李凌波
- 作品数：6 被引量：5H指数：2
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组人TACE的解整合素域对人肺腺癌A549体外增殖、粘附和侵袭的抑制作用
- 2007年
- 为了解人TACE的解整合素域对肿瘤细胞粘附和侵袭的影响以及其独立于其他结构域发挥作用的能力,从单核细胞系THP1中提取RNA,RT-PCR扩增出TACE全长基因,构建了pMD18T-TACE载体。对pMD18T-TACE质粒进行PCR,分别扩增T300(300bp,编码解整合素域)、T800(800bp,编码酶催化域)及T1300(1300bp,编码胞外域)三个片段,将其分别亚克隆至表达载体pET28a(+)。把质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),表达产物均以不溶性包涵体形式存在。经过溶解包涵体、BBSTNTA树脂柱亲和层析并透析复性,获得高纯度的三种活性蛋白。MTT法、细胞粘附实验、Transwell小室侵袭实验分别显示TACE解整合素域、胞外域蛋白均能明显抑制A549细胞的增殖,且以剂量依赖性的方式抑制A549细胞与纤维粘连蛋白的粘附,并能抑制Transwell小室中A549细胞对Matrigel模拟的天然基底膜的侵袭,而酶催化域蛋白则无相应的抑制能力。表明重组TACE解整合素域蛋白可独立抑制肿瘤细胞的增殖、粘附和侵袭,为深入研究该区域的作用及TACE在肿瘤发病中的机制提供了新的认识。
- 闫媛李小欧章杰黄巍李凌波杨渝珍
- 关键词：TACE亚克隆
- 慢性心房颤动患者心房肌浆网钙离子ATP酶及罗纳丹受体mRNA表达变化的研究被引量：3
- 2002年
- 研究慢性心房颤动 (简称房颤 )患者Ca2 + 调节蛋白 肌浆网Ca2 + ATP酶及罗纳丹受体 (RyR)mRNA表达的改变 ,探讨房颤时心房肌细胞钙超载的原因及其在房颤发生和维持中的作用。选择 2 0例风湿性心脏病 (以二尖瓣狭窄为主 )接受瓣膜置换术者 ,于术中插管前取右心耳组织约 10 0mg ,采用逆转录 聚合酶链式反应技术 ,测定肌浆网Ca2 + ATP酶及RyR2 mRNA的变化。结果 :房颤者肌浆网Ca2 + ATP酶及RyR2 mRNA水平较窦性心律者明显下调 (分别为 0 .85 4± 0 .2 0 7vs 1.832± 0 .379,P <0 .0 0 1;1.4 12± 0 .319vs 2 .2 5 0± 0 .4 6 8,P <0 .0 5 ) ,且与临床血流动力学参数及性别、年龄无显著相关性。结论 :房颤患者肌浆网Ca2 + ATP酶及RyR2 mRNA表达水平下调 。
- 王祥毛奕尹薇曾秋棠邓中农董念国冯义柏李凌波韩玲
- 关键词：慢性心房颤动心房肌浆网ATP酶
- 用重组TACE胞外功能域从噬菌体展示随机15肽库筛选TACE的抑制肽
- 肿瘤坏死因子转换酶(TACE)是加工裂解TNF-α前体的关键酶,参与了许多炎症的发生发展过程。为通过肽库筛选得到TACE的抑制肽,首先制备筛选靶分子,用RT-PCR从人外周血单核细胞中分别扩增出TACE的催化区(T800...
- 黄巍李凌波韩玲杨渝珍
- 关键词：噬菌体展示
- 文献传递
- LPS刺激对TACE基因表达和对TNF-α前体加工的影响被引量：2
- 2002年
- 目的 :研究LPS刺激对肿瘤坏死因子转换酶 (TACE)基因转录和表达的影响及其与TNF α前体加工的关系。方法 :采用Dot blotting、Dot ELISA、间接免疫荧光和FACS等方法分别检测HL 6 0细胞在LPS刺激的不同时间段TACE、TNF α基因转录表达和膜分子分布情况。结果 :①HL 6 0细胞构成性高表达有活性TACE ,主要分布于细胞膜和核周边。②LPS刺激TNF α基因转录表达 ,但由于TACE的作用 ,膜TNF α(TM TNF α)下降 ,而分泌型TNF(sTNF α)增加 ;TACE的反义寡核苷酸 (ODN)显著抑制TNF α这种前体转换作用。③LPS同样刺激TACE基因表达增加 ,而且TACE酶解作用增强 ,但其蛋白表达和膜分子分布反而下降 ,推测TACE在发挥其催化膜蛋白作用后 ,其分子结构形式发生改变。结论 :炎症时分泌型TNF α增加不仅是该细胞因子基因表达增高所致 ,更受到TACE基因表达水平和活性状态的约束。
- 李凌波朱孔黎杨渝珍龚非力
- 关键词：基因表达前体加工LPSTNF-ΑTACE
- 以重组TACE胞外功能域从噬菌体随机肽库中筛选TACE的抑制肽
- 2005年
- 肿瘤坏死因子转换酶 (TACE)是加工裂解TNF α前体的关键酶 ,参与了许多炎症的发生发展过程。为通过肽库筛选得到TACE的抑制肽 ,首先制备筛选靶分子 ,用RT PCR从人外周血单核细胞中分别扩增出TACE的催化区 (T80 0 )和整个胞外区 (T130 0 ) ,然后分别克隆至pET 2 8a和pET 2 8c中 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导表达出带有His tag的目的蛋白 ,两者均为包涵体 ,变性复性后过Ni2 + NTA亲和层析柱得到纯度达 90 %的重组蛋白。以纯化的重组T80 0和T130 0分别筛选噬菌体展示随机 15肽库 ,对筛选克隆进行ELISA检测、竞争抑制实验和序列分析。从两个独立的筛选过程中得到一个相同的阳性克隆序列“TRWLVYFSRPYLVAT” ,固相Fmoc法合成该短肽 ,观察其在LPS诱导人单核细胞产生sTNF α中的作用。结果表明 ,筛选到的短肽可显著抑制TACE的活性 ,减少TNF α的分泌 ,抑制率可达 6 0 3% ,为抗炎小分子药物的设计和改造提供线索和依据。
- 黄巍李凌波韩玲张慧杨渝珍
- 关键词：噬菌体展示
- 用重组TACE胞外功能域从噬菌体展示随机15肽库筛选TACE的抑制肽
- 肿瘤坏死因子转换酶(TACE)是加工裂解TNF-α前体的关键酶,参与了许多炎症的发生发展过程。为通过肽库筛选得到TACE的抑制肽,首先制备筛选靶分子,用RT-PCR 从人外周血单核细胞中分别扩增出TACE的催化区(T80...
- 黄巍李凌波韩玲杨渝珍
- 关键词：噬菌体展示
- 文献传递
