任婷婷
- 作品数：6 被引量：5H指数：1
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- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 人DDR2基因pShuttle-CMV穿梭载体的构建及表达
- 2007年
- 目的:构建带有flag标签的人DDR2 pShuttle-CMV载体,检测其真核表达并观察DDR2分子的亚细胞分布.方法:以含有人全长DDR2cDNA的质粒为模板,用PCR方法扩增DDR2基因的C-端(DDR2-C),并在其C末端带上含24bp的flag标签,NcoI/EcoRV酶切后亚克隆入含有DDR2全长序列的pMD18-T载体,即替换掉原有DDR2序列的C-端,引入flag标签,测序正确后再克隆入pShuttle-CMV表达载体,酶切鉴定正确后采用脂质体法瞬时转染HEK293细胞,West-ern Blot检测DDR2-flag在细胞中的表达.瞬时转染Hela细胞,通过间接免疫荧光法观察DDR2分子在细胞内的分布情况.结果:测序及酶切显示DDR2-flag/pShuttle-CMV载体构建符合预期;脂质体法转染HEK293细胞,24h后用Western Blot方法检测到目的蛋白的表达;对转染了目的载体的细胞应用FITC标记的抗体进行间接免疫荧光实验,激光共聚焦显微镜观察到DDR2分子主要分布于细胞质与细胞膜.结论:成功构建并表达了C-末端带flag标签的DDR2真核表达载体,使其在真核细胞中表达,并观察到其亚细胞分布.
- 任婷婷刘新平车红磊张健张璟李霞苏金
- 关键词：DDR2聚合酶链式反应克隆免疫荧光
- DDR2基因缺失小鼠的繁育及子代基因型的鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的:探讨盘状结构域受体2(DDR2)基因缺失小鼠的优化繁殖方法与子代小鼠DDR2基因型的鉴定方法,建立DDR2基因缺失小鼠模型,为进一步研究DDR2分子在肿瘤、肺纤维化、类风湿性关节炎等复杂疾病中的功能以及作用机制奠定基础。方法:将从美国JAX实验室引进的三对杂合子小鼠进行饲养并交配繁殖,繁殖成功后其子代中将会出现野生型、杂合子以及纯合子3种基因型。用基因组提取试剂盒试剂盒提取子鼠鼠尾的基因组DNA,经紫外分光光度计定量后,采用Taqman qPCR的方法准确鉴定出小鼠的基因型,同时观察子代小鼠各基因型的比例,并通过小鼠体态观察,进一步证实Taqman qPCR鉴定方法的可靠性。结果:DDR2基因杂合子小鼠互交繁殖可得到DDR2野生型小鼠、DDR2纯合子小鼠以及DDR2杂合子小鼠三种基因型小鼠,所得子代基本符合孟德尔遗传规律,且雌性和雄性DDR2纯合子小鼠体长均较DDR2野生型小鼠和DDR2杂合子小鼠小,鼻子也较其它基因型小鼠明显变短,无繁殖能力。依据Taqman qPCR的结果所得出的纯合子小鼠体貌特征与文献报道一致,证实了Taqman qPCR结果的可靠性。结论:雌、雄性DDR2杂合子小鼠交配可有效获得DDR2基因缺失小鼠;实验所用Taqman qPCR方法能够准确鉴定子代小鼠的基因型,DDR2纯合子小鼠的获得为后续实验的提供了较理想的动物模型。
- 赵虎卜歆张淑雅任婷婷苏金
- 关键词：DDR2基因缺失基因型鉴定
- 盘状结构域受体2与EGFP融合载体的构建及细胞中的活性分析
- 2006年
- 目的:寻找使盘状结构域受体2(DDR2)在细胞内的表达情况易于检测并能动态追踪其蛋白表达分布的途径方法:采用PCR技术扩增获得DDR2编码区无终止码序列通过限制性酶切将DDR2片段亚克隆入pEGFP-N3载体中,转染293T细胞后通过倒置显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,并用免疫印迹技术检测融合载体的表达及胶原刺激后活化状况.结果:成功构建了DDR2/EGFP融合表达载体,进一步的分析也证明此融合表达载体能在细胞中正确表达并可以被配体所激活.结论:DDR2/EGFP的成功构建及可进一步检测磷酸化,为深入研究DDR2的功能奠定了基础.
- 于江天苏金任婷婷刘新平
- 关键词：盘状结构域受体2EGFP磷酰化
- NAMPT真核表达载体构建及其对肝癌细胞增殖的影响被引量：1
- 2016年
- 目的:为探索烟酰胺磷酸核糖基转移酶(NAMPT)对肝癌细胞增殖的影响,构建pc DNA3.1(+)-NAMPT真核表达载体。方法:以正常肝细胞的c DNA为模板,通过PCR扩增得到NAMPT全长序列,经酶切、连接、转化等步骤构建真核表达载体。重组质粒经酶切鉴定及测序验证后,用脂质体转染法转染肝癌细胞MHCC-97H和正常肝细胞HL-7702,免疫印迹检测NAMPT蛋白表达情况;WST实验检测过表达NAMPT后对MHCC-97H和HL-7702增殖的影响。结果:真核表达载体pc DNA3.1(+)-NAMPT构建成功,转染HL-7702和MHCC-97H细胞后,NAMPT蛋白表达水平较空白组分别升高了83%和180%;过表达NAMPT可促进细胞增殖,而抑制NAMPT活性后,细胞增殖被抑制(P<0.001)。结论:成功构建了真核表达载体pc DNA3.1(+)-NAMPT,并发现NAMPT表达水平与细胞增殖密切相关,为进一步探索NAMPT表达在肝癌细胞增殖的分子作用机制和筛选新的肿瘤药物靶点奠定了基础。
- 王姣姣朱剑军张卉任婷婷金明朋邢金良吴有盛
- 关键词：细胞增殖
- 线粒体靶向小清蛋白表达载体构建及其对肝癌细胞线粒体钙稳态的影响
- 2016年
- 目的构建线粒体靶向小清蛋白(PVALB)表达载体,探讨线粒体靶向PVALB在肝癌细胞(MHCC97H)中的表达及对线粒体内钙稳态的影响。方法以骨骼肌细胞的c DNA为模板,通过PCR法扩增得到PVALB,经酶切后与MTS、pc DNA3.1(+)载体连接;重组质粒经酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染法转染肝癌细胞MHCC97H,用激光共聚焦显微镜检测PVALB定位及转染后MHCC97H线粒体中钙离子浓度。结果 pc DNA3.1(+)-MTS-PVALB经酶切、测序鉴定完全正确,真核表达载体构建成功;表达的MTS-PVALB定位于线粒体;MTS-PVALB可下调线粒体内钙离子浓度。结论成功构建pc DNA3.1(+)-MTS-PVALB线粒体靶向真核表达载体,MTSPVALB定位于MHCC97H线粒体并调节线粒体钙稳态。
- 张卉王姣姣任婷婷金明朋朱剑军张洪新吴有盛
- 关键词：肝肿瘤小清蛋白线粒体钙稳态
- 医学本科生基础实验教学中创新能力的培养被引量：3
- 2015年
- 目的使医学专业本科生掌握医学基础实验的基本技术,全面提高医学本科生的综合素质。方法本文以高等医学院校生物化学与分子生物学实验教学的具体实施为内客,从课程安排、授课方式,以及效果评价等多方面思考与探索如何培养学生良好的创新能力、科学思维方式和科学探索能力。结果创新性实验教学这种"探究式"的人才培养模式由以课本、课堂和教师为中心,向以学习、学生和理论与实践相结合为中心的培养模式转变。结论创新能力的培养是一个循序渐进的过程,我们需要不断地总结和完善教学方法,提高教学质量。
- 任婷婷张璟赵晶药立波邢金良
- 关键词：医学教学实验教学
