栾杨
- 作品数：13 被引量：19H指数：3
- 供职机构：延边大学农学院动物医学系更多>>
- 发文基金：延边朝鲜族自治州科技发展计划项目吉林省科技发展计划基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 牛瑟氏泰勒虫18S rRNA基因的克隆及分子分类学研究
- 为分析牛瑟氏泰勒虫延边株18S rRNA基因序列,根据GenBank上已发表的牛瑟氏泰勒虫18SrRNA基因序列设计两对特异性引物,通过PCR扩增目的基因片段,将扩增产物连接到pMD18-T载体中,经酶切鉴定和PCR鉴定...
- 沈岩许应天李静栾杨杨兴
- 关键词：牛瑟氏泰勒虫克隆
- 文献传递
- 牛瑟氏泰勒虫18S rRNA基因的克隆及分子分类学分析
- 2009年
- 为分析牛瑟氏泰勒虫延边株18S rRNA基因序列,根据GenBank上已发表的牛瑟氏泰勒虫18S rRNA基因序列设计2对特异性引物,通过PCR扩增目的基因片段,将扩增产物连接到pMD18-T载体中,经酶切鉴定和PCR鉴定为阳性的重组质粒进行测序,对测序结果用DNAMAN软件对其与GenBank上8个虫株相关序列进行同源性比较,建立系统发育树。结果显示,牛瑟氏泰勒虫中国延边株的18SrRNA基因大小为1 744 bp,瑟氏泰勒虫延边株、兰州株、日本株以及水牛泰勒虫中国株彼此之间亲缘关系最近;瑟氏泰勒虫延边株与突变泰勒虫亲缘关系较远。
- 沈岩许应天李静栾杨杨兴
- 关键词：牛瑟氏泰勒虫RRNA基因克隆
- 吉林株犬新孢子虫SAG1基因真核表达载体的构建
- 根据GenBank中已发表的犬新孢子虫SAG1基因序列(AF132217),设计了一对含有Kozak序列、起始密码子、终止密码子、BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点的引物。以含有SAG1基因的重组质粒pMD-18T-SAG1...
- 栾杨王娜贾立军张守发
- 关键词：犬新孢子虫SAG1基因真核表达载体
- 文献传递
- 犬新孢子虫吉林株SAG1基因的真核表达及免疫学评价
- 新孢子虫病（Neosporiasis）是由犬新孢子虫（Neosporacaninum）寄生于多种动物细胞内而引起孕畜流产、死胎以及新生胎儿运动神经系统紊乱的一种原虫病。该病对牛的危害尤为严重，已经给养牛业造成了巨大的经济...
- 栾杨
- 关键词：犬新孢子虫SAG1基因真核表达
- 文献传递
- 牛新孢子虫NcSAG1基因工程亚单位疫苗的免疫试验被引量：4
- 2010年
- 为了解新孢子虫NcSAG1表面蛋白基因工程亚单位疫苗对实验动物的免疫效果,本试验提取延边黄牛新孢子虫野毒株基因组DNA,用PCR技术扩增新孢子虫NcSAG1表面蛋白基因,并在大肠杆菌中进行原核表达,将Western-blot鉴定具有免疫活性的重组蛋白与弗氏佐剂混合制备NcSAG1基因工程亚单位疫苗,免疫BALB/c小鼠,应用间接ELISA方法测定体液免疫水平,应用流式细胞技术测定细胞免疫水平,以此评价疫苗对实验动物的免疫应答反应。结果显示,制备的NcSAG1基因工程亚单位疫苗免疫BALB/c小鼠后,在三免后第3天时,检测抗体的OD450nm值达0.688;CD4+/CD8+值达3.650,均显著高于重组蛋白免疫组和PBS对照组,说明制备的基因工程亚单位疫苗能够提高实验动物的体液免疫和细胞免疫水平。本试验为牛新孢子虫NcSAG1表面蛋白基因工程亚单位疫苗的深入研究奠定了基础。
- 贾立军张守发栾杨焦石
- 关键词：新孢子虫基因工程亚单位疫苗免疫试验
- 吉林株犬新孢子虫SAG1基因片段的克隆及蛋白抗原性预测
- 2009年
- [目的]对犬新孢子虫SAG1基因进行克隆与序列分析。[方法]从细胞培养的吉林株虫体中提取犬新孢子虫DNA,根据已发表的犬新孢子虫SAG1基因的核苷酸序列,设计并合成1对特异性引物,采用PCR技术,扩增犬新孢子虫SAG1基因片段,并成功克隆到pMD18-Tsimple载体上,对经PCR、酶切鉴定为阳性的重组质粒进行序列分析。[结果]对犬新孢子虫SAG1基因进行克隆后,获得阳性重组质粒。克隆的SAG1基因片段长780 bp,编码260个氨基酸,与已发表的美国株犬新孢子虫SAG1基因核苷酸序列(AF132217)的同源性为99.0%,氨基酸序列同源性为98.8%。通过分子生物学软件对翻译水平进行预测,发现吉林株核苷酸序列并不影响氨基酸翻译与蛋白质的表达。[结论]该试验成功克隆重组质粒,为建立犬新孢子虫的高效表达系统奠定了基础。
- 栾杨张守发薛书江贾立军其木格
- 关键词：犬新孢子虫克隆抗原性
- 延边黄牛新孢子虫NcSAG1基因工程疫苗的免疫试验
- 为了解新孢子虫NcSAG1表面蛋白基因工程疫苗对实验动物的免疫效果,本试验提取延边黄牛新孢子虫野毒株基因组DNA,用PCR技术扩增新孢子虫NcSAG1表面蛋白基因,并在大肠杆菌中进行原核表达,将Western-blott...
- 贾立军栾杨焦石曹世诺张守发
- 文献传递
- 牛新孢子虫病LAMP检测方法的建立被引量：11
- 2009年
- 为建立一种快捷、灵敏的牛新孢子虫病检测方法,根据GenBank上登录的新孢子虫NcSAG1基因(AF132217)序列设计合成了2对环介导等温扩增(LAMP)特异引物,建立了检测牛新孢子虫病的LAMP技术,并优化了LAMP的各反应条件,进行了敏感性和特异性试验。结果显示,LAMP方法扩增牛新孢子虫的电泳产物呈特征性梯状条带,显色反应呈现绿色荧光,酶切鉴定出现目的条带,LAMP方法检测的敏感性为5×105copies/μL;特异性试验显示,新孢子虫检测管显色后呈阳性,而瑟氏泰勒虫、弓形虫和附红细胞体等对照组均呈阴性。表明,本研究建立的LAMP方法具有灵敏、特异、快速等优点,适合于牛新孢子虫病的检测。
- 金超贾立军曹世诺栾杨王娜李月梅张守发
- 关键词：犬新孢子虫环介导等温扩增
- 犬新孢子虫吉林株SAG1基因在BHK21细胞中的表达及免疫学评价被引量：1
- 2011年
- 将构建成功的重组质粒pVAX-SAG1转染至BHK21细胞上,通过IFAT与RT-PCR方法检测重组质粒在BHK21细胞上的表达情况。大量提取重组质粒pVAX-SAG1,免疫Balb/c小鼠,分别在首免前、二免前、三免前以及三免后的第1、2、3周进行小鼠断尾采血,应用ELISA方法与流式细胞技术检测体液免疫水平和细胞免疫水平。结果表明,转染的重组质粒pVAX-SAG1在BHK21细胞中得到瞬时表达,并且重组质粒pVAX-SAG1免疫Balb/c小鼠后,在体液免疫水平上,pVAX-SAG1组与空载体pVAX1和PBS对照组差异极显著(P<0.01);在细胞免疫水平上,pVAX-SAG1组与PBS对照组差异显著(P<0.05)。本试验为新孢子虫基因工程核酸疫苗的进一步研究奠定了基础。
- 张守发栾杨贾立军鞠玉琳鲁承张西臣
- 关键词：犬新孢子虫SAG1基因真核表达免疫水平
- 弓形虫GRA3基因真核表达质粒的构建与鉴定被引量：3
- 2010年
- 以pGEX-GRA3为模板,经PCR扩增获得弓形虫GRA3基因,克隆于pMD-18T simple载体上。重组质粒经PCR鉴定、PstⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定后测序分析,再将其定向插入真核表达载体pVAXⅠ,构建真核表达重组质粒pVAX-GRA3。经PCR和酶切鉴定后,将重组质粒pVAX-GRA3转染Hela细胞,然后进行RT-PCR检测。RT-PCR结果表明,检测到了目的基因的存在,说明pVAX-GRA3成功转入Hela细胞。
- 薛书江张守发栾杨
- 关键词：弓形虫真核表达
