邢金良
- 作品数：54 被引量：175H指数：8
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划中国高等教育学会医学教育专业委员会医学教育研究立项课题更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 肝癌相关抗原HAb18G的结构与功能
- ＜正＞HAb18G是特异性抗人肝癌单克隆抗体HAb18结合的抗原蛋白,亲和层析纯化获得该抗原后,蛋白电泳分析表明HAb18G抗原内部具有二硫键结构,与克隆获得的该蛋白基因序列分析结果相符.酶谱法分析HAb18G的酶诱导功...
- 陈志南邢金良李郁郭晓楠
- 文献传递
- 肝癌相关抗原HAb18G结构功能的研究及其肽类拮抗剂的研制
- ＜正＞HAb18G是特异性抗人肝癌单克隆抗体HAb18结合的抗原蛋白。1997年,我们实验室用从人肝癌 cDNA文库中筛选获得了其全长cDNA序列。结构分析表明:该分子为单次跨膜糖蛋白,属免疫超家族成员之一。其基因共编码...
- 陈志南邢金良米力李郁姚西英
- 文献传递
- 外源基因在大肠杆菌中表达效率的影响因素被引量：16
- 2004年
- 人们运用基因工程技术已在大肠杆菌中成功地表达了许多重要的生物活性蛋白基因。但不同外源蛋白基因在大肠杆菌中的表达效率差异很大。本文综述了影响外源基因表达效率的一些常见因素,特别是对影响酬译起始的因素给予了更多的关注,同时总结了一些提高外源基因在大肠杆菌中表达效率的行之有效的方法。
- 陈冠军邢金良商澎陈志南
- 关键词：大肠杆菌翻译起始
- 抗人肝癌单克隆抗体嵌合Fab在巴氏毕赤酵母中的高效分泌表达被引量：2
- 2005年
- 目的:通过分步整合,用巴氏毕赤酵母表达抗人肝癌单克隆抗体(mAb)HAb18的嵌合Fab(cFab)片段。方法:将抗人肝癌mAbcFab/HAb18基因的原核表达载体pET32a/cFab中的CL和Fd段基因,分别亚克隆到酵母表达载体pPIC9K和pPICZαA中,构建重组质粒pPIC9K/CL和pPICZαA/Fd并测序鉴定。将重组质粒pPIC9K/CL和pPICZαA/Fd分步整合到酵母菌GS115的染色体上,经G418和Zeocin筛选高拷贝的转化子及鉴定Mut表型后,用含5mL/L甲醇的培养基诱导表达。结果:成功地表达抗人肝癌mAbHAb18的cFab,表达水平为26mg/L。Westernblot鉴定证实,表达产物具有良好的与HAb18结合的活性和特异性。结论:cFab/HAb18在巴氏毕赤酵母获得表达,为对其进一步大规模的生产和临床应用奠定了基础。
- 董红霖邢金良安家泽杨向民姚西英窦科峰陈志南
- 关键词：肝癌单克隆抗体毕赤酵母分泌表达
- 医学本科生细胞生物学双语教学调查评价被引量：3
- 2005年
- 目的总结对医学本科生开展细胞生物学双语教学的经验和方法.方法问卷调查及分类分析.结果①本科生公共英语水平均达到了接受双语教学的基本条件,专业英语水平表现出不均衡性,英语听力薄弱是多数学员存在的共同问题.②学员对教员的素质要求很高,期望教员具有丰富的专业知识和流利的口语.对课时比例、教材等具体教学手段,不同学员要求不同.③双语教学的教学效果基本上是理想的,但仍有许多地方需改进;双语教学成功与否关键在于教师备课及学员预习.结论必须大力提高教员素质与教学经验,因地制宜确定教学内容,强化学员对专业词汇和背景知识的学习.
- 张思河陈志南邢金良蒋建利
- 关键词：双语教学细胞生物学医学本科生
- 不同免疫方案制备抗HAb18G/CD147胞外区多克隆抗血清的比较被引量：5
- 2005年
- 目的: 制备针对肝癌相关抗原HAb18G/CD147胞外区不同表位的抗血清, 比较不同免疫方案的免疫效果。方法: 以原核表达的GST -HAb18GEF融合蛋白、重组真核表达质粒pcDNA3 /HAb18G及HCC细胞为免疫原, 分别采用蛋白常规免疫、DNA肌肉免疫及pcDNA3 /HAb18G -HCCbooster(DNA -cellbooster)免疫接种BALB/c小鼠。采用间接ELISA和细胞ELISA, 同时测定免疫血清中抗变性和天然HAb18GEFIgG抗体的滴度和Ig亚类。用Westernblot检测各免疫方案制备的抗血清, 与变性HAb18GEF抗原结合的特异性。用免疫荧光法验证DNA- cellbooster免疫接种法制备的抗血清, 与细胞膜上天然HAb18G抗原的结合特异性。结果:以GST- HAb18GEF常规免疫后, 可诱导高滴度的IgG1抗体产生, 但针对的多为HAb18GEF的变性或线性表位; 以pcD -NA3 /HAb18G肌肉免疫后, 可诱导针对其天然表位的IgG2a抗体产生, 但滴度较低; 以DNA -cellbooster免疫后, 可诱导中等滴度、针对其天然表位的IgG2a和IgG1抗体产生。结论: 不同免疫方案可诱导针对HAb18GEF不同表位、不同滴度的多克隆抗血清, 为淘筛针对其不同表位的多样性抗体奠定了基础。
- 张思河杨向民邢金良陈志南
- 关键词：HAB18G/CD147免疫方案BOOSTER抗体滴度
- 抗人肝癌单克隆抗体嵌合轻链在巴氏毕赤酵母的高效分泌表达
- 2005年
- 目的: 通过整合,用巴氏毕赤酵母表达抗人肝癌mAbHAb18的cFab的嵌合轻链.方法: 将抗人肝癌mAbcFab/HAb18原核表达载体pET32a/cFab中的cL亚克隆到酵母表达载体pPIC9K,构建成重组质粒pPIC9K/cL测序鉴定.重组质粒pPIC9K/cL整合到酵母菌GS115的染色体上,经G418筛选得到高拷贝转化子及Mut表型鉴定后,用含5mL/L甲醇的培养基诱导表达.结果: 该系统成功表达了抗人肝癌mAbHAb18cFab的嵌合轻链,表达水平为22mg/L;WesternBlotting证实,表达产物具有良好的HAb18GE结合活性和特异性.结论: 嵌合轻链/HAb18在巴氏毕赤酵母获得成功表达,为高效分泌表达cFab抗体奠定了基础.
- 董红霖邢金良杨向民姚西英李郁窦科峰陈志南
- 关键词：肝肿瘤毕赤酵母分泌表达
- 人-鼠杂合Fab噬菌体抗体库的建立被引量：2
- 2004年
- 目的 建立人 鼠杂合Fab噬菌体抗体库 ,经过扩增和筛选 ,得到目的抗体。方法 自肝癌患者外周血单个核细胞中扩增全套人抗体Fd片段基因 ,分别克隆入含嵌合轻链的展示载体pComb3和pComb3X中 ,建立人 鼠杂合Fab噬菌体抗体库。然后利用肝癌抗原HAb18GE进行筛选 ,并对抗体库的扩增和筛选条件进行优化。结果 pComb3展示抗体库在 37℃进行扩增挽救时存在明显的目的片段重组丢失现象。pComb3X展示抗体库在不同的扩增条件下均未发现明显的重组丢失现象。经过 4轮筛选后 ,噬菌体展示抗体ELISA显示 ,鉴定克隆与原核表达GST及无关蛋白存在明显交叉反应 ,而改用诱导表达细菌裂解上清进行ELISA鉴定可以抑制交叉反应的发生。结论 通过建立杂合Fab抗体库 ,并对扩增和筛选条件进行优化 。
- 包国强马庆久邢金良杨向民陈志南
- 关键词：抗体库人源性肝肿瘤
- 利用万维网获取相应的抗体信息资源
- 2003年
- 利用各种搜索引擎从万维网上收集抗体相关的信息资源 ,并加以分析整理 。
- 邢金良宋斐陈志南
- 关键词：万维网抗体网络信息资源搜索引擎基因工程抗体
- 肝癌相关抗原HAb18G真核表达载体的构建及表达被引量：9
- 2000年
- 目的在真核细胞中高效表达肝癌相关抗原HAb18G。方法构建含有肝癌相关抗原HAb18G基因的真核表达载体 ,并经限制性酶切及部分序列分析证明插入是否正确。用阳离子脂质体介导转染COS 7细胞和CHO细胞 ,并分别进行瞬时及稳定表达 ;通过间接免疫荧光染色和流式细胞仪检测蛋白的表达情况。结果成功地构建了真核表达载体 pcDNA 3/HAb18G ,并经限制性酶切及部分序列分析证明基因插入正确。间接免疫荧光染色证实 ,HAb18G高效表达于转染细胞的胞膜上。流式细胞仪分析显示 ,COS 7细胞的转染率约为7.5 % ,平均荧光强度为7.36 ,从CHO细胞获得的单个阳性克隆的平均荧光强度为2.17。结论以上结果为大量获得表达的HAb18G蛋白分子用于其生物学功能的研究奠定了基础。
- 邢金良陈志南黄宝成王文勇王贤辉
- 关键词：肝癌膜蛋白基因转染肝癌相关抗原
