姚西英
- 作品数：26 被引量：86H指数：5
- 供职机构：第四军医大学基础医学部细胞工程研究中心更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 肝癌相关抗原HAb18G胞外区片段的原核表达与免疫学活性分析被引量：7
- 2003年
- 目的 :利用大肠杆菌高效表达肝癌相关抗原HAb18G胞外区片段 ,并分析其与相应抗体的结合活性 ,进而明确表达产物用于筛选基因工程抗体的可行性 .方法 :用PCR技术扩增出HAb18G胞外区基因片段 ,克隆入原核表达载体pGEX 4T 3中 ,筛选及鉴定阳性重组子 ,IPTGv诱导表达后对表达产物进行纯化及复性等处理 ,同时利用SDS PAGE ,Western Blot以及ELISA等方法检测蛋白表达情况及其免疫学特性 .结果 :成功构建了肝癌相关抗原HAb18G胞外区片段的原核表达载体 pGEX 4T 3/HAb18GE ,并在大肠杆菌中成功实现高效融合表达 .表达蛋白Mr 4 6 0 0 0 ,表达量约占菌体总蛋白量的 4 3% ,表达产物主要以包涵体形式为主 .另外 ,表达蛋白在变性和非变性的条件下均可以与HAb18GmAb特异性结合 .结论 :原核融合表达的HAb18G胞外区片段可以替代天然的HAb18G蛋白 ,以用做抗原来筛选新型的基因工程抗体 .
- 邢金良王永庆杨向民姚西英陈志南
- 关键词：抗原胞外区
- 抗人肝癌单克隆抗体嵌合轻链在巴氏毕赤酵母的高效分泌表达
- 2005年
- 目的: 通过整合,用巴氏毕赤酵母表达抗人肝癌mAbHAb18的cFab的嵌合轻链.方法: 将抗人肝癌mAbcFab/HAb18原核表达载体pET32a/cFab中的cL亚克隆到酵母表达载体pPIC9K,构建成重组质粒pPIC9K/cL测序鉴定.重组质粒pPIC9K/cL整合到酵母菌GS115的染色体上,经G418筛选得到高拷贝转化子及Mut表型鉴定后,用含5mL/L甲醇的培养基诱导表达.结果: 该系统成功表达了抗人肝癌mAbHAb18cFab的嵌合轻链,表达水平为22mg/L;WesternBlotting证实,表达产物具有良好的HAb18GE结合活性和特异性.结论: 嵌合轻链/HAb18在巴氏毕赤酵母获得成功表达,为高效分泌表达cFab抗体奠定了基础.
- 董红霖邢金良杨向民姚西英李郁窦科峰陈志南
- 关键词：肝肿瘤毕赤酵母分泌表达
- 稳定表达肝癌相关抗原HAb18G/CD147成纤维细胞株的建立及其意义被引量：3
- 2004年
- 目的 :探讨将HAb1 8G全长cDNA转染成纤维细胞NIH/ 3T3的可行性及其意义 .方法 :将含有肝癌相关抗原HAb1 8G全长cDNA的真核表达载体 pcDNA3.0 /HAb1 8G利用脂质体介导法转染小鼠成纤维细胞NIH/ 3T3,G4 1 8筛选建立稳定表达阳性克隆细胞株t3T3;利用流式细胞仪、间接免疫荧光染色方法鉴定目的蛋白转染情况 ;RT PCR琼脂糖电泳、明胶酶谱分别从mRNA和蛋白水平检测转染前后HAb1 8G刺激 3T3细胞分泌基质金属蛋白酶 (MMP 2、MMP 9)的情况 .结果 :利用脂质体介导法将HAb1 8G全长cDNA转染入成纤维细胞NIH/ 3T3,G4 1 8筛选 ,流式细胞仪分析、间接免疫荧光染色证实成功建立了稳定表达HAb1 8G的阳性克隆株 ;RT PCR琼脂糖电泳证实t3T3细胞MMP 2、MMP 9mRNA转录水平较未转染前增多 ;明胶酶谱表明t3T3分泌MMPs能力较未转染前增强 .结论 :HAb1 8G全长cDNA可以稳定转染成纤维细胞 ,并能从核酸和蛋白水平诱导基质金属蛋白酶高表达 。
- 黄勇蒋建利周筠姚西英窦科峰陈志南
- 关键词：转染成纤维细胞金属蛋白酶类
- 抗人大肠癌抗体CAb-1 Fab基因的克隆、表达和鉴定被引量：1
- 2004年
- 目的 :从杂交瘤细胞中克隆mAbCAb 1所编码Fab抗体基因 ,并在大肠杆菌中进行表达和鉴定 .方法 :采用RT PCR方法 ,扩增mAbCAb 1的Fd片段和全长κ链基因 ,分别克隆到T载体后进行序列测定和分析 .依次亚克隆两个基因到噬粒 pComb3中 ,去除该载体上的 gIII基因 ,构建成分泌表达载体Fd L/pComb3.转化XL1 BlueE .coli菌株 ,IPTG诱导表达 .采用ELISA和免疫荧光法检测表达产物的特异性 .结果 :克隆了大肠癌mAbCAb 1的Fab基因 ,并在E .coli中获得表达 .产物CAb 1Fab具有与大肠癌细胞株SW4 80特异结合的活性 .结论 :成功构建了在E .coli中表达抗人大肠癌mAbCAb 1的小分子单价Fab抗体的载体 .
- 杨向民邢金良姚西英张思河陈志南
- 关键词：结直肠肿瘤FAB抗体克隆
- 肝癌相关抗原HAb18G结构功能的研究及其肽类拮抗剂的研制
- ＜正＞HAb18G是特异性抗人肝癌单克隆抗体HAb18结合的抗原蛋白。1997年,我们实验室用从人肝癌 cDNA文库中筛选获得了其全长cDNA序列。结构分析表明:该分子为单次跨膜糖蛋白,属免疫超家族成员之一。其基因共编码...
- 陈志南邢金良米力李郁姚西英
- 文献传递
- 扩张柱床吸附层析与固定柱床层析纯化单克隆抗体的比较被引量：1
- 2003年
- 为满足Ⅰ类新药二期临床的药品需求量 ,单抗生产由实验室规模扩大到中试规模 ,在目标产品的下游纯化工艺中 ,采用扩张柱床吸附技术代替一期临床实验室规模方法中的澄清、浓缩、和最初的疏水层析 ,其后的纯化步骤保持不变。由于采用新的纯化路线 ,使得制备周期缩短 2 3,处理能力由 1 0 0ml小鼠腹水扩大至 1 8～ 5 0L杂交瘤细胞培养液 ,回收率提高2 0 %以上 ,并很容易根据需要线性放大规模 ,为单抗的的产业化提供了更为简便和高效的下游纯化模式。
- 余晓玲米力姚西英陈志南
- 关键词：纯化单克隆抗体中试规模
- 抗人肝癌单克隆抗体嵌合Fab在巴氏毕赤酵母中的高效分泌表达被引量：2
- 2005年
- 目的:通过分步整合,用巴氏毕赤酵母表达抗人肝癌单克隆抗体(mAb)HAb18的嵌合Fab(cFab)片段。方法:将抗人肝癌mAbcFab/HAb18基因的原核表达载体pET32a/cFab中的CL和Fd段基因,分别亚克隆到酵母表达载体pPIC9K和pPICZαA中,构建重组质粒pPIC9K/CL和pPICZαA/Fd并测序鉴定。将重组质粒pPIC9K/CL和pPICZαA/Fd分步整合到酵母菌GS115的染色体上,经G418和Zeocin筛选高拷贝的转化子及鉴定Mut表型后,用含5mL/L甲醇的培养基诱导表达。结果:成功地表达抗人肝癌mAbHAb18的cFab,表达水平为26mg/L。Westernblot鉴定证实,表达产物具有良好的与HAb18结合的活性和特异性。结论:cFab/HAb18在巴氏毕赤酵母获得表达,为对其进一步大规模的生产和临床应用奠定了基础。
- 董红霖邢金良安家泽杨向民姚西英窦科峰陈志南
- 关键词：肝癌单克隆抗体毕赤酵母分泌表达
- Ca^(2+)信号对肝癌细胞基质金属蛋白酶分泌与活化的影响被引量：11
- 2004年
- 目的 探讨Ca2 + 信号调节对肝癌细胞基质金属蛋白酶 (MMPs)分泌与活化的影响。方法 在体外人SMMC 772 1肝癌细胞培养体系中 ,引入Ca2 + 及其激动剂和抑制剂。应用SDS 聚丙烯酰胺 (SDS PAGE)蛋白电泳和明胶酶谱电泳分析方法 ,观察肝癌细胞培养上清中MMPs的分泌与活化水平的变化。结果 人SMMC 772 1肝癌细胞MMP 2和MMP 9的分泌和活化随着培养体系中Ca2 + 浓度升高而升高 ,在 0 .8mmol/LCa2 + 浓度时 ,达稳定水平 ,其中以MMP 2的分泌和活化最明显 ,较 0mmol/LCa2 + 组升高 (10 9.71± 2 7.93) % (P <0 .0 0 1)。在无血清培养条件下 ,肝癌细胞分泌蛋白经电泳鉴定结果提示主要为MMPs。细胞内Ca2 + 库释放诱导剂毒胡萝卜内酯 (Tg ,4 μmol/L)可明显诱导MMP 2和MMP 9的分泌和活化 ,MMPs的分泌和活化总量较对照组升高 (5 8.6 3± 31.0 4 ) % (P <0 .0 5 ) ;而抑制剂S 亚硝基 乙酰青霉胺 (SNAP ,2 0 0 μmol/L)则抑制了Tg的诱导作用。 结论 肝癌细胞内Ca2 +
- 蒋建利姚西英周筠黄勇陈志南
- 关键词：肝癌细胞细胞内CA^2+基质金属蛋白酶SMMC-7721电泳分析SDS-PAGE
- HAb18G/CD147刺激人肝癌细胞分泌基质金属蛋白酶的机制探讨被引量：10
- 2004年
- 目的 探讨HAb18G/CD14 7诱导肝癌细胞基质金属蛋白酶 (MMP)分泌和活化的机制。方法 应用明胶酶谱分析方法观察HAb18G/CD14 7分子及其细胞内、外片段高表达对人SMMC 772 1肝癌细胞分泌MMP(MMP 2和MMP 9)及其活化的影响 ,以及细胞内Ca2 +信号调控在此过程的作用。结果 HAb18G/CD14 7分子的高表达明显诱导MMP 2和MMP 9的分泌和活化 ,分泌总量升高 ( 30 .4 5± 3.4 1) % (P <0 .0 1) ,而细胞内、外各片段的表达均不能有效刺激MMP的分泌与活化。细胞内Ca2 +库释放诱导剂Thapsigargin(Tg)在未转染 772 1细胞可有效诱导MMP 2和MMP 9的分泌与活化 ,较对照组升高 ( 5 8.6 3± 31.0 4 ) % (P <0 .0 5 ) ,其诱导作用可受到细胞内Ca2 +调节抑制剂S 亚硝基 乙酰青霉胺 (S nitroso N acetylpenicillamine,SNAP)的明显抑制 ,而HAb18G/CD14 7的高表达则抑制了以上细胞内Ca2 +信号通路对MMP分泌和活化的调节作用 ,使转染的T772 1细胞MMP的分泌与活化始终处于高水平稳定状态。结论 全长的HAb18G/CD14 7分子可通过抑制细胞内Ca2 +信号调控通路诱导肝癌细胞稳定高表达和活化MMP。
- 蒋建利姚西英周筠黄勇张阳陈志南
- 关键词：SMMC-7721细胞基质金属蛋白酶类HAB18G/CD147钙离子通道
- SARS-CoV刺突蛋白受体结合区的表达及高潜在中和性人源抗体的制备被引量：4
- 2005年
- 为表达SARS-CoV刺突蛋白S(Spike)受体结合区(RBD)并从中筛选高潜在中和性人源抗体,我们用原核表达并纯化的SARS-CoVSRBD进行抗体库的筛选。从多个曾患SARS的健康人血中获得淋巴细胞,PCR扩增全部抗体基因,插入Pcomb3x载体中,构建抗SARS病毒人源噬菌体抗体库。利用噬菌体表面呈现技术,从中筛选结合SARS-CoVSRBD的人源抗体并用ELISA及Westernblot鉴定阳性克隆,竞争ELISA检测人源抗体阻断SARS-CoVSRBD与其受体ACE2的结合情况。结果为构建了库容量6.2×107的免疫Fab噬菌体抗体库,重组率为75%,从中筛选获得9株特异抗SARS-CoVSRBD的人源Fab抗体,ELISA及Westernblot检测均为阳性。其中有一株能阻断SARS-CoVSRBD与其受体ACE2的结合。本实验结果表明:人源抗SARS-CoVSRBD基因工程抗体的获得,一方面将对SARS疾病的特异性预防,治疗和诊断提供新的途径,同时也提示SARS-CoV亚单位疫苗可以用于SARS疾病的预防。
- 李郁姚西英杨勇陈江浩张思河宋斐包国强杨向民陈志南
- 关键词：刺突蛋白RBD噬菌体抗体FAB
