梅柱中
- 作品数：39 被引量：162H指数：7
- 供职机构：南方医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金长江学者和创新团队发展计划国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 凋亡抑制蛋白与细胞凋亡调控被引量：12
- 1999年
- Caspases蛋白酶激活级联反应在凋亡调控中起核心作用,它主要涉及两条途径:死亡受体介导途径与线粒体依赖途径。不同的凋亡刺激信号经各自特定的途径起始不同的caspases级联反应,进而激活下游的效应caspases,诱发细胞凋亡。正常情况下细胞凋亡受到严密的调控以防因失调而导致机体病变。凋亡抑制蛋白作为凋亡通路的重要调节者,主要包括Bcl2家族抗凋亡成员、死亡受体阻断分子和IAP蛋白家族等三类,它们分别作用于凋亡途径的不同位点,抑制凋亡的进行,其中Bcl2s蛋白主要作用于凋亡的线粒体依赖途径;死亡受体阻断分子抑制凋亡的死亡受体途径;而IAPs或在凋亡途径的高度保守步骤抑制效应酶caspase3、6与7的活化或其催化活性,因而对这两条途径均有抑制作用。对凋亡抑制蛋白的研究,不仅可进一步阐明凋亡的作用机理,而且有望为肿瘤以及其它一些恶性疾病的选择性治疗提供理想的途径,具有重要的理论和实践意义。
- 梅柱中
- 关键词：BCL-2家族细胞凋亡凋亡抑制蛋白
- 小鼠DUSP13＇-UTR双荧光素酶报告基因表达系统的建立及功能鉴定被引量：4
- 2013年
- 目的建立小鼠双特异性磷酸酶1(DUSP1)3'端非翻译区(UTR)双荧光素酶报告基因表达系统,并对其进行功能鉴定。方法提取RAW264.7细胞总RNA并反转录为cDNA,以其为模板通过PCR扩增获得小鼠DUSP1 3'-UTR全长序列,酶切后克隆至pGL3-control载体荧光素酶编码基因的下游,获得重组载体LuDP,经PCR、限制性内切酶酶切、DNA序列分析鉴定正确后与内参照质粒pRL-TK共转染NIH3T3细胞,48h后检测双荧光素酶报告基因的表达。将含有小鼠DUSP1 3'-UTR的荧光素酶表达模块与来源于pRL-TK质粒的RL表达模块克隆至pLenti6-TR质粒中,获得双荧光素酶报告基因表达载体LuDP/RL,将其与RNA结合蛋白HuR表达载体(pcDNA3.1-HuR-FLAG)、mmu-miR-101a分别共转染NIH3T3细胞,检测双荧光素酶的活性,分析HuR、mmu-miR-101对荧光素酶基因表达活性的影响。结果成功构建了双荧光素酶报告基因表达载体。小鼠DUSP1 mRNA 3'-UTR可显著下调与其相连的荧光素酶的表达活性(0.14±0.01倍,P<0.01);共转染HuR可上调荧光素酶的表达活性(1.40±0.20倍,P<0.05),共转染mmu-miR-101a则可下调荧光素酶表达活性(0.57±0.18倍,P<0.05)。结论成功构建了DUSP1 3'-UTR双荧光素酶报告基因表达系统,该系统可用于转录后调控元件对小鼠DUSP1基因表达的调控机制研究。
- 温晓梨孙宏卫欧小利王妮梅柱中姜勇
- 关键词：荧光素酶类基因转录
- pNTAP-PRAK真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达
- 2010年
- 目的:构建pNTAP-PRAK真核表达质粒,并建立其稳定表达的HEK293细胞系。方法:将人的PRAK亚克隆至串联亲和纯化(tandem affinity purification,TAP)载体pNTAP质粒上,构建成重组质粒pNTAP-PRAK,转化该重组质粒至感受态大肠杆菌DH5α,阳性克隆进行PCR、酶切及DNA测序验证正确后,利用PolyFect脂质体介导将其转染至HEK293细胞中,再通过G418筛选建立稳定表达TAP tag-PRAK融合蛋白的HEK293细胞系;利用Western blotting和细胞免疫荧光标记法检测融合蛋白TAP tag-PRAK的表达及细胞内定位情况。结果:重组真核表达载体构建正确,该重组质粒能在HEK293细胞中稳定表达,表达产物TAP tag-PRAK主要分布在核内。结论:成功构建pNTAP-PRAK真核表达载体并建立了其稳定表达的HEK293细胞系,TAP标签未对PRAK定位产生明显影响。
- 王达安龚小卫刘爱华梅柱中王丹明小燕王旭魏洁邓鹏姜勇
- 关键词：基因表达
- 双特异性磷酸酶1：炎症反应的负调控因子被引量：7
- 2012年
- 炎症是机体对外界刺激的一种防御性反应，通常情况下对机体是有益的，但其失调则可导致对机体自身组织的攻击而产生病变，因此炎症反应必定要受到机体内外环境的严密调控以保证其正常进行。正常情况下，炎症刺激如病原微生物感染可激活细胞内的多条信号通路，而丝裂原激活的丝裂原激活的蛋白激酶（MAPK）信号传导通路是其中最为重要的一种。双特异性磷酸酶1（DUSP1，又称为MKP1）可特异性地抑制MAPK家族成员p38、JNK和ERK等的活性，是细胞中介导炎症反应的自限以及促进炎症消退的重要调控因子。
- 殷为梅柱中
- 关键词：炎症反应
- 组蛋白去乙酰化酶抑制剂诱导H eLa细胞p21^(WAF1/CIP1)表达的分子机制研究被引量：2
- 2005年
- 目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HD Is)诱导肿瘤细胞产生周期阻滞以及诱导p21WAF1/C IP1表达的分子机制。方法:以人宫颈癌HeLa细胞为模型,用曲古抑菌素A(TSA)处理HeLa细胞,通过流式细胞术检测细胞周期及凋亡,通过W estern印迹及RT-PCR检测周期相关分子的蛋白及mRNA的表达;并构建TSA靶分子启动子区的荧光素酶报告质粒,进一步检测TSA的主要作用位点,寻找相关作用途径。结果与结论:TSA可诱导HeLa细胞发生周期阻滞,并呈现明显的剂量和时间依赖关系,加大用药剂量及延长用药时间可诱导凋亡。TSA可显著诱导p21WAF1/C IP1的表达,表现为转录水平的调节,其变化可以指示周期阻滞的程度。p21WAF1/C IP1启动子区3′端是TSA作用的主要位点,同样被TSA诱导表达增加的p53很可能通过与其效应元件的结合而使TSA诱导p21WAF1/C IP1表达的总效果增强。
- 赵国伟宋宜董燕钱俊杰梅柱中田宝磊张应玖孙志贤
- 关键词：组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A细胞周期阻滞
- PKA磷酸化p21^(WAF)后对其泛素化修饰和稳定性的影响
- 2005年
- 目的:探索p21被蛋白激酶A(PKA)磷酸化修饰后对其泛素化修饰和稳定性的影响。方法:构建p21可能磷酸化位点的突变体p21 T145A,观察PKA体外磷酸化修饰p21;W estern印迹分析PKA特异性抑制剂H89对p21稳定性的影响;通过免疫沉淀分析H89对p21泛素化修饰的影响以及p21 Thr 145突变前后和Skp2结合能力的变化。结果:PKA体外磷酸化修饰p21的Thr 145;PKA特异性抑制剂H89能够提高p21的稳定性并抑制p21的泛素化修饰;野生型(w ild)p21比p21 T145A结合Skp2的能力强。结论:PKA磷酸化修饰p21的Thr145后导致其结合E3连接酶结合亚基Skp2的能力增强,从而促进p21的泛素化修饰,导致p21稳定性的降低。
- 钱俊杰孙国敬宋宜梅柱中董燕刘斌孙志贤
- 关键词：蛋白激酶A泛素化修饰SKP2细胞周期蛋白质类
- 人外周血活化淋巴细胞中Survivin蛋白表达的分子机制研究被引量：2
- 2008年
- 目的:探讨活化淋巴细胞中Survivin蛋白诱导表达的信号转导通路、分子级联反应和生物效应,揭示Survivin蛋白表达调控的分子机制。方法:用PHA和rhIL-2刺激培养人外周血单个核细胞,附加JAK抑制剂—AG490的处理,以Western blot检测Survivin和相关蛋白的表达;以流式细胞术(FCM)分析细胞周期和细胞分裂增殖。结果:刺激培养的细胞按照时序先后出现的分子和细胞学反应为:Stat3和Stat5磷酸化→CyclinD3、CyclinE蛋白水平上调→细胞进入S期及Survivin蛋白起始表达→细胞有丝分裂及Survivin蛋白表达水平增加。AG490对于上述反应均呈现明显的抑制作用,但对周期抑制蛋白P21和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平没有影响。结论:Survivin蛋白的表达依赖JAK-Stat信号转导通路的早期活化,通过上调CyclinD3和CyclinE周期蛋白水平,启动细胞周期的运行,诱导Survivin蛋白的周期时相依赖性表达,参与细胞有丝分裂与增殖。
- 董燕梅柱中钱俊杰宋宜田宝磊刘斌孙志贤
- 关键词：SURVIVIN蛋白活化淋巴细胞信号转导
- NFKBIA 3＇UTR功能鉴定及相互作用蛋白的蛋白质组学筛选
- 2017年
- [目的]鉴定NFKBIA基因3'非翻译区功能并筛选与其相互作用的蛋白质。[方法](1)PCR扩增获得luciferaseNFKBIA 3'非翻译区融合片段并克隆至p GL3-control载体中获得重组质粒p GL3-NF,转染NIH3T3细胞24h后回收细胞检测荧光素酶活性。(2)制备生物素标记的NFKBIA 3'非翻译区RNA探针,通过链亲和素-生物素RNA-pull down获得与其相互结合的蛋白质并进行质谱鉴定。[结果](1)NFKBIA 3'非翻译区能显著性降低与其相连的荧光素酶基因的表达(p<0.001)。(2)质谱鉴定得到Myosin9等24种与NFKBIA 3'非翻译区相互作用的蛋白质。[结论]NFKBIA基因3'非翻译区对与其相连的基因的表达起负调控作用。与NFKBIA基因3'非翻译区相互结合的24种蛋白质之间存在直接或间接的相互作用。
- 王静李涛欧小利姜勇梅柱中
- 关键词：MRNARNA结合蛋白
- 53BP1蛋白对P53转录调控活性的影响被引量：3
- 2004年
- 目的 :探索含有BRCT结构域的P5 3分子结合蛋白 5 3BP1调控P5 3转录活性的机制。方法 :通过PCR的方法获得缺失不同结构域的 5 3BP1基因突变体 5 3BP1Δ1,5 3BP1Δ2 ,5 3BP1Δ3与 5 3BP1Δ4 ,并采用双荧光素酶报告基因系统分析了它们对P5 3蛋白转录活性的影响。结果与结论 :野生型 5 3BP1蛋白可以明显提高P5 3的转录活性 ,其C端的BRCT结构域与核定位信号的存在为必不可少 ,而N端与P2 0 2蛋白相互结合结构域的存在也可以促进P5 3的转录活性 ,提示 5 3BP1蛋白不同功能结构域之间的协同作用是保证其行使正常生理功能的前提条件。
- 单冉东梅柱中宋宜董燕孙国敬刘斌田宝磊张应玖孙志贤
- 关键词：蛋白质P53聚合酶链反应
- TSA诱导MOLT-4细胞中p21^(WAF1/Cip-1)表达的功能机制研究被引量：2
- 2005年
- 为了研究去乙酰化酶抑制剂TSA诱导MOLT-4细胞周期阻滞和凋亡反应中p21WAFl/Cip-1的表达及其功能, 以组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA处理急性淋巴细胞白血病细胞系MOLT-4,流式细胞仪和细胞吖啶橙染色、瑞士染 色检测细胞周期和凋亡,Western检测p21p21WAFl/Cip-1的表达。结果表明:组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA可有效的诱导 MOLT-4细胞发生G2／M阻滞和凋亡,并且呈现明显的剂量效应关系和时间效应关系;在此周期阻滞与凋亡反应过 程中,p21WAFl/Cip-1蛋白的表达水平在周期阻滞前快速增高,而在凋亡早期开始下降。p21WAFl/Cip-1分子在细胞中的表 达规律与TSA诱导的细胞G2／M阻滞和凋亡反应间存在明显的剂量效应关系和时间效应关系;蛋白酶体抑制剂 MG-132提升p21WAFl/Cip-1分子在细胞中的表达可以增进细胞的G2／M阻滞反应而延缓凋亡。结论:蛋白酶体途径参 与TSA诱导的MOLT-4细胞周期阻滞向凋亡转换过程中p21WAFl/Cip-1分子的降解调控;p21WAFl/Cip-1在TSA诱导的 MOLT-4细胞G2／M阻滞和凋亡反应中起着重要调节作用。
- 宋宜刘梅菊赵国伟钱俊杰董燕刘华孙国敬梅柱中刘斌田宝磊孙志贤
- 关键词：TSAMOLT-4细胞MG-132
