邵丁丁
- 作品数：10 被引量：13H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 约氏疟MIF影响小鼠脾CD8^+DC分泌细胞因子被引量：1
- 2011年
- 目的研究约氏疟原虫巨噬细胞迁移抑制因子(PyMIF)对宿主小鼠树突状细胞(DC)表型和功能的影响,为阐明PyMIF对寄主免疫反应的作用机理提供理论依据。方法制备及纯化小鼠MIF及PyMIF重组蛋白,磁珠分选法得到小鼠脾DCs两种主要亚群CD8+DC及CD4+DC,在体外培养的情况下,流式细胞仪检测CD8+DC及CD4+DC TLR4、CD40、CD80、CD86、MHCⅠ、MHCⅡ等细胞表面分子表达,用ELISA方法检测细胞因子IL-12、TGF-β1的分泌。结果 PyMIF未改变脾DCs细胞表面CD40、CD80、CD86、MHCⅠ、MHCⅡ等分子水平,但可以下调脾DCs表面TLR4水平;此外,在CD8+DC,PyMIF能够拮抗LPS刺激所引起IL-12分泌的上升,由(433±48)pg/mL降至(373±30)pg/mL(P<0.05),并促进未成熟DCs分泌TGF-β1,由(136±4)pg/mL升至(182±7)pg/mL(P<0.05),而对CD4+DC分泌细胞因子并无影响。结论 PyMIF不参与DCs成熟过程,但有助于感染后宿主体内免疫抑制环境的产生,以逃避宿主免疫攻击有利于自身的存活。
- 刘恩鹏罗茗月邵丁丁王恒
- 关键词：白细胞介素12TGF-Β1
- 应用生物芯片技术探讨疟原虫MIF的信号通路作用机制
- 2009年
- 通过生物芯片的方法，寻找约氏疟原虫（Plasmodium yoelii）来源的巨噬细胞迁移抑制因子（Macrophage migration inhibitory factor，MIF）（PyMIF）和宿主小鼠来源的MIF分子（MmMIF）在调节宿主细胞信号通路方面的差异，从而研究这2种MIF分子在作用机制上的异同。将亲和纯化原核表达的带His标签的重组MIF蛋白，通过C8柱去除内毒素后，刺激体外培养的小鼠单核／巨噬细胞系，纯化高质量的RNA，然后通过信号发现者通路芯片进行分析。结果表明PyMIF可能参与了多个细胞存活和抗凋亡相关的通路并上调了一些炎症基因的高转录，扩大了炎症反应并参与了维持靶细胞活性信号通路的转导。
- 钟翔曾山邵丁丁王恒
- 关键词：巨噬细胞迁移抑制因子疟原虫基因芯片信号通路
- 巨噬细胞迁移抑制因子与疟原虫感染的相关研究进展被引量：2
- 2009年
- 疟疾是世界上主要的致死性感染性疾病之一，但是目前药物抗性虫株的出现、有效疫苗的缺乏，特别是对疟原虫生物学、疟疾病理机制以及宿主在疟原虫感染后的免疫应答等方面了解不足是控制疟疾的主要困难。大量研究发现，机体内的巨噬细胞迁移抑制因子（macrophage migration inhibitory factor，MIF）在包括疟疾在内的多种感染性疾病中发挥着重要作用，因此受到研究者日益广泛的关注。近年来研究者们从疟原虫等寄生虫中也先后鉴定出MIF分子，它们不仅在结构上具有高等生物MIF分子的典型特征，而且还具有与之相似的功能。尽管其在感染过程中的作用尚不清楚，但迄今为止多项研究表明，这些宿主MIF的同源分子具有调节宿主免疫系统的能力。该文综述了宿主MIF和寄生虫MIF在疟疾感染和病理机制中的作用的研究现状。
- 邵丁丁王恒
- 关键词：巨噬细胞迁移抑制因子疟疾贫血
- 约氏疟原虫MIF分子调节巨噬细胞炎性因子基因表达
- 2011年
- 目的分析约氏疟原虫表达的巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)对小鼠巨噬细胞炎性因子基因表达的调节情况,并比较PyMIF和宿主小鼠MIF(MmMIF)在调节炎性因子表达水平方面的差异。方法亲和柱纯化原核表达的带His标签的重组MIF蛋白,去除内毒素后刺激体外培养的同步化小鼠单核巨噬细胞系,随后纯化高质量的RNA,通过小鼠炎性因子和受体芯片进行分析。结果 PyMIF显著促进了17个炎性因子和炎性因子受体基因的转录(ΔΔCt≥2),同时显著降低了3个基因(CCR6、CCR8和IL1F6)的转录水平(ΔΔCt≤-2)。并且,PyMIF调节的基因数量明显多于MmMIF。结论 PyMIF和MmMIF对巨噬细胞的活性调节存在显著差异,此结果为进一步了解PyMIF对宿主炎性反应的作用提供了重要数据。
- 邵丁丁曾山钟翔王恒
- 关键词：巨噬细胞迁移抑制因子疟原虫基因芯片
- 重组约氏疟MIF对小鼠BM-DC细胞表型与功能的影响
- 2012年
- 目的探索约氏疟原虫来源重组巨噬细胞迁移抑制因子(PyMIF)对小鼠骨髓树突状细胞(BM-DC)表型和功能的影响。方法分离小鼠骨髓细胞,并经GM-CSF和IL-4诱导,培养得到BM-DC;经PyMIF刺激后,流式细胞术检测其TLR2、TLR4、CD80、CD86、CD40和MHCⅡ分子表达,ELISA方法检测IL-12和IL-10分泌;经PyMIF刺激的BM-DC与CD4+T或CD8+T细胞共培养,检测T细胞CD69表达和IL-2分泌情况,并检测CD8+T细胞对靶细胞杀伤能力。结果 PyMIF可下调小鼠骨髓来源树突状细胞TLR-4的表达(平均荧光强度标准化后比值由1±0.001下降到0.81±0.02,P<0.05);但不能影响BM-DC细胞表面分子TLR2、CD80、CD86、CD40和MHCⅡ的表达,也不改变BM-DC分泌IL-12及IL-10的功能。与PyMIF刺激的BM-DC共孵育后,CD8+T的CD69表达下降(平均荧光强度标准化后比值由2.6±0.8下降到2.0±0.7,P<0.05),但未改变CD4+T细胞CD69表达I、L-2分泌,及CD8+T细胞IL-2分泌。结论 PyMIF可能是通过下调BM-DC细胞TLR4表达来抑制免疫细胞对疟原虫的识别,使之逃逸机体的攻击而存活。
- 罗茗月韩聪邵丁丁刘娟王恒
- 关键词：CD69
- 恶性疟原虫类巨噬细胞迁移抑制因子基因的克隆和表达被引量：7
- 2004年
- 目的克隆、表达恶性疟原虫的巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)同源基因Pfmif。方法参照人MIF基因(Humif)氨基酸序列在P.falciparum基因组中找到同源核苷酸序列,设计特异引物,采用RT-PCR方法从恶性疟原虫3D7株红内期RNA扩增获得Pfmif基因;利用生物信息学软件分析所扩增的基因;原核表达重组PfMIF蛋白,并亲和纯化。结果从恶性疟原虫RNA中扩增到Pfmif基因,长度为351bp,编码116个氨基酸,具有MIF家族蛋白的典型特征。成功的表达及纯化了融合有GST标签的重组PfMIF蛋白。结论获得来自恶性疟原虫的MIF同源基因,初步确定PfMIF是MIF家族的一个新成员。
- 韩志富邵丁丁王恒
- 关键词：恶性疟原虫巨噬细胞迁移抑制因子基因克隆原核表达
- 三种去除人巨噬细胞迁移抑制因子（HuMIF）重组蛋白内毒素方法的比较被引量：1
- 2009年
- 运用3种方法（C8反相柱层析．复性法、多步层析法和本实验室改进的c8反相柱层析．非复性法）去除重组HuMIF蛋白的内毒素，比较其所得蛋白内毒素含量、酶活性以及蛋白回收率等，评价这3种去内毒素方法的优劣。结果表明，c8反相柱层析．复性法蛋白回收率很低，酶活性低但内毒素去除效果好；多步层析法蛋白回收率高，酶活性高但内毒素去除效果稍差；而本实验室改进的c8反相柱层析．非复性法蛋白回收率稍差，酶活性较好且内毒素去除效果不错。由于c8反相柱层析一非复性法内毒素去除方法简单有效，适合实验室范围内推广。
- 钟翔邵丁丁王恒
- 关键词：巨噬细胞迁移抑制因子内毒素酶活性
- 人Ⅱ型CD74基因胞外端片段在昆虫细胞中的表达
- 2010年
- 目的建立应用昆虫杆状病毒表达系统表达人Ⅱ型CD74胞外端片段的技术平台。方法运用分子克隆技术,分别将CD 74胞外端全长（73-232 aa）和与MIF结合的核心区（109-192 aa）片段置于表达载体pFastBacDual的PPH启动子下,重组质粒转入含有Bacmid的大肠杆菌DH10Bac后与病毒基因组重组,提取重组病毒杆粒基因组,转染Sf-21细胞系。用RT-PCR检测目的基因mRNA,用SDS-PAGE和Western blot分析重组蛋白的表达。结果 CD74胞外端全长（73-232 aa）可实现在昆虫细胞中的表达,目的蛋白可被His标签抗体和CD74抗体识别;在细胞感染72 h、病毒接种滴度MOI为8时,目的蛋白可实现最大表达量。CD74与MIF结合的核心区（109-192 aa）片段在mRNA可实现转录的情况下未实现目的蛋白表达。结论成功建立人Ⅱ型CD74胞外端全长在昆虫细胞Sf-21中的表达平台,并获得了目的蛋白表达的优化条件。
- 师文娟邵丁丁钟翔王恒
- 关键词：CD74杆状病毒昆虫细胞蛋白表达
- 应用Real-time PCR芯片检测疟原虫MIF分子对小鼠巨噬细胞Jak-STAT信号通路的影响被引量：1
- 2009年
- 通过生物芯片实验,观察约氏疟原虫（P.yoelii）来源的巨噬细胞迁移抑制因子（Macrophage migration inhibitory factor,MIF）（PyMIF）和宿主小鼠来源的MIF分子（MuMIF）在调节宿主细胞信号通路方面的差异。亲和纯化带有His标签的重组PyMIF和MuMIF蛋白,并去除内毒素后,分别加入体外培养的RAW264.7细胞,10h后收集细胞提取RNA,进行芯片分析。PyMIF和MuMIF对Jak-STAT信号通路没有直接调节作用,但能够通过对MAPK等其他通路的调节,活化或抑制共有的下游分子。宿主小鼠巨噬细胞是PyMIF的靶细胞,PyMIF通过活化癌基因等下游信号分子维持靶细胞活性。
- 曾山邵丁丁王恒
- 关键词：巨噬细胞迁移抑制因子疟原虫信号通路
- 棉铃虫组织蛋白酶B在杆状病毒表达系统中的表达及鉴定被引量：1
- 2005年
- 以棉铃虫(helicoverpa armigera)组织蛋白酶B作外源基因重组构建克隆载体,自重组菌株HCB-DH10Bad、Histag-HCB-DH10Bac中提取穿梭质粒,脂质体法转染草地贪夜蛾卵巢细胞系Sf21细胞,转染液再感染细胞,收集感染3～4 d的上清液,提取芽生病毒的DNA,PCR法鉴定外源HCB基因,感染上清进行SDS-PAGE、Western-blotting、蛋白酶活性检测.结果:感染上清中的芽生病毒的DNA作模板扩增出预期的1 700bp片段,SDS-PAGE、Western-blotting检测均在28ku处有明显表达产物,且表达产物有蛋白水解活性.
- 邵红莲赵小凡董杜鹃扈进冬邵丁丁杨晓梅王金星
- 关键词：棉铃虫组织蛋白酶B转染
