张双翔
- 作品数：104 被引量：365H指数：11
- 供职机构：贵州省动物疫病预防控制中心更多>>
- 发文基金：贵州省农业科技攻关项目贵州省科技计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 贵州省仔猪病毒性腹泻流行病学调查
- <正>研究目的仔猪病毒性腹泻一直以来都是困扰我国养猪业健康发展的主要传染性疾病之一,尤其是近年来,贵州省猪病毒性腹泻的流行与暴发日益增多,发病率和死亡率都在80%以上,给贵州省养猪业造成了巨大的经济损失[1-3]。为探索...
- 王开功胡兴义张双翔周碧君文明程振涛王伟冯旭芳
- 关键词：仔猪病毒性腹泻养猪业发病率流行病学调查
- 文献传递
- 山羊传染性胸膜肺炎病原快速诊断方法的建立被引量：10
- 2012年
- 为准确快速鉴定临床疑似山羊传染性胸膜肺炎(CCPP)病原,针对丝状支原体山羊亚种(Mmc)与绵羊肺炎支原体(Mo)16S rRNA基因设计两对特异性引物Ps/Pa、Ms/Ma,通过优化反应条件及体系,建立检测CCPP两种主要致病支原体的双重PCR方法,并检测了所建方法特异性、敏感性及临床应用。当引物、Mg2+及dNTP浓度分别为0.8 pmol/μL、1.5 nmol/μL、0.2 nmol/μL,Ps/Pa与Ms/Mo比例为1 1时,于54℃退火40 s,可最小检出Mmc与Mo核酸量分别为0.1 ng、0.01 ng,敏感性良好。通过特异性与临床疑似病例检测,证明所建方法具较好特异性,可初步应用于临床诊断。
- 张双翔周碧君程振涛文明王开功崔亚兰李泽民覃岚钟文彬
- 关键词：山羊传染性胸膜肺炎病原双重PCR
- 贵州省种猪场5种传染病的血清学调查分析被引量：6
- 2009年
- 张双翔文明方英陈军义周碧君王开功程振涛岳筠
- 关键词：病毒性传染病种猪场血清学调查呼吸道症状母猪繁殖障碍猪细小病毒病
- 绵羊肺炎支原体P113蛋白和丝状支原体山羊亚种LppA蛋白共表达质粒对小鼠免疫应答的研究被引量：2
- 2022年
- 为研究绵羊肺炎支原体(Mo)P113基因和丝状支原体山羊亚种(Mmc)LppA基因的共表达质粒免疫小鼠后对其免疫系统的影响,本研究构建了真核重组质粒pVAX1-P113-LppA,并经PCR、双酶切及测序鉴定正确后转染MDBK细胞,利用PCR及间接免疫荧光试验(IFA)分别检测P113蛋白和LppA蛋白的表达,结果显示,正确构建了含Mo P113基因及Mmc LppA基因的重组质粒pVAX1-P113-LppA;且该重组质粒在MDBK细胞中能有效转录并表达目的蛋白。分别在0、7 d、14 d时以100μg/只pVAX1-P113-LppA腿部肌肉注射免疫BABL/c小鼠,并设Elution Buffer对照组和空载体pVAX1(100μg)对照组,通过MTT法检测小鼠脾细胞增殖情况,并在初次免疫后28 d利用流式细胞术分析各组小鼠脾细胞中CD4^(+)T淋巴细胞和CD8^(+)T淋巴细胞所占总淋巴细胞数的变化,同时采用的ELISA方法检测小鼠免疫后血清特异性抗体和细胞因子(IL-2、IL-4和IFN-γ)的分泌情况。结果显示,重组质粒组小鼠脾淋巴细胞增殖能力极显著高于对照组和空载体组(P<0.01),且该组小鼠脾CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞在免疫28 d时较Elution Buffer对照组和空载体pVAX1(100μg)对照组均极显著上升(P<0.01);该组小鼠免疫后7 d的血清特异性抗体水平极显著升高(P<0.01),在初次免疫后第49 d特异性抗体仍为阳性;血清中IL-2、IL-4和IFN-γ的分泌水平较Elution Buffer对照组和空载体pVAX1(100μg)对照组均呈显著上升趋势(P<0.05),且在首次免疫后28 d时分泌量最高,而后缓慢下降。攻毒试验结果显示,重组质粒pVAX1-P113-LppA对小鼠具有一定的免疫保护能力,小鼠肺部病理损伤明显减轻,发病数量减少。本实验首次表明重组质粒pVAX1-P113-LppA能诱导小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答,Mo P113基因和Mmc LppA基因可以作为羊支原体肺炎(MPSG)DNA疫苗的候选基因,该结果为MPSG核酸疫苗的研究与应用提供实验基础。
- 杨鹏吴燕岳筠陈静李梅王慧张双翔文明程振涛
- 关键词：绵羊肺炎支原体丝状支原体山羊亚种共表达免疫应答
- 贵州省山羊源流产细菌分离鉴定及耐药性调查
- 严重的山羊流产疫病给养殖户和养殖企业造成了巨大的经济损失,引起山羊流产的因素主要有环境应激因素、管理因素、动物素质因素和传染性因素等,其中尤以传染性疫病引起的山羊流产较为突出.本试验对贵州省山羊生殖器官中主要细菌种类、分...
- 王伟周碧君张双翔文明程振涛罗意冯旭芳王开功
- 基于绵羊肺炎支原体Hsp70 C末端蛋白间接ELISA方法的建立被引量：3
- 2018年
- 为探讨建立基于Mo Hsp70C末端蛋白检测绵羊肺炎支原体（Mo）感染或疫苗免疫抗体有效方法的可能性。本研究对Mo Hsp70C末端蛋白基因进行原核表达,采用亲和层析技术对表达产物进行蛋白纯化,Western blot和琼脂扩散试验检测纯化效果和抗原反应性。基于纯化目的蛋白构建检测Mo血清抗体的间接ELISA方法。结果显示：成功表达并纯化出Mo Hsp70C末端蛋白,大小约27 000,琼脂扩散试验表明纯化的目的蛋白具有良好的抗原反应性。基于纯化的Mo Hsp70C末端蛋白,成功构建间接ELISA方法,其最佳体系蛋白质量浓度为10mg/L、血清稀释度1∶5;抗原包被条件37℃1h、室温12h、封闭液5%脱脂奶粉、封闭时间1.5h;临界值为0.588。间接ELISA方法性能评价显示本研究所建立的ELISA方法具有较好的特异性、敏感性和可重复性,可用于临床样本检测,为Mo疫苗免疫和疫病诊断提供可行手段。
- 杨源王慧王慧王军文明周碧君文明岳筠周碧君
- 关键词：绵羊肺炎支原体HSP70间接ELISA
- 贵州山地生态畜牧业有效实现“六个提升”——参加美国现代畜牧业产业创新发展与畜牧大数据信息平台建设培训成效被引量：2
- 2019年
- 根据贵州省山地生态畜牧业发展需要,为进一步推进畜牧产业供给侧结构性改革,贵州省农业农村厅组团赴美国参加现代畜牧业产业创新发展与畜牧大数据信息平台建设培训,将学习掌握的先进理念技术与发展模式广泛应用于产业生产实践中,有效发挥了畜牧产业助力脱贫攻坚的积极效果,实现了行业在法制建设、经营质量、科技力量、品牌效应、金融创新、数据应用6个方面的有效提升。
- 张双翔付卫宁冉隆仲陈敏
- 关键词：畜牧业大数据
- 丝状支原体山羊亚种贵州株的分离与鉴定被引量：6
- 2013年
- 为确定贵州毕节地区某养殖场疑似山羊传染性胸膜肺炎(CCPP)的病原,通过分子生物学方法对疑似CCPP山羊肺组织进行病原核酸检测,并进行病原分离及初步鉴定。结果显示:从疑似CCPP山羊肺组织中检测到丝状支原体山羊亚种(Mmc)核酸,并从肺组织中分离到具有典型煎蛋样菌落的菌株,命名为GZ-DF;分离菌株进行生化试验,结果与参考株PG3相符;同源性分析及进化树比较结果显示,分离株GZ-DF与Mmc参考株PG3(Mmc PG3)、丝状支原体大菌落型(MmmLC Y-goat)、丝状支原体小菌落型(MmmSC PG1)同源性高达99%,且与MmcPG3共同形成基因树的一个分支;动物回归试验成功复制出CCPP的典型症状和病例剖解变化。结果表明:本次疫情应为Mmc感染羊群所致,研究结果为疫情控制提供方向。
- 王慧周碧君张双翔罗成波贺纛孔令萍文明尹鑫程振涛王开功
- 关键词：山羊传染性胸膜肺炎丝状支原体山羊亚种分子生物学鉴定
- 猪病毒性腹泻(PED)疫苗免疫后母猪乳汁中PEDV IgA消长动态被引量：15
- 2017年
- 为了解猪病毒性腹泻(PED)疫苗免疫后母猪乳汁中IgA抗体消长规律,筛选100头妊娠母猪,平均分为5组(4个试验组和1个对照组),采用"猪流行性腹泻病毒(PEDV)-猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)-猪轮状病毒(PoRV)三联弱毒疫苗"(PTR)和"PEDV-TGEV二联灭活疫苗"(PT)进行不同的免疫。其中,试验Ⅰ组产前40d和产前20d免疫PTR,试验Ⅱ组产前40d和产前20d免疫PT,试验Ⅲ组产前40d免疫PTR和产前20d免疫PT,试验Ⅳ组产前40d免疫PT和产前20d免疫PTR,对照组产前40d和产前20d注射生理盐水。通过PEDV IgA抗体检测试剂盒分别检测母猪分娩后0,1,2,3,5,7,10,14d各组乳汁中特异性PEDV IgA抗体水平。结果显示,试验组IgA水平明显高于对照组,其中试验Ⅰ、Ⅱ组与试验Ⅲ、Ⅳ组间差异极显著(P<0.01),而试验Ⅰ、Ⅱ组间以及试验Ⅲ、Ⅳ组间差异不显著(P<0.05)。结果表明,产前40d和产前20d交替使用PTR和PT的抗体滴度明显优于单一接种PTR或PT的抗体滴度。其中只注射PTR母猪分娩后10d乳汁对仔猪没有保护力,注射PT母猪分娩后7d乳汁对仔猪没有保护力。通过本试验基本上了解了PEDV母源抗体消长规律,为今后规模化猪场制定免疫程序提供理论支持。
- 胡兴义张双翔冯旭芳岳筠王开功文明周碧君程振涛王伟秦文学王逊之曲朝杰
- 关键词：分泌性IGA
- 绵羊肺炎支原体热休克蛋白Hsp70的生物信息学分析被引量：6
- 2014年
- 本试验旨在了解绵羊肺炎支原体(Mo)标准Y98株Hsp70基因生物学特性,以期利用该基因表达蛋白建立ELISA方法。本研究应用DNAStar、Bioedit 7.0、ClustalX 3.0、Mega 4.0软件与Protparam、TMpred、IEDB在线工具对Hsp70蛋白的理化参数、跨膜结构、信号肽、二级结构、B细胞表位及与其他支原体Hsp70蛋白进化关系进行了比对分析。结果显示,Mo Y98株Hsp70蛋白理论分子质量为66.14ku,pI值为5.08,为稳定的可溶性蛋白。该蛋白无跨膜结构,不分泌信号肽,存在多处具有免疫原性的肽段,具有形成抗原表位的优势结构,是建立免疫学方法较为理想的靶蛋白。与多种支原体Hsp70基因进化关系分析结果表明,该蛋白与Mo进化关系最近,与丝状支原体簇成员亲缘关系较远,为进一步分析Mo致病机理提供了理论依据。
- 张双翔程振涛唐宇冉隆仲李涛周碧君文明王开功王慧
- 关键词：绵羊肺炎支原体HSP70基因生物信息学
