陈瑞亮
- 作品数：11 被引量：27H指数：3
- 供职机构：河南农业大学牧医工程学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项河南省科技攻关计划河南省教育厅自然科学基金更多>>
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- 猪白细胞介素18成熟蛋白基因克隆及在不同原核表达系统中的表达
- 2008年
- RT-PCR方法直接从猪脾脏淋巴细胞中扩增出猪白细胞介素18成熟蛋白基因的cDNA,克隆到pGEM-T载体,构建重组质粒pGEM-TpIL18,转化E.coliJM109感受态细胞,取PCR和酶切鉴定为阳性的重组质粒进行序列测定.测序结果表明,pIL-18成熟蛋白基因核苷酸长度为474 bp,编码157个氨基酸.将其分别克隆到表达载体pQE30、pET-28a、pGEX6P-1中,构建重组表达质粒pQE-mpIL18、pET-mpIL18、pGEX-mpIL18.用IPTG诱导表达,重组菌菌体裂解物SDS-PAGE可检测到相对分子质量分别为19 000、21 000、45 000的重组蛋白.经薄层扫描分析,pQE-mpIL18、pET-mpIL18、pGEX-mpIL18菌体裂解物分别占菌体总蛋白的17%、28%、27%,均以包涵体形式存在.
- 郑兰兰崔保安陈红英贾云飞陈瑞亮方忠意
- 关键词：成熟蛋白原核表达
- 杂交猪白细胞介素-18全基因的克隆与序列分析被引量：2
- 2007年
- 通过RT-PCR方法直接从猪脾脏淋巴细胞中扩增出猪白细胞介素-18(IL-18)全基因的cDNA,其大小为579bp,编码192个氨基酸。与GenBank上已发表猪IL-18序列(ABO10003)进行比较,核苷酸同源性为99.8%,在第550位处(以ATG为1计)由A→G,存在有意义突变。与GenBank上的ABO10003、AF176949、AY262109、NM1997序列进行比较分析,氨基酸同源性分别为99%,98.5%,99.8%和99%。从系统进化树可以看出,河南良杂猪IL-18基因与ABO10003、AY262109亲缘关系最近。河南良杂猪IL-18基因和人及其他动物IL-18基因核苷酸序列进行比较分析,结果显示猪与人、猫、牛、鸡、鸭、海豚、山羊、马、家鼠、老鼠、绵羊的IL-18基因核苷酸同源性分别为83.1%、88.3%、90.7%、26.8%、31.4%、26.3%、90.0%、91.5%、67.7%、65.1%和90.8%。
- 崔保安郑兰兰陈红英方忠意陈瑞亮赵现敏冯向杰
- 关键词：IL-18克隆杂交猪
- 猪白细胞介素18基因的克隆、表达及生物学活性检测被引量：6
- 2008年
- 通过RT-PCR方法直接从猪脾脏淋巴细胞中扩增出猪白细胞介素18(pIL-18)成熟蛋白基因的cDNA,克隆到pGEM-T载体,构建重组质粒pGEM-T-IL18,转化E.coli JM109感受态细胞,取PCR和酶切鉴定为阳性的重组质粒进行序列测定。测序结果表明,pIL-18成熟蛋白基因核苷酸长度为474 bp,编码157个氨基酸。将其克隆到表达载体pGEX6P-1中,构建重组质粒pGEX-IL18,转化E.coli BL21感受态细胞,用IPTG诱导表达。重组菌菌体裂解物SDS-PAGE可检测到相对分子质量为45 kD的重组蛋白,占菌体总蛋白的28%左右,以包涵体形式存在。对包涵体进行洗涤,用MTT法测定表明,重组蛋白能明显刺激猪脾脏T淋巴细胞增殖反应的活性。
- 郑兰兰贾云飞崔保安陈红英魏战勇陈瑞亮
- 关键词：成熟蛋白原核表达活性检测
- 河南良杂猪白细胞介素-18全基因的克隆与序列分析
- 白细胞介素-18(Interleukin-18,IL-18)是一种能诱导产生IFN-γ的新型细胞因子．参照GenBank发表的猪IL-18cDNA基因序列,设计一对引物,采集6月龄河南良杂猪的脾脏,分离淋巴细胞后直接提取...
- 郑兰兰崔保安陈红英方忠意陈瑞亮赵现敏冯向杰
- 关键词：克隆
- 文献传递
- 留兰香提取物体外抗猪细小病毒的作用被引量：2
- 2011年
- 通过观察病毒引起的细胞病变效应(Cytopathogenic effect,CPE)和四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测留兰香提取物抗猪细小病毒(PPV)活性,计算药物对病变的抑制率和半数抑制浓度(50%inhibitingconcentration,IC50),并从药物预防给药(抗病毒吸附)、直接杀灭及治疗给药(抑制病毒在细胞内的生物合成)3个方面分析留兰香提取物抗PPV活性的作用机制。结果显示:留兰香挥发油在这3种作用方式中对PPV均有抑制效果,其半数抑制浓度(IC50)分别为0.008 0 mg/ml、0.001 9 mg/ml、0.003 6 mg/ml,治疗指数(TI)分别为25.88、108.95、57.50;留兰香水提液和粗提物对PPV直接杀灭的半数有效浓度(IC50)分别为0.034 0 mg/ml、0.356 0mg/ml,治疗指数(TI)分别为79.18、8.37;留兰香水提液和粗提物抑制病毒在细胞内生物合成的半数有效浓度(IC50)分别为0.043 0 mg/ml、0.063 0 mg/ml,治疗指数(TI)分别为62.60、47.27,留兰香水提液和粗提物均无抗病毒吸附作用。表明留兰香挥发油在对PPV的3种作用方式中均有安全高效活性,留兰香水提液和粗提物对PPV侵入细胞无阻止作用,但在直接灭活和抑制其在细胞内的增殖方面均有较高的活性。
- 韩卫丽崔保安张红英王学兵徐端红陈瑞亮
- 关键词：猪细小病毒细胞病变效应MTT法
- 河南良杂猪白细胞介素-18成熟蛋白基因的克隆及表达载体的构建被引量：3
- 2007年
- 采集6月龄河南良杂猪的脾脏,分离淋巴细胞后直接提取总RNA,进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,扩增产物进行T-A克隆、测序,获得了河南良杂猪IL-18基因成熟蛋白序列.序列测定表明,pIL-18成熟蛋白基因核苷酸长度为474 bp,编码157个氨基酸.将该基因片段克隆到大肠杆菌表达载体pQE30,构建重组质粒pQE-IL18,所获重组质粒经过酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确.
- 郑兰兰崔保安贾云飞陈瑞亮陈红英吕晓丽
- 关键词：克隆成熟蛋白
- 猪白细胞介素-18基因克隆、序列分析及其真核表达载体的构建被引量：1
- 2007年
- 采集6月龄河南良杂猪脾脏,分离淋巴细胞后直接提取总RNA,进行反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,扩增产物进行T-A克隆、测序,获得了河南良杂猪IL-18全基因序列。序列测定表明,plL-18全基因核苷酸长度为579bp,编码192个氨基酸。与GenBank上已发表序列ABO10003进行比较,核苷酸同源性为99.8%,在第550位处(以ATG为1计)存在A→G的有意义突变。与从GenBank下载读取的ABO10003、AF176949、AY262109、NM1997序列进行比较分析,氨基酸同源性分别为99%、98.5%和99.8%、99%。将该基因片段克隆到真核表达载体pcDNA3.1,构建重组质粒pcDNA-ILl8m,所获重组质粒经过酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确,为核酸疫苗的研究应用奠定了基础。
- 郑兰兰崔保安陈红英贾云飞陈瑞亮方忠意李小康赵丽
- 关键词：克隆
- 猪白细胞介素18全基因的克隆、真核表达质粒的构建及其在猪肾细胞中的表达被引量：6
- 2009年
- 通过RT-PCR方法自猪脾脏淋巴细胞中扩增mpIL-18基因,序列测定表明,plL-18全基因核苷酸长度为579bp,编码192个氨基酸。将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,构建重组质粒pcDNA-ILl8m,所获重组质粒经过酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确。阳性克隆鉴定后,在脂质体作用下转染猪肾细胞(PK15),通过提取RNA检测到了mpIL-18在PK15细胞中的表达。
- 郑兰兰崔保安陈红英陈瑞亮方忠意李小康赵丽
- 关键词：IL-18基因克隆转染
- 板蓝根生物碱的体外抗菌抗病毒作用研究
- 本试验探索板蓝根生物碱的提取工艺,测定板蓝根生物碱的抗菌及抗病毒活性,荧光定量检测板蓝根生物碱的抗病毒活性。
本试验采用醇提法从板监根中提取板蓝根水溶性生物碱和脂溶性生物碱,采用倍比稀释法测定其最低抑菌浓度(MIC...
- 陈瑞亮
- 关键词：抗病毒作用荧光定量检测抗病毒活性
- 文献传递
- 板蓝根生物碱抗猪细小病病毒的作用被引量：3
- 2010年
- 探讨板蓝根水溶性生物碱、脂溶性生物碱和板蓝根混合生物碱对猪细小病毒的体外抑制作用。采用醇提法从板蓝根中提取了水溶性生物碱和脂溶性生物碱,将脂溶性生物碱和水溶性生物碱按照1:10的比例混合而配置成混合生物碱,并测定3种生物碱对PK-15细胞的最大无毒浓度(TD0),应用先加药后接种病毒、先接种病毒后加药、病毒和药物体外作用2h后再同时加入细胞单层3种加药方式测定了生物碱的体外抗PPV效果。结果表明,板蓝根水溶性生物碱的TD0为62.5μg/mL,板蓝根脂溶性生物碱的TD0为50μg/mL,板蓝根混合生物碱的TD0为65μg/mL。板蓝根水溶性生物碱对PPV的最小阻断浓度、最小抑制浓度和直接杀灭浓度分别为7.81、15.62、7.81μg/mL。板蓝根脂溶性生物碱对PPV的最小阻断浓度、最小抑制浓度和直接杀灭浓度分别为0.78、12.5、0.78μg/mL。板蓝根混合生物碱对PPV的最小阻断浓度、最小抑制浓度和直接杀灭浓度分别为7.81、12.5、0.78μg/mL。板蓝根脂溶性生物碱和板蓝根混合生物碱的抗猪细小病毒作用相同,但是板蓝根混合生物碱和板蓝根脂溶性生物碱的抗病毒作用比板蓝根水溶性生物碱的抗猪细小病毒要好。
- 陈瑞亮王林青崔保安张红英王学兵徐端红韩卫丽
