射敏感性的影响。结果多种肿瘤细胞中均有较高水平的Ro60蛋白表达。γ射线诱导的DNA损伤反应中Ro60发生显著的表达上调和亚细胞定位改变。过表达Ro60的肿瘤细胞增殖延缓,细胞死亡明显增多,辐射引发的细胞增殖抑制和死亡显著增强。结论辐射引发肿瘤细胞中Ro60表达和定位改变,调控肿瘤细胞增殖和凋亡,提高肿瘤细胞的辐射敏感性。
- 楼敏铭张兴田宝磊刘继来刘斌张令强郑晓飞宋宜孙志贤
- 关键词：肿瘤细胞增殖
- PKA磷酸化p21^(WAF)后对其泛素化修饰和稳定性的影响
- 2005年
- 目的:探索p21被蛋白激酶A(PKA)磷酸化修饰后对其泛素化修饰和稳定性的影响。方法:构建p21可能磷酸化位点的突变体p21 T145A,观察PKA体外磷酸化修饰p21;W estern印迹分析PKA特异性抑制剂H89对p21稳定性的影响;通过免疫沉淀分析H89对p21泛素化修饰的影响以及p21 Thr 145突变前后和Skp2结合能力的变化。结果:PKA体外磷酸化修饰p21的Thr 145;PKA特异性抑制剂H89能够提高p21的稳定性并抑制p21的泛素化修饰;野生型(w ild)p21比p21 T145A结合Skp2的能力强。结论:PKA磷酸化修饰p21的Thr145后导致其结合E3连接酶结合亚基Skp2的能力增强,从而促进p21的泛素化修饰,导致p21稳定性的降低。
- 钱俊杰孙国敬宋宜梅柱中董燕刘斌孙志贤
- 关键词：蛋白激酶A泛素化修饰SKP2细胞周期蛋白质类
- DNA损伤反应中细胞周期检查点蛋白p27^(Kip1)表达及其调控机制被引量：3
- 2004年
- 为了研究DNA损伤反应中p2 7Kip1的表达及其调控机制 ,应用免疫印迹的实验结果表明 :10Gy 60 Coγ射线照射后 3h ,HeLa细胞中p2 7Kip1蛋白水平开始下降并持续到 2 4h ,进而失去它对CDKs的抑制功能 .Northern印迹结果显示 ,电离辐射 (IR)对p2 7Kip1mRNA表达水平无明显影响 ,说明电离辐射诱导p2 7Kip1表达水平的降低主要与蛋白质降解相关 ,但其具体的调控机制还不清楚 .已知在G1—S期p2 7Kip1蛋白的降低主要依赖细胞周期蛋白E Cdk2激酶将其磷酸化后的泛素化蛋白酶体途径 (ubiquitin proteasomepathway) .酶动力学研究结果揭示 :电离辐射后细胞周期蛋白E Cdk2激酶活性增高 ,12h细胞周期蛋白E Cdk2激酶活性达到最大 .当在照前用细胞周期蛋白E Cdk2抑制剂olomoucine (10 μmol L)抑制细胞周期蛋白E Cdk2激酶活性时 ,p2 7Kip1蛋白表达水平增加 .此外 ,还观察到电离辐射可诱导p2 7Kip1泛素化水平的增高 ,而在使用蛋白酶体抑制剂MG 132 (5 μmol L)处理HeLa细胞后 ,可抑制辐射诱导p2 7Kip1蛋白水平的下调 .研究结果提示 :泛素化蛋白酶体途径参与了辐射诱导P2 7Kip1蛋白表达下调的降解机制 .
- 张枫孟祥兵宋宜梅柱中董燕刘斌孙志贤
- 关键词：电离辐射泛素化蛋白酶体抑制剂
- Ro60表达下调抑制肺腺癌A549细胞迁移和侵袭
- 2016年
- 目的探究Ro60对肺腺癌A549细胞迁移和侵袭的影响。方法采用RNA干扰(RNAi)方法下调A549细胞中Ro60表达水平,检测其迁移和侵袭能力的改变,通过实时定量PCR和免疫印迹方法分析与肿瘤侵袭转移相关分子的表达变化。结果下调Ro60表达,A549细胞的迁移和侵袭能力均减弱,与肿瘤细胞迁移和侵袭相关的MMP9、c-Src等在mRNA水平明显降低,Src蛋白和MMP9酶原激活形式蛋白表达量下调。结论 Ro60表达下调抑制A549细胞的迁移和侵袭,并通过调控Src蛋白表达和MMP9酶原激活发挥作用。
- 姚婉刘继来孙鹏达田宝磊刘斌宋宜孙志贤
- 关键词：肺腺癌细胞迁移
