黄巍
- 作品数：12 被引量：10H指数：2
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金卫生部科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学经济管理更多>>
- 基于PCR衍生技术和寡核苷酸芯片的SNPs检测方法的改良
- [目的]本课题从PCR衍生技术和寡核苷酸芯片技术两条途径入手,克服传统方法的缺点和不足,为SNPs的检测提供新的方法。对传统的检测点突变的3’末端引物错配法(sequence specific primer-PCR,SS...
- 陈慧黄巍杨渝珍
- 文献传递
- 重组人TACE的解整合素域对人肺腺癌A549体外增殖、粘附和侵袭的抑制作用
- 2007年
- 为了解人TACE的解整合素域对肿瘤细胞粘附和侵袭的影响以及其独立于其他结构域发挥作用的能力,从单核细胞系THP1中提取RNA,RT-PCR扩增出TACE全长基因,构建了pMD18T-TACE载体。对pMD18T-TACE质粒进行PCR,分别扩增T300(300bp,编码解整合素域)、T800(800bp,编码酶催化域)及T1300(1300bp,编码胞外域)三个片段,将其分别亚克隆至表达载体pET28a(+)。把质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),表达产物均以不溶性包涵体形式存在。经过溶解包涵体、BBSTNTA树脂柱亲和层析并透析复性,获得高纯度的三种活性蛋白。MTT法、细胞粘附实验、Transwell小室侵袭实验分别显示TACE解整合素域、胞外域蛋白均能明显抑制A549细胞的增殖,且以剂量依赖性的方式抑制A549细胞与纤维粘连蛋白的粘附,并能抑制Transwell小室中A549细胞对Matrigel模拟的天然基底膜的侵袭,而酶催化域蛋白则无相应的抑制能力。表明重组TACE解整合素域蛋白可独立抑制肿瘤细胞的增殖、粘附和侵袭,为深入研究该区域的作用及TACE在肿瘤发病中的机制提供了新的认识。
- 闫媛李小欧章杰黄巍李凌波杨渝珍
- 关键词：TACE亚克隆
- 板蓝根对脂多糖诱导P38丝裂原活化蛋白激酶的影响被引量：6
- 2004年
- 目的 :探讨板蓝根抗内毒素活性部位F0 2 2 对内毒素介导的细胞内信号传递的影响。方法 :取BALB/C小鼠腹腔内单核细胞 ,实验组分别用 1.0 0 0 ,0 .5 0 0 ,0 .2 5 0和 0 .12 5mg·mL 1 板蓝根F0 2 2 部位样品液 +脂多糖 (LPS)液 (10 0μg·mL 1 ) ,阳性组直接用LPS液 (10 0 μg·mL 1 ) ,阴性组用 1%F0 2 2 液处理单核细胞 ,检测细胞内P3 8丝裂原活化蛋白激酶(P3 8MAPK)活性。结果 :实验组单核细胞内P3 8MAPK浓度较阴性组稍高 ,但比阳性组低 ,抑制率随板蓝根F0 2 2 部位浓度降低而下降。抑制率分别为 95 .66%,64 .80 %,3 9.2 8%和 2 0 .67%。结论 :板蓝根对脂多糖诱导的P3 8单核细胞内丝裂原活化蛋白激酶活性有抑制作用 ,抑制强度呈剂量依赖性。
- 刘云海黄巍汤杰黄明生谢委
- 关键词：单核细胞脂多糖P38丝裂原活化蛋白激酶板蓝根P38MAPK
- 肿瘤坏死因子前体转换酶前肽结构域对TACE活性调节作用被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨肿瘤坏死因子前体转换酶(TACE)的前肽结构域在TACE成熟过程中所起的作用,为人工干预炎症过程提供依据和手段。方法:以pIRES2-EGFP质粒为载体,利用DNA重组技术分别构造含信号肽结构域+前肽结构域、全长结构域及缺失前肽结构域的真核表达重组体,根据其碱基数目分别命名为pIRES2-EGFP/T648、pIRES2-EGFP/T2472、pIRES2-EGFP/T57-T1824;真核转染U937细胞;LPS刺激转染细胞后,用ELISA法及流式细胞技术检测TNF-α。结果:pIRES2-EGFP/T648的真核表达能显著抑制TACE的活性,减少sTNF-α分泌,抑制率达61.09%;pIRES2-EGFP/T57-T1824的真核表达对sTNF-α的分泌无影响;pIRES2-EGFP/T2472的真核表达能显著增加sTNF-α分泌。结论:前肽结构域在TACE的成熟过程中起了双重作用,TACE抑制剂的研制和开发为抗炎药物的设计和改造提供了新的依据和方法。
- 李小鸥阎媛黄巍杨渝珍王宏伟
- 重组TACE前肽对自身TACE活性的抑制作用被引量：1
- 2008年
- 目的以脂多糖（LPS）刺激人单核细胞型淋巴瘤细胞株THP-1为模型，观察重组肿瘤坏死因子α转换酶（TACE）前肽结构域对催化TACE结构域的自身抑制作用，为人工干预炎症过程提供依据和手段。方法首先利用DNA重组技术分别构造含前肽结构域和催化结构域的重组载体：用PCR方法扩增出TACE的胞外结构域（T1300）和前肽结构域（T591），并克隆至载体pET-28a（＋）中，转化至大肠杆菌BL21，经IPTG诱导表达出带有His-tag的目的蛋白，两者均为包涵体，变性复活后经Ni^2＋ -NTA亲和层析柱对表达的重组蛋白进行纯化。对纯化后的蛋白进行Western blot分析。LPS分时相刺激THP-1细胞后，用细胞学技术观察纯化的T591在蛋白质水平上对TACE的表达和活性的影响。结果TACE重组前肽蛋白能显著抑制TACE的活性，减少分泌型TNF-α（sTNF-α）分泌，抑制率达57％。结论TACE重组前肽抑制了TACE的活性，降低了sTNF-α的分泌，为抗炎药物的设计和改造提供了新的依据和方法。
- 李小鸥阎媛黄巍杨渝珍王宏伟
- 关键词：肿瘤坏死因子Α抑制剂
- 内皮素对恶性黑素瘤A375细胞TGF-β1及磷酸化Smad3蛋白表达的调节
- 目的:研究内皮素家族(Endothlins,ETs)对恶性黑素瘤(MM)A375细胞转化生长因子betal(TGF-β1)表达的差异性调节及对TGF-β信号通路蛋白Smad3磷酸化水平的影响。方法:应用ELISA、RT-...
- 涂亚庭李艳秋黄长征黄巍方险峰杨凌云陶娟林能兴陈宏翔李延杨井
- 用重组TACE胞外功能域从噬菌体展示随机15肽库筛选TACE的抑制肽
- 肿瘤坏死因子转换酶(TACE)是加工裂解TNF-α前体的关键酶,参与了许多炎症的发生发展过程。为通过肽库筛选得到TACE的抑制肽,首先制备筛选靶分子,用RT-PCR从人外周血单核细胞中分别扩增出TACE的催化区(T800...
- 黄巍李凌波韩玲杨渝珍
- 关键词：噬菌体展示
- 文献传递
- 小鼠CXCR3胞外N末端的可溶性表达及其抗体制备被引量：2
- 2005年
- 目的克隆小鼠CXCR3基因,将其胞外N末端在大肠杆菌中进行可溶性表达并用于抗体制备。方法采用RT-PCR技术,从Balb/c小鼠脾细胞中扩增出编码CXCR3的全长序列,将胞外N末端亚克隆入DsbA融合表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达后进行分离纯化,然后免疫家兔制备多克隆抗体,并用趋化小室法检测抗体对IP-10趋化小鼠T细胞作用的影响。结果获得编码小鼠CXCR3的cDNA序列,其胞外N末端与DsbA融合后能在大肠杆菌中可溶性表达,表达量达40%,其抗体可显著抑制IP-10对小鼠T细胞的趋化作用。结论获得小鼠趋化因子受体CXCR3胞外N末端融合蛋白及其抗体,抗体具有在体外抑制T细胞趋化的作用。
- 黄巍杨渝珍游上游
- 关键词：DSBA可溶性表达抗体趋化作用
- 以重组TACE胞外功能域从噬菌体随机肽库中筛选TACE的抑制肽
- 2005年
- 肿瘤坏死因子转换酶 (TACE)是加工裂解TNF α前体的关键酶 ,参与了许多炎症的发生发展过程。为通过肽库筛选得到TACE的抑制肽 ,首先制备筛选靶分子 ,用RT PCR从人外周血单核细胞中分别扩增出TACE的催化区 (T80 0 )和整个胞外区 (T130 0 ) ,然后分别克隆至pET 2 8a和pET 2 8c中 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导表达出带有His tag的目的蛋白 ,两者均为包涵体 ,变性复性后过Ni2 + NTA亲和层析柱得到纯度达 90 %的重组蛋白。以纯化的重组T80 0和T130 0分别筛选噬菌体展示随机 15肽库 ,对筛选克隆进行ELISA检测、竞争抑制实验和序列分析。从两个独立的筛选过程中得到一个相同的阳性克隆序列“TRWLVYFSRPYLVAT” ,固相Fmoc法合成该短肽 ,观察其在LPS诱导人单核细胞产生sTNF α中的作用。结果表明 ,筛选到的短肽可显著抑制TACE的活性 ,减少TNF α的分泌 ,抑制率可达 6 0 3% ,为抗炎小分子药物的设计和改造提供线索和依据。
- 黄巍李凌波韩玲张慧杨渝珍
- 关键词：噬菌体展示
- 内皮素对恶性黑素瘤A375细胞TGF-β1及磷酸化Smad3蛋白表达的调节
- 目的:研究内皮素家族(Endothlins,ETs)对恶性黑素瘤(MM)A375细胞转化生长因子beta1 (TGF-β1)表达的差异性调节及对TGF-β信号通路蛋白Smad3磷酸化水平的影响。方法:应用ELISA、RT...
- 涂亚庭黄巍方险峰杨凌云陶娟林能兴陈宏翔李延杨井李艳秋黄长征
- 文献传递
