薛娜
- 作品数：5 被引量：41H指数：3
- 供职机构：新疆大学更多>>
- 发文基金：科技部基础研究重大项目前期研究专项新疆生物资源基因工程重点实验室开放基金国家科技部专项基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 昆虫抗冻蛋白DAFP的原核表达、纯化和抗血清制备被引量：6
- 2005年
- 目的:制备昆虫抗冻蛋白DAFP特异性的鼠抗血清。方法:根据GenBank已发表的Dendroides canadensis抗冻蛋白基因序列(gi:2737939),人工合成加拿大拟步甲虫(Dendroides canadensis)的抗冻蛋白基因(dafp),并克隆到原核表达载体pGEX-4T-1和pMAL-p2x中,在大肠杆菌中进行表达。表达的融合蛋白经Glutathione Sepharose4B纯化后,免疫小鼠制备抗DAFP的抗血清,抗体的效价及特异性分别采用ELISA和Western blot进行检测。结果:SDS-PAGE检测表明,人工合成的dafp基因在大肠杆菌中可表达相对分子质量(Mr)为38000的可溶性融合蛋白。以该融合蛋白免疫小鼠所制备的抗体,其ELISA滴度为1∶5000,Western blot证实BL21/pGEX-4T-1-dafp菌和TB1/pMAL-p2x-dafp菌的表达产物可特异性地与该抗体结合。结论:在大肠杆菌中成功地表达了DAFP的融合蛋白并制备出抗融合蛋白的鼠抗血清,为进一步研究DAFP的特性奠定了基础。
- 王芸吕国栋薛娜张富春马纪
- 关键词：昆虫抗冻蛋白原核表达蛋白印迹抗冻蛋白基因抗血清制备纯化
- 昆虫抗冻蛋白基因的功能鉴定及遗传转化研究
- 制备抗血清，并验证了功能，再将抗冻蛋白基因构建植物表达载体，利用农杆菌介导法将昆虫抗冻蛋白基因整合进烟草基因组中，为进一步研究昆虫抗冻蛋白基因在植物中的表达与功能提供依据。
首先，检测已克隆的准噶尔小胸鳖甲(M...
- 薛娜
- 关键词：昆虫抗冻蛋白原核表达抗冻活性植物表达载体烟草基因组基因遗传转化
- 文献传递
- 新疆准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白在毕赤酵母中的分泌表达被引量：11
- 2005年
- 目的:利用酵母Pichia pastoris 蛋白表达系统,表达准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白。方法:根据新疆准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白(MPAFP5)基因序列设计引物,并分别在5’引物和3’引物中引入了EcoRI和SalI酶切位点,经PCR扩增MPAFP5基因成熟肽序列后与pGEX4T-1载体相连,再将MPAFP5从pGEX4T-1 载体上切下亚克隆至穿梭质粒pGAPZαA上,获得的重组穿梭质粒pGAPZαA-MPAFP5,经线性化后采用电转化法将重组穿梭质粒转入酵母细胞SMD1168内,Zeocin+筛选鉴定重组子,小瓶发酵后取上清作SDS-PAGE检测,并用Western-blot检测表达蛋白的正确性。结果:MPAFP5成功地在酵母表达系统获得表达,Western-blot检测表明表达产物为准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白。结论:酵母表达系统能够高效表达准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白,为高密度发酵大量生产抗冻蛋白奠定了基础。
- 赵干马纪杨长庚薛娜张富春
- 关键词：准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白分泌表达WESTERN-BLOT
- 新疆准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白基因的克隆和抗冻活性分析被引量：35
- 2005年
- 根据GenBank中已发表的昆虫抗冻蛋白基因的保守序列设计引物,利用RT-PCR技术结合3’-RACE扩增的方法,从新疆荒漠昆虫准噶尔小胸鳖甲Microderapunctipenisdzunarica中获得了长约294bp不含信号肽的抗冻蛋白cDNA片段,命名为MpAFP5,其全长序列为363bp(GenBank注册号为AY821792)。基因测序结果表明,MpAFP5cDNA片段与加拿大拟步甲DendroidescanadensisAFP8基因片段、黄粉甲TenebriomolitorTHP4-9基因片段的核苷酸同源性分别达68.4%和71.8%,氨基酸序列同源性分别达70%和81%。将MpAFP5构建到原核表达载体pGEX4T-1中,重组质粒pGEX4T-1-MpAFP5在大肠杆菌BL21(DE3)中能够表达融合抗冻蛋白,SDS-PAGE分析显示融合蛋白的分子量约为37kD,Western印迹分析证明MpAFP5在大肠杆菌中正确表达。细菌的抗冻实验结果显示准噶尔小胸鳖甲融合抗冻蛋白对细菌具有显著的抗冻保护作用,保护效果与抗冻蛋白剂量呈正相关性。
- 赵干马纪薛娜杨长庚专芳芳张富春
- 关键词：准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白RT-PCR抗冻活性
