温树波
- 作品数：17 被引量：39H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院军事兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划广西壮族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 2015年广西地区PRRSV流行株ORF5和Nsp2基因分子流行病学调查被引量：3
- 2017年
- 目的对广西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp2和ORF5基因进行分子流行病学调查。方法采集广西地区猪病料样品45份,PCR扩增PRRSV毒株Nsp2和ORF5基因并进行遗传进化分析。结果 RT-PCR检测PRRSV 7份猪病料阳性。7株病毒与VR-2332和LV株的同源性分别为83.5%88.7%和62.1%64.8%。遗传进化分析显示,7株病毒分属于两个亚群,3株属于亚群Ⅳ,4株属于亚群Ⅵ。Nsp2序列分析显示,6株病毒有高致病性PRRSV 1+29aa氨基酸的缺失特征,其中GXBB11-2015在此基础上出现了新的20个氨基酸缺失,缺失碱基数为150个碱基。结论高致病性PRRSV已成为广西地区优势毒株,病毒Nsp2基因新的碱基缺失是PRRSV变异的又一证据。
- 孙文超张萍解长占张金勇曹亮南福龙韩继成温树波肖朋朋张赫庄忻雨靖杰崔卓栋柴丹鲁会军金宁一
- 关键词：ORF5基因
- 基孔肯雅病毒和辛德毕斯病毒可视化基因芯片与荧光基因芯片的建立被引量：1
- 2014年
- 根据GenBank中收录的基孔肯雅病毒和辛德毕斯病毒E蛋白基因序列,设计及筛选针对2种病毒的寡核苷酸探针及引物,制备基孔肯雅病毒与辛德毕斯病毒可视化基因芯片与荧光基因芯片,对芯片的灵敏性、特异性进行了验证,并将可视化基因芯片、荧光基因芯片进行灵敏性比较.结果显示,制备的两种基因芯片都能检测到基孔肯雅病毒和辛德毕斯病毒特异性杂交信号.可视化基因芯片、荧光基因芯片检测两种病毒质粒的灵敏度达到9.1×103copies/mL,6.8×101copies/mL和9.1×104copies/mL,6.8×103copies/mL,与普通PCR比较差异显著.荧光基因芯片灵敏度是PCR方法的10倍,可视化基因芯片是荧光基因芯片灵敏度的100倍.模拟病毒检测过程特异性检验证明,可视化基因芯片都具有良好的特异性.本试验建立了基孔肯雅病毒与辛德毕斯病毒两种特异的可视化和荧光基因芯片检测方法,两种方法灵敏度高、特异性强,适用于基孔肯雅病毒与辛德毕斯病毒的流行病学调查和种特异性鉴定.
- 薛斐田明尧辛舒任静强孙文超阎富龙温树波鲁会军田宇飞金宁一
- 关键词：基孔肯雅病毒辛德毕斯病毒基因芯片可视化
- H3亚型流感重组腺病毒候选疫苗的构建及鉴定
- 2013年
- 目的研制一种制备工艺简单、无需鸡胚即可大量生产的预防季节性H3亚型流感重组腺病毒候选疫苗。方法构建含有外源H3HA基因的重组腺病毒穿梭载体质粒pacAd5-H3HA,并用酶切的方法进行鉴定;将鉴定阳性的pacAd5-H3HA与腺病毒骨架载体质粒线性化后用脂质体介导共转染HEK293细胞,分别采用RT-PCR、间接免疫荧光试验以及Western blot方法对构建的H3亚型流感重组腺病毒疫苗进行鉴定。结果 RT-PCR扩增出约1.8kb片段,与目的片段大小相同,表明外源基因H3HA成功插入重组腺病毒。间接免疫荧光试验显示重组腺病毒转染后的HEK293细胞中检测到特异性蛋白,Western blot显示在70ku处有一反应条带,表明该H3HA蛋白能被兔抗H3亚型HA蛋白血清识别。结论构建的H3亚型流感重组腺病毒能在HEK293细胞中表达具有反应原性的H3HA蛋白,为后续的动物实验奠定了基础。
- 温树波谭磊赵权任静强靖杰孙文超阎富龙张丹鲁会军金宁一
- 关键词：重组腺病毒疫苗HEK293细胞
- 欧洲型PRRSV重组腺病毒疫苗猪免疫试验效果评价被引量：2
- 2016年
- 目的评价欧洲型PRRSV重组腺病毒疫苗pacAd-EU-ORF3-ORF5-IL18猪体免疫效果。方法用鉴定正确的重组腺病毒进行猪免疫试验,通过淋巴细胞亚群检测、细胞因子检测和免疫组化检测分析其免疫效果。结果猪淋巴细胞亚群检测显示重组腺病毒pacAd-EU-ORF3-ORF5-IL18刺激CD4+和CD8+表达量在21d、35d、49d分别为PBS组的1.53、1.84、1.90倍和1.41、1.76、1.53倍,差异有统计学意义(P<0.05);ELISA检测pacAd-EU-ORF3-ORF5-IL18免疫猪血清IL-4和IFN-γ水平在14d时的表达量分别是PBS组的1.45和1.46倍(P<0.05),而在35d时分别是PBS组的1.81和1.79倍(P<0.05)。免疫组化检测免疫猪肺、肠系膜淋巴结、腹股沟淋巴组织病毒量相对于野毒组和PBS组显著减少。结论重组腺病毒pacAd-EU-ORF3-ORF5-IL18疫苗,具有良好的免疫原性,能提高猪细胞免疫和体液免疫水平。
- 解长占曹亮孙文超张萍韩继成郭海宁肖朋朋温树波崔卓栋南福龙马海彬赵冠宇张赫庄忻雨张金勇鲁会军金宁一
- 关键词：重组腺病毒疫苗
- 乙型脑炎病毒可视化分型基因芯片的制备被引量：2
- 2014年
- 目的:制备乙型脑炎病毒(JEV)可视化分型基因芯片。方法:根据JEV的基因组序列,应用生物学软件设计JEV分型引物及探针,制备其可视化分型基因芯片;用生物素标记的引物PCR扩增目的片段,并与固定于玻片上的探针杂交,加入链霉亲和素标记的纳米金,银增强实现可视化;进行特异性、灵敏性及重复性试验。结果:探针特异地与相应的标记目的基因片段杂交,并在芯片上呈现较强的阳性杂交信号;2号探针能特异性检出JEV,3、4号探针可分别对Ⅰ型和Ⅲ型JEV进行分型;芯片对JEV质粒检测的灵敏度达105拷贝/mL;以蓝耳病病毒等5种病毒为对照,芯片只对JEV响应,具有特异性;制备的基因芯片具有批间、批内重复性。结论:制备的基因芯片具有高特异性、灵敏性及重复性,可以快速、准确、高通量地对JEV进行可视化分型检测。
- 薛斐辛舒田宇飞孙文超温树波阎富龙盛媛王茂鹏朱羿龙田明尧金宁一
- 关键词：乙型脑炎病毒基因型基因芯片可视化
- 构建高致病性PRRSV核酸疫苗及猪免疫试验研究
- <正>引言猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respi...
- 赵冠宇孙文超温树波解长占鲁会军金宁一
- 文献传递
- 犬圆环病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：11
- 2017年
- 犬圆环病毒(DogCV)是圆环病毒科新发现的圆环病毒,旨在建立犬圆环病毒实时荧光定量PCR检测方法。试验用PCR方法克隆犬圆环病毒ORF2基因保守区域,构建标准阳性质粒pClon007-ORF2。以标准阳性质粒pClon007-ORF2为模板对荧光定量PCR反应体系进行优化。结果表明,所建立的方法 Ct值与标准品在4.67×10~9 copies/μL^4.67×10~3 copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.998,斜率为-3.445。该方法检测灵敏度为4.67×10~1copies/μL。该方法对狂犬病病毒、犬细小病毒、犬瘟热病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒2型等犬常见病原的检测均无交叉反应;所有稀释度标准品模板均在83.35℃出现窄的特异性熔解峰。临床样品检测表明,所建立的实时荧光定量PCR对犬圆环病毒的阳性检测率为12.50%(4/32)。
- 孙文超解长占赵冠宇曹亮郑敏曹慧慧张红云韦显凯韩继成温树波肖朋朋靖杰张萍鲁会军金宁一
- 关键词：SYBR实时荧光定量PCR
- H3亚型流感重组腺病毒候选疫苗构建及鉴定
- 本研究设计构建了季节性流感H3亚型重组腺病毒疫苗。通过RT-PCR、间接免疫荧光、Western Blot等方法检测其抗原的转录和反应原性，以期为后续动物免疫实验奠定基础。
- 温树波金宁一谭磊赵权任静强靖杰孙文超阎富龙张丹鲁会军
- 关键词：动物疾病重组腺病毒基因疫苗
- 文献传递
- 欧洲型PRRSV ORF3和ORF5基因核酸疫苗的构建及其免疫原性分析
- 引言与目的 PRRSV是重要的猪传染性疾病,从流行至今一直严重威胁着世界养猪业.PRRSV主要有两种基因型即欧洲型(EU,1型)和北美型(NA,2型),两者之间核苷酸序列同源性为54％～67％.过去,Ⅰ型PRRSV仅限于...
- 任静强鲁会军孙文超温树波刘昊阎富龙靖杰陆飞金扩世金宁一
- 金刚烷胺抑制乙脑病毒感染引起小胶质细胞炎症反应的作用被引量：3
- 2018年
- 目前金刚烷胺被（areantadine，Ama）用作一种抗病毒和抗帕金森药物，可抑制小胶质细胞的炎症激活。为验证金刚烷胺是否会抑制乙脑病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）感染小胶质细胞所引起的炎症反应．本试验利用Ama处理小鼠小胶质瘤BV-2细胞系后使用JEV感染细胞，测定细胞中炎性因子的表达，并与单独使用JEV处理BV-2细胞组进行对比分析。结果表明，Ama可以显著降低JEV感染引起的5种炎性因子的表达，MCP-1（62.17％）、IL-6（62．07％）、TNF-α（59．67％）、IL-18（63．16％）以及IL-10（34．24％）。本试验为流行性乙型脑炎的临床治疗提供了理论依据。
- 庄忻雨赵翠青赵海洋肖朋朋温树波孙文超解长占张萍张赫南福龙鲁会军金宁一
- 关键词：乙脑病毒小胶质细胞金刚烷胺炎性因子
