覃岚
- 作品数：12 被引量：57H指数：5
- 供职机构：贵州大学动物科学学院更多>>
- 发文基金：贵州省农业科技攻关项目贵州省自然科学基金贵州省重大科技专项计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 山羊传染性胸膜肺炎病原快速诊断方法的建立被引量：10
- 2012年
- 为准确快速鉴定临床疑似山羊传染性胸膜肺炎(CCPP)病原,针对丝状支原体山羊亚种(Mmc)与绵羊肺炎支原体(Mo)16S rRNA基因设计两对特异性引物Ps/Pa、Ms/Ma,通过优化反应条件及体系,建立检测CCPP两种主要致病支原体的双重PCR方法,并检测了所建方法特异性、敏感性及临床应用。当引物、Mg2+及dNTP浓度分别为0.8 pmol/μL、1.5 nmol/μL、0.2 nmol/μL,Ps/Pa与Ms/Mo比例为1 1时,于54℃退火40 s,可最小检出Mmc与Mo核酸量分别为0.1 ng、0.01 ng,敏感性良好。通过特异性与临床疑似病例检测,证明所建方法具较好特异性,可初步应用于临床诊断。
- 张双翔周碧君程振涛文明王开功崔亚兰李泽民覃岚钟文彬
- 关键词：山羊传染性胸膜肺炎病原双重PCR
- 绵羊肺炎支原体pcDNA3.1-TBP30-Hsp70融合表达质粒的构建及对小鼠细胞免疫应答的影响被引量：8
- 2019年
- 为探究绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)pcDNA3.1-TBP30-Hsp70融合表达质粒对小鼠细胞免疫应答影响,本试验构建了绵羊肺炎支原体pcDNA3.1-TBP30-Hsp70融合表达质粒。用已构建的pMD19T-P30和pMD19-Hsp70质粒为模板,采用基因定点突变(SDM)原理设计引物,应用SOE-PCR扩增目的基因片段,并将其定向克隆至表达载体pcDNA3.1(+),构建重组质粒pcDNA 3.1(+)-TBP30和融合重组质pcDNA3.1(+)-TBP30-Hsp70。使用pcDNA3.1-TBP30、pcDNA3.1-TBP30-Hsp70、pcDNA3.1(+)和Elution Buffer对小鼠进行免疫,应用ELISA试剂盒检测小鼠血清中细胞因子白细胞介素-2(IL-2)、IL-4、干扰素-γ(INF-γ)分泌水平。结果显示,pcDNA3.1-TBP30-Hsp70酶切后可见大小分别约为1413 bp的目的基因片段和5400 bp的载体条带。与空白对照组和pcDNA3.1(+)组相比,免疫重组质粒组均可引起小鼠血清中细胞因子INF-γ、IL-2和IL-4分泌水平的增强,与空白对照组和pcDNA3.1(+)组相比差异显著或极显著(P<0.05;P<0.01);而空白对照组和空质粒组之间差异不显著(P>0.05);免疫pcDNA3.1-TBP30和pcDNA3.1-TBP30-Hsp70组小鼠血清IL-2、INF-γ和IL-4终分泌量增加,表明重组质粒组可刺激小鼠血清中IL-2、INF-γ和IL-4的变化,并且在时间上都呈现出先增多后减少的规律。本试验结果表明,重组质粒pcDNA3.1(+)-TBP30-Hsp70免疫小鼠后,IL-2和INF-γ分泌水平的升高,增强了机体的细胞免疫功能,进而调节机体细胞免疫影响T细胞和巨噬细胞的分泌,从而提高机体细胞免疫能力;IL-4分泌水平升高,促进机体Th2向Th1分化,维持Th1的优势状态,增强了机体的细胞免疫功能。本试验结果为绵羊肺炎支原体基因工程疫苗的研制提供了参考依据。
- 周怡王柏林杨美何玲覃岚覃岚张双翔岳筠张双翔周碧君
- 关键词：绵羊肺炎支原体SOE-PCR
- 应用荧光定量PCR筛选绵羊肺炎支原体最适生长培养基被引量：3
- 2013年
- 为筛选绵羊肺炎支原体(Mo)最适生长培养基,针对Mo 16S rRNA基因设计特异性引物FQs/FQa,建立可定量检测Mo 16S rRNA基因FQ-PCR方法,通过检测不同培养时间各Mo培养液中Mo Y98株核酸含量,比较Mo于不同培养基中培养特性,以筛选Mo最适生长培养基。结果,以Broth-ame与TSB1培养Mo 7,10和14 d时Mo核酸检测值较高,较Frey-ame、PPLO-ame更适合Mo生长。本研究为后续Mo生物学特性分析奠定了基础。
- 张双翔程振涛周碧君文明王开功李泽民覃岚崔亚兰王慧
- 关键词：荧光定量PCR绵羊肺炎支原体
- 绵羊肺炎支原体LAMP检测方法的建立及初步应用被引量：6
- 2013年
- 针对绵羊肺炎支原体(Mo)16SrRNA基因设计4条环介导等温扩增(LAMP)引物,通过优化反应条件与体系,建立了Mo检测LAMP方法,并对其进行特异性、敏感性及临床应用性检测。结果显示,于60℃保温60min即可最优化检测Mo,且所建方法仅能特异扩增Mo,最低检出分子拷贝数为1.0×102copies/μL,具有良好的特异性和敏感性。对4份已知阳性病料进行LAMP检测均为阳性,表明所建LAMP可初步应用于临床检测,为羊Mo感染病例诊断提供了新方法。
- 张双翔周碧君程振涛文明王开功李泽民王慧崔亚兰覃岚
- 关键词：绵羊肺炎支原体环介导等温扩增
- 牛结核分枝杆菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：4
- 2015年
- 为建立可应用于快速检测奶牛结核病、评估鲜乳污染状况、追溯传播途径的试验方法,本研究根据牛结核分枝杆菌基因组设计合成特异性引物,建立实时荧光定量PCR方法,并对反应条件进行优化,构建标准曲线,评价该方法的性能。结果显示,本研究所建立的实时荧光定量PCR方法能有效检测牛结核分枝杆菌目的基因,其最佳引物浓度为400nmol/L,最佳退火温度为52℃。所构建的标准曲线相关性好,可用于样本的定量检测。该方法的性能评价显示,其最小检出模板浓度为80.24ng/L,且该方法具有较好的特异性、可重复性,可对鲜乳样本进行检测。试验结果表明,本研究所建方法可用于牛结核分枝杆菌的定性和定量检测,这为奶牛结核病的诊断与净化及鲜乳食品安全评估提供重要技术。
- 程振涛岳筠张华周碧君文明王开功欧德渊覃岚徐春志
- 关键词：牛结核分枝杆菌实时荧光定量PCR
- 2012年贵州羊蓝舌病血清流行病学调查及影响因素分析被引量：11
- 2013年
- 为了解2012年贵州省各地区羊蓝舌病血清流行病学情况,以便合理进行疫病预警和防控。本研究收集2012年贵州省不同地区羊血清样本1869头份,采用ELISA方法对羊蓝舌病血清抗体进行检测,分别就不同地区、年龄阶段、性别、海拔高度及不同类型养殖模式五种因素对BTV血清抗体阳性率影响进行分析。结果显示:贵州省7个市(州)的羊群均检出BTV血清抗体阳性样本,总体阳性率为25.79%(482/1869),各地区间存在差别,以黔东南州最高,铜仁市最低,但差异不十分显著;对不同养殖模式下羊群BTV血清抗体阳性率进行比较,呈现散养户>养羊小区>规模养殖场趋势;不同年龄阶段及性别对BTV血清抗体阳性率影响不大;不同海拔高度对BTV血清抗体阳性率影响呈现一定的规律性,海拔最低处羊群阳性率较低,700m以上海拔高度的羊群BTV抗体阳性率均较高,并且随着海拔不断升高又呈现下降趋势。研究结果表明,贵州省各地区均存在BTV隐性感染风险,应根据影响因素采取合理措施进行防控。
- 王慧覃岚尹鑫周碧君文明程振涛王开功
- 关键词：蓝舌病血清流行病学调查影响因素
- 绵羊肺炎支原体贵州分离株的鉴定被引量：11
- 2013年
- 【目的】对贵州省疑似绵羊肺炎支原体(Mo)感染山羊病例进行病原确定性诊断。【方法】采集疑似Mo感染山羊肺脏,以支原体专用培养基从其中分离致病支原体,并通过形态学观察、生化试验、血清学试验及分子生物学方法对分离菌株进行鉴定。【结果】分离菌株菌落呈无中心脐圆形凸起,菌体呈多形性,大小在0.2～0.4μm;分离株表现出了与Mo标准株Y98相同的生化特性,在含抗Mo血清培养基中不生长;分离株16SrRNA基因序列与Mo Y98株同源性达99.55%,系统进化树分析与MoGH3-3株进化关系最近。【结论】成功分离到了Mo,为确定本地山羊支原体肺炎病原种类提供了理论依据,并为后续围绕病原进行防控工作研究奠定了基础。
- 张双翔程振涛周碧君文明王开功李泽民王慧崔亚兰覃岚夏鹏
- 关键词：绵羊肺炎支原体肺炎
- 牛结核分支杆菌PCR检测方法的建立
- 吴燕刘忠发覃岚程振涛周碧君
- 绵羊肺炎支原体贵州株药物敏感性分析被引量：4
- 2019年
- 为了解绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)贵州株对抗菌药物的敏感性,试验选取喹诺酮类、四环素类、氨基糖苷类等12种常用抗菌药物及酚类、季铵盐类、含氯类等6种环境消毒药物,采用微量稀释法、分光光度法分析Mo标准株Y98及分离株GZ-TZ、GZ-WN的药物敏感性。结果表明:庆大霉素、链霉素及磺胺间甲氧嘧啶钠对3个Mo菌株的MIC都极显著高于其他药物(P<0.01),表明3个Mo菌株对这3种药物不敏感;磺酸强力霉素、盐酸环丙沙星、恩诺沙星、甲磺酸单诺沙星作用后,Mo标准株和分离株的菌液OD450值均<0.7,且极显著低于其他药物的菌液OD450值(P<0.01),表明这些药物对Mo标准株和分离株有很强的抑制作用;苯酚作用于Mo Y98株、GZ-WN株1 min后,菌液的OD450值极显著低于其他药物(P<0.01),表明苯酚的抑制作用较好,可以作为极短时间内的首选消毒药使用。说明Mo贵州株对多类药物产生了耐药性,可根据试验结果选择适合治疗、防控和环境消毒的药物。
- 王军覃岚覃岚周怡杨源文明程振涛
- 关键词：绵羊肺炎支原体药物敏感性抗菌药消毒药
- 绵羊肺炎支原体热休克蛋白Hsp70 C末端基因原核表达被引量：3
- 2014年
- 为研究绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)热休克蛋白Hsp70抗原特性,以Mo贵州分离株为模板扩增得到Hsp70蛋白C末端基因,将目的基因连接至pET-28a原核表达载体,经PCR、双酶切和序列测定正确的阳性重组质粒转化E.coli Rosseta表达菌,IPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE及Western blotting分析。结果显示,经PCR从Mo贵州分离株扩增获得567bp的C末端片段,并成功构建含Mo Hsp70蛋白C末端基因的原核表达质粒,经IPTG诱导表达获得分子质量约为27ku的目的蛋白,且目的蛋白能与Mo阳性血清印迹反应。说明,成功构建可有效表达Mo贵州分离株Hsp70蛋白C末端基因的原核表达载体。
- 王慧周碧君罗成波李益孔令萍文明覃岚程振涛王开功
- 关键词：绵羊肺炎支原体HSP70克隆原核表达
