贾云飞
- 作品数：6 被引量：15H指数：3
- 供职机构：河南农业大学牧医工程学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项河南省科技攻关计划河南省杰出人才创新基金更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程生物学更多>>
- 肌肽对CCl_4诱导的肝匀浆脂质过氧化的抑制作用被引量：5
- 2005年
- 郭爽杨国宇韩立强贾云飞
- 关键词：脂质过氧化CCL4细胞保护作用肌肽
- 猪白细胞介素18基因的克隆、表达及生物学活性检测被引量：6
- 2008年
- 通过RT-PCR方法直接从猪脾脏淋巴细胞中扩增出猪白细胞介素18(pIL-18)成熟蛋白基因的cDNA,克隆到pGEM-T载体,构建重组质粒pGEM-T-IL18,转化E.coli JM109感受态细胞,取PCR和酶切鉴定为阳性的重组质粒进行序列测定。测序结果表明,pIL-18成熟蛋白基因核苷酸长度为474 bp,编码157个氨基酸。将其克隆到表达载体pGEX6P-1中,构建重组质粒pGEX-IL18,转化E.coli BL21感受态细胞,用IPTG诱导表达。重组菌菌体裂解物SDS-PAGE可检测到相对分子质量为45 kD的重组蛋白,占菌体总蛋白的28%左右,以包涵体形式存在。对包涵体进行洗涤,用MTT法测定表明,重组蛋白能明显刺激猪脾脏T淋巴细胞增殖反应的活性。
- 郑兰兰贾云飞崔保安陈红英魏战勇陈瑞亮
- 关键词：成熟蛋白原核表达活性检测
- 猪白细胞介素18成熟蛋白基因克隆及在不同原核表达系统中的表达
- 2008年
- RT-PCR方法直接从猪脾脏淋巴细胞中扩增出猪白细胞介素18成熟蛋白基因的cDNA,克隆到pGEM-T载体,构建重组质粒pGEM-TpIL18,转化E.coliJM109感受态细胞,取PCR和酶切鉴定为阳性的重组质粒进行序列测定.测序结果表明,pIL-18成熟蛋白基因核苷酸长度为474 bp,编码157个氨基酸.将其分别克隆到表达载体pQE30、pET-28a、pGEX6P-1中,构建重组表达质粒pQE-mpIL18、pET-mpIL18、pGEX-mpIL18.用IPTG诱导表达,重组菌菌体裂解物SDS-PAGE可检测到相对分子质量分别为19 000、21 000、45 000的重组蛋白.经薄层扫描分析,pQE-mpIL18、pET-mpIL18、pGEX-mpIL18菌体裂解物分别占菌体总蛋白的17%、28%、27%,均以包涵体形式存在.
- 郑兰兰崔保安陈红英贾云飞陈瑞亮方忠意
- 关键词：成熟蛋白原核表达
- 河南良杂猪白细胞介素-18成熟蛋白基因的克隆及表达载体的构建被引量：3
- 2007年
- 采集6月龄河南良杂猪的脾脏,分离淋巴细胞后直接提取总RNA,进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,扩增产物进行T-A克隆、测序,获得了河南良杂猪IL-18基因成熟蛋白序列.序列测定表明,pIL-18成熟蛋白基因核苷酸长度为474 bp,编码157个氨基酸.将该基因片段克隆到大肠杆菌表达载体pQE30,构建重组质粒pQE-IL18,所获重组质粒经过酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确.
- 郑兰兰崔保安贾云飞陈瑞亮陈红英吕晓丽
- 关键词：克隆成熟蛋白
- 猪白细胞介素-18基因克隆、序列分析及其真核表达载体的构建被引量：1
- 2007年
- 采集6月龄河南良杂猪脾脏,分离淋巴细胞后直接提取总RNA,进行反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,扩增产物进行T-A克隆、测序,获得了河南良杂猪IL-18全基因序列。序列测定表明,plL-18全基因核苷酸长度为579bp,编码192个氨基酸。与GenBank上已发表序列ABO10003进行比较,核苷酸同源性为99.8%,在第550位处(以ATG为1计)存在A→G的有意义突变。与从GenBank下载读取的ABO10003、AF176949、AY262109、NM1997序列进行比较分析,氨基酸同源性分别为99%、98.5%和99.8%、99%。将该基因片段克隆到真核表达载体pcDNA3.1,构建重组质粒pcDNA-ILl8m,所获重组质粒经过酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确,为核酸疫苗的研究应用奠定了基础。
- 郑兰兰崔保安陈红英贾云飞陈瑞亮方忠意李小康赵丽
- 关键词：克隆
