陈宇明
- 作品数：48 被引量：173H指数：7
- 供职机构：复旦大学附属华山医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市卫生局科研基金国家临床重点专科建设项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 采用多重PCR结合高分辨熔解曲线法单管同时检测JAK2V617F突变和JAK2外显子12突变被引量：2
- 2014年
- 目的 建立能单管同时检测JAK2 V617F突变和外显子12突变的方法.方法 以PC-3细胞株DNA为野生型对照,分别以HEL细胞株DNA和含有JAK2外显子12突变的质粒作为JAK2V617F突变和外显子12突变的阳性对照,采用多重PCR扩增不同DNA片段,并结合高分辨熔解曲线法建立检测JAK2V617F和外显子12突变的联合检测体系.同时选取42例真性红细胞增多症患者,分别采用上述方法和常规方法在外周血中检测JAK2的2种突变.结果 采用多重PCR结合高分辨熔解曲线法成功建立了JAK2突变联合检测体系,能够同时检测JAK2V617F突变和外显子12突变,2种突变的检测灵敏度皆可达5％,2种扩增片段的溶解温度（Tm）的批间及批内变异系数都小于0.01％.42例真性红细胞增多症患者中,发现37例携有JAK2V617F突变,在5例JAK2V617F突变阴性真性红细胞增多症病例中检出2例JAK2外显子12突变.与常规方法相比,结果符合率达到100％.2例JAK2外显子12突变经克隆测序确认突变类型为H538K539delinsL和F537-I546dul10＋F547L.结论 该方法可同时在外周血中检测出JAK2的2种突变,将有助于对骨髓增殖性肿瘤尤其是真性红细胞增多症的分子诊断.
- 许笑陈宇明吴之源张心菊胡婷婷张瑾关明
- 关键词：JANUS激酶2突变多重聚合酶链反应高分辨率熔解曲线
- 定量检测肝癌缺失因子1启动子甲基化水平的方法
- 本发明属于基因工程和基因诊断领域，涉及肿瘤抑癌基因Deleted in Livercancer-1，肝癌缺失因子1，甲基化的检测及用途。本发明提供了一种定量检测肝癌缺失因子1启动子甲基化水平的方法：对样本DNA作甲基化修...
- 张心菊关明邹和建姜昊文陈宇明
- 文献传递
- 抗环瓜氨酸肽抗体和葡萄糖-6-磷酸-异构酶抗原对类风湿关节炎诊断价值的比较被引量：13
- 2008年
- 目的评价抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体和葡萄糖-6-磷酸-异构酶（GPI）抗原对类风湿关节炎（RA）的诊断价值。方法用酶联免疫吸附试验（ELISA）法分别测定RA患者112例、非RA其他风湿病患者44例以及健康志愿者119名血清中的抗CCP抗体、GPI抗原和IgM—RF，应用ROC比较抗CCP抗体和GPI抗原对RA的诊断价值，用Spearman方法分析上述指标与lgM—RF的相关性。结果在诊断RA时．抗CCP抗体和GPI抗原的ROC曲线下面积均大于IgM—RF（P均〈0．05）。抗CCP抗体、GPI抗原与IgM—RF显著相关。CCP抗体与GPI抗原的联合试验的灵敏度达到0．946。结论联合测定抗CCP抗体和GPI抗原对RA具有较高的诊断价值，具有良好的应用前景。
- 张炯邹和建陈宇明薛愉
- 关键词：关节炎类风湿抗环瓜氨酸肽抗体
- 应用SYBR GreenI荧光聚合酶链反应检测人类白细胞抗原-B27被引量：3
- 2005年
- 目的采用SYBRGreenI荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测人类白细胞抗原-B27(HLA-B27)。方法对56例风湿科门诊及住院怀疑为强直性脊柱炎(AS)的患者,以HLA-B27的特异引物和内对照β-Globin引物对标本DNA分别进行常规PCR和SYBRGreenI荧光PCR检测,并对HLA-B27阳性DNA进行不同倍数稀释后用两种方法进行检测比较。结果常规PCR检测HLA-B27阳性的样本上具有136bp的条带,所有的阴性和阳性样本都有268bp的β-Globin条带,共有30例患者HLA-B27阳性。SYBRGreenI荧光PCR检测结果显示,阴性标本的熔解曲线图上(86.3±0.5)℃处有β-Globin的Tm峰,HLA-B27阳性的样本在熔解曲线上有(90.2±0.6)℃HLA-B27的Tm峰。两种方法结果符合率达100%。即使1:100稀释的DNA也可用SYBRGreenI荧光PCR检测出结果,而常规PCR只有用原倍DNA才能检测出结果。结论SYBRGreenI荧光PCR法快速、准确、敏感、实时、简单和环保的特点是常规PCR法所没有的,完全能够替代常规PCR法,成为检测HLA-B27的新手段。
- 陈宇明邹和建张炯徐黎明关明
- 关键词：人类白细胞抗原-B27强直性脊柱炎荧光熔解曲线
- 运用不同荧光定量PCR系统检测HBV-DNA定量检测的偏差评估
- 目的使用患者样本在不同荧光定量PCR分析系统中检测HBV-DNA,进行方法比较及偏差评估。方法采用40例慢性乙型肝炎患者血清分别在ABI PRISM7000荧光定量PCR仪和Roche LightCycler 480II...
- 胡婷婷刘维薇陈宇明袁超关明
- 乙型肝炎耐药基因测序检测性能验证
- 胡婷婷陈宇明关明刘维薇
- △Np73基因沉默对结肠癌细胞5-氟尿嘧啶化疗敏感性的影响
- 2009年
- 目的探讨小干扰RNA（siRNA）调节导致的△Np73抑制对结肠癌细胞SW6205-氟尿嘧啶（5-FU）药物敏感性的影响，为结肠癌治疗提供新途径。方法将△Np73 siRNA转染入SW620结肠癌细胞，观察其对结肠癌细胞△Np73表达的影响。并与5-FU联合使用，四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法检测细胞活力，流式细胞技术检测细胞凋亡。分别将转染△Np73 siRNA和阴性对照siRNA的SW620细胞注射裸鼠成瘤，瘤中注射5-FU观察体内肿瘤的生长情况。结果△Np73 siRNA可显著抑制SW620结肠癌细胞△Np73的表达，但本身均不能抑制SW620结肠癌细胞的生长。同时应用△Np73 siRNA和5-FU共同处理的SW620细胞的凋亡率达到42．9％，显著高于单纯5-FU处理组（18．9％）和单纯△Np73处理组（8．8％）。在转染△Np73 siRNA的成瘤小鼠的瘤中注射5-FU，能明显抑制癌细胞体外生长（t=15．32，P〈0．05）。结论△Np73 siRNA可通过抑制△Np73的表达，从而增强对化疗药物的敏感性。
- 彭海霞关明陈宇明陶琨金云菲李吉王赛玉钱爱华
- 关键词：氟尿嘧啶核蛋白质类肿瘤抑制蛋白质类
- 运用不同荧光定量PCR系统检测HBV—DNA定量检测的偏差评估被引量：2
- 2012年
- 随着定量PCR在实验诊断领域的广泛应用，许多PCR实验室同时使用两台以上不同的荧光定量PCR仪参与日常检验报告的发送。但是，由于不同的检测系统间存在着差异，导致在结果判读时产生疑问：不同仪器系统检测的结果之间究竟存在多大的差异？是否在可接受范围之内？是否需要对结果进行修正？然而，目前国内在评估定量PCR检测的结果时，对于同一实验室内所出具的报告之间一致性并没有明确的体系可供参考。室内、室间质评的监测也只能说明质控合格的系统所出具的报告是可接受的，但无法对不同系统之间的结果进行比较分析。
- 胡婷婷刘维薇陈宇明袁超关明
- 关键词：CR系统DNAHBV定量PCR检测
- 乙型肝炎病毒耐药基因测序检测性能验证被引量：2
- 2014年
- 目的：探讨在ISO15189以及美国病理学家协会（ CAP）实验室认可体系下，建立使用一代测序（Sanger测序法）进行乙型肝炎病毒（HBV）耐药基因检测的项目性能验证标准。方法方法学建立。2012年8至12月收集复旦大学附属华山医院肝炎门诊及住院患者中临床表现HBV耐药患者25例。从测定下限、精密度、正确性、分析特异性、可报告范围/参考范围等方面进行性能评估。测序质量的验证基于整体测序图谱的荧光信号值、性噪比、测序峰图、QV值等评估参数进行。结果可检测出正常背景下10％～20％的突变；有较好的精密度；正确性100％；未发现有明显干扰及交叉污染。结论测序方法的性能验证要结合实际应用。特别是测序分析的质量评估需要针对不同的检测目的以及检测对象建立相关标准并适当进行调整以符合临床需要。本试验方法检测乙型肝炎耐药基因可应用于临床检测。
- 胡婷婷陈宇明关明刘维薇
- 关键词：肝炎病毒乙型病毒病毒病毒载量DNA
- SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测脑胶质瘤中RASSF1A mRNA被引量：6
- 2004年
- 目的 建立检测RASSF1A(RASassociationdomainfamily 1ARASSF1A)mRNA的SYBRGreenⅠ实时定量PCR的方法 ,了解脑胶质瘤中RASSF1A的表达水平 ,研究RASSF1AmRNA的表达和肿瘤恶性程度的关系。方法 构建克隆载体作为定量模板 ,RocheLightCycler 定量检测 4 8例不同恶性程度胶质瘤组织和 6例正常脑组织标本。结果 4 8例脑胶质瘤组织中有 5例未检出RASSF1AmRNA。与内参照三磷酸甘油醛脱氢酶基因GAPDH(glyceraldehycle 3 phosphatedehydrogenase,GAPDH)比较后 ,RASSF1AmRNA的表达范围从 0 .0 8～ 1.0 0 /μg ,均值为 (0 .5 0± 0 .0 0 4 ) /μg。 6例正常脑组织标本均有RASSF1AmRNA的表达 ,范围从 0 .70～ 1.80 /μg ,均值为 (1.0 5± 0 .0 8) /μg。各期胶质瘤中RASSF1A的mRNA的表达水平均低于正常脑组织 ,但胶质瘤不同病理级别组之间的差异无显著意义。结论 胶质瘤中RASSF1A的mRNA的表达水平均低于正常脑组织。成功地建立了SYBRGreenⅠ实时定量检测RASSF1A基因表达方法 ,为研究RASSF1A表达水平下调的机制、表达水平和肿瘤的恶性程度、转移。
- 高云霞关明苏兵刘维薇陈宇明张万忠吕元
- 关键词：脑胶质瘤SYBRGAPDH克隆载体
