杨长庚
- 作品数：5 被引量：46H指数：3
- 供职机构：新疆大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：新疆生物资源基因工程重点实验室开放基金科技部基础研究重大项目前期研究专项国家科技部专项基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 新疆准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白在毕赤酵母中的分泌表达被引量：11
- 2005年
- 目的:利用酵母Pichia pastoris 蛋白表达系统,表达准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白。方法:根据新疆准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白(MPAFP5)基因序列设计引物,并分别在5’引物和3’引物中引入了EcoRI和SalI酶切位点,经PCR扩增MPAFP5基因成熟肽序列后与pGEX4T-1载体相连,再将MPAFP5从pGEX4T-1 载体上切下亚克隆至穿梭质粒pGAPZαA上,获得的重组穿梭质粒pGAPZαA-MPAFP5,经线性化后采用电转化法将重组穿梭质粒转入酵母细胞SMD1168内,Zeocin+筛选鉴定重组子,小瓶发酵后取上清作SDS-PAGE检测,并用Western-blot检测表达蛋白的正确性。结果:MPAFP5成功地在酵母表达系统获得表达,Western-blot检测表明表达产物为准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白。结论:酵母表达系统能够高效表达准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白,为高密度发酵大量生产抗冻蛋白奠定了基础。
- 赵干马纪杨长庚薛娜张富春
- 关键词：准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白分泌表达WESTERN-BLOT
- 新疆荒漠昆虫光滑鳖甲（Anatolica Polita borealis）cDNA文库的构建及相关功能基因筛选
- 在新疆的荒漠极端环境中生活着多种昆虫,渡过新疆严寒的冬天而不被冻死。它们通过生理学、生物化学、行为学等方面的改变来提高自身的抗冻性能。与抗冻性能直接相关的是昆虫机体的过冷却点。过冷却点越低,昆虫的抗冻性能就越高。体内冰晶...
- 杨长庚
- 关键词：光滑鳖甲CDNA文库表达序列标签抗冻蛋白
- 文献传递
- 新疆荒漠昆虫光滑鳖甲cDNA文库的构建及功能基因筛选被引量：10
- 2006年
- 以过冬后早春的新疆荒漠拟步甲属昆虫光滑鳖甲(Anatolica Polita borealis)成虫为研究材料,应用SMARTTM cDNA Library Construction技术,通过总RNA提取,反转录合成cDNA,定向构建至噬菌体载体λTripEx2,经体外包装构建了光滑鳖甲的cDNA表达文库。测试结果表明库容量为2.2×106,重组率为84.8%。通过对cDNA文库克隆的序列测定和初步生物信息学分析,获得28个光滑鳖甲表达序列标签(ESTs),包括17个EST(60.7%)与NCBI中已注册的已知功能基因相似性较高,另外的11个EST(39.3%)则没有发现与之相似的序列,推测可能是功能未知的新基因。同时,利用PCR扩增文库技术从cDNA文库中克隆获得了光滑鳖甲的抗冻蛋白基因,初步表明光滑鳖甲cDNA表达文库构建的成功,为深入研究新疆荒漠昆虫的抗冻机理及发现新的昆虫功能基因奠定了基础。
- 杨长庚张富春马纪
- 关键词：光滑鳖甲CDNA文库表达序列标签抗冻蛋白
- 新疆准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白基因的克隆和抗冻活性分析被引量：35
- 2005年
- 根据GenBank中已发表的昆虫抗冻蛋白基因的保守序列设计引物,利用RT-PCR技术结合3’-RACE扩增的方法,从新疆荒漠昆虫准噶尔小胸鳖甲Microderapunctipenisdzunarica中获得了长约294bp不含信号肽的抗冻蛋白cDNA片段,命名为MpAFP5,其全长序列为363bp(GenBank注册号为AY821792)。基因测序结果表明,MpAFP5cDNA片段与加拿大拟步甲DendroidescanadensisAFP8基因片段、黄粉甲TenebriomolitorTHP4-9基因片段的核苷酸同源性分别达68.4%和71.8%,氨基酸序列同源性分别达70%和81%。将MpAFP5构建到原核表达载体pGEX4T-1中,重组质粒pGEX4T-1-MpAFP5在大肠杆菌BL21(DE3)中能够表达融合抗冻蛋白,SDS-PAGE分析显示融合蛋白的分子量约为37kD,Western印迹分析证明MpAFP5在大肠杆菌中正确表达。细菌的抗冻实验结果显示准噶尔小胸鳖甲融合抗冻蛋白对细菌具有显著的抗冻保护作用,保护效果与抗冻蛋白剂量呈正相关性。
- 赵干马纪薛娜杨长庚专芳芳张富春
- 关键词：准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白RT-PCR抗冻活性
- Pedhn基因的克隆及表达分析
- 2008年
- 为深入研究胡杨的抗盐分子机制,并获得与之相关的抗逆基因,采用SMART技术构建了胡杨盐胁迫处理cDNA文库。经随机测序,得到一个编号为SSL061的EST序列,与欧美杨的脱水素基因有较高相似性,通过PCR快速扩增文库的方法获得了胡杨脱水素基因(Pedhn)。分析表明,该cDNA的长度为813 bp,拥有681 bp的开放读码框,共编码227个氨基酸。该序列包括两个重复的富含赖氨酸的K片段和由7个连续的丝氨酸残基组成的S片段,但是缺乏Y片段。RT-PCR结果表明,胡杨在未受胁迫的情况下脱水素基因的转录水平较低,而随着盐胁迫浓度的升高,脱水素基因的转录水平总体呈上升趋势。
- 马艳朱馨蕾杨长庚张富春尹伟伦
- 关键词：CDNA文库脱水素盐胁迫
