阎媛
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重组TACE前肽蛋白对小鼠内毒素血症抑制作用的实验研究被引量：1
- 2009年
- 目的建立小鼠内毒素血症模型,观察肿瘤坏死因子前体转换酶(TACE)前肽结构域对其催化结构域的自身抑制作用,为人工干预炎症过程提供依据和手段。方法首先利用DNA重组技术分别构建含前肽结构域和催化结构域的重组载体:用PCR方法扩增出TACE的胞外结构域(T1300)和前肽结构域(T591),并克隆至载体pET-28a(+)中,转化至大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达出带有His-tag的目的蛋白,两者均为包涵体,变性复活后经Ni2+-NTA亲和层析柱对表达的重组蛋白进行纯化。对纯化后的蛋白进行Western印迹分析。构建TACE信号肽+前肽结构域(T648)的真核表达质粒(pEGFP-N1/T648),将其瞬时转染HeLa细胞,通过观察绿色荧光蛋白的表达观察pEGFP-N1/T648转染后在细胞中分布情况。建立小鼠内毒素血症模型组,前肽重组蛋白治疗组和PBS对照组,通过流式细胞术检测小鼠腹腔巨噬细胞mTNF-α的表达,并取肝,肺,肾组织行HE染色,观察纯化的前肽蛋白对炎症的抑制作用。结果成功构建了pEGFP-N1/T648真核表达载体,在体外转染HeLa细胞,可见荧光主要分布在细胞膜上。流式细胞技术证明重组前肽蛋白可明显对抗LPS诱发的sTNF-α分泌增加,使小鼠腹腔巨噬细胞膜表面mTNF-α增加,常规病理切片HE染色显示该蛋白可降低LPS诱发的小鼠肝,肾,肺组织的炎症反应。结论TACE前肽重组蛋白降低了sTNF-α的分泌,对炎症有明显的抑制作用,为抗炎药物的设计和改造提供了新的依据和方法。
- 李小鸥阎媛周玉杨渝珍王宏伟
- 关键词：肿瘤坏死因子Α抑制剂
- 肿瘤坏死因子前体转换酶前肽结构域对TACE活性调节作用被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨肿瘤坏死因子前体转换酶(TACE)的前肽结构域在TACE成熟过程中所起的作用,为人工干预炎症过程提供依据和手段。方法:以pIRES2-EGFP质粒为载体,利用DNA重组技术分别构造含信号肽结构域+前肽结构域、全长结构域及缺失前肽结构域的真核表达重组体,根据其碱基数目分别命名为pIRES2-EGFP/T648、pIRES2-EGFP/T2472、pIRES2-EGFP/T57-T1824;真核转染U937细胞;LPS刺激转染细胞后,用ELISA法及流式细胞技术检测TNF-α。结果:pIRES2-EGFP/T648的真核表达能显著抑制TACE的活性,减少sTNF-α分泌,抑制率达61.09%;pIRES2-EGFP/T57-T1824的真核表达对sTNF-α的分泌无影响;pIRES2-EGFP/T2472的真核表达能显著增加sTNF-α分泌。结论:前肽结构域在TACE的成熟过程中起了双重作用,TACE抑制剂的研制和开发为抗炎药物的设计和改造提供了新的依据和方法。
- 李小鸥阎媛黄巍杨渝珍王宏伟
- 重组TACE前肽对自身TACE活性的抑制作用被引量：1
- 2008年
- 目的以脂多糖（LPS）刺激人单核细胞型淋巴瘤细胞株THP-1为模型，观察重组肿瘤坏死因子α转换酶（TACE）前肽结构域对催化TACE结构域的自身抑制作用，为人工干预炎症过程提供依据和手段。方法首先利用DNA重组技术分别构造含前肽结构域和催化结构域的重组载体：用PCR方法扩增出TACE的胞外结构域（T1300）和前肽结构域（T591），并克隆至载体pET-28a（＋）中，转化至大肠杆菌BL21，经IPTG诱导表达出带有His-tag的目的蛋白，两者均为包涵体，变性复活后经Ni^2＋ -NTA亲和层析柱对表达的重组蛋白进行纯化。对纯化后的蛋白进行Western blot分析。LPS分时相刺激THP-1细胞后，用细胞学技术观察纯化的T591在蛋白质水平上对TACE的表达和活性的影响。结果TACE重组前肽蛋白能显著抑制TACE的活性，减少分泌型TNF-α（sTNF-α）分泌，抑制率达57％。结论TACE重组前肽抑制了TACE的活性，降低了sTNF-α的分泌，为抗炎药物的设计和改造提供了新的依据和方法。
- 李小鸥阎媛黄巍杨渝珍王宏伟
- 关键词：肿瘤坏死因子Α抑制剂
