李琼毅
- 作品数：43 被引量：81H指数：5
- 供职机构：西北民族大学生命科学与工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学文化科学更多>>
- 发动蛋白在病毒感染宿主细胞中作用研究进展
- 2023年
- 发动蛋白(Dynamin,Dyn)是生物分子进入细胞的看门人,参与多种生理生化过程。越来越多的研究表明,发动蛋白具有调节病毒入侵宿主细胞的作用。病毒可利用发动蛋白运输复制所需的蛋白质和相关组件,以便于病毒的侵入和组装。本文综述了近年来发动蛋白在病毒感染过程中的作用研究进展,为病毒感染宿主的潜在靶点和后期抗病毒药物研发提供了新的思路和方法。
- 刘方程杨东亮毕冬琳杨晓莉李琼毅李琼毅
- 牛轮状病毒VP4基因RT-qPCR检测方法的建立被引量：1
- 2020年
- 旨在建立快速特异的牛轮状病毒(BRV)实时荧光定量PCR检测方法,用于病原初步筛查。首先以BRV VP4作为目的基因,通过查询Genbank设计合成引物,然后将扩增的VP4基因片段克隆至pMD 18-T载体中,构建重组质粒标准品,最后经优化反应条件,建立了最低检测量可达7.21 copies/μl的EvaGreen荧光定量检测方法。经验证,该方法特异性好,对牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒、猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒及牛结核分枝杆菌的检测结果均为阴性;重复性较强,组内重复和组间重复变异系数分别为0.95%~1.12%和1.55%~2.18%。此外,利用该方法检测了21份ELISA阳性样本,测得阳性符合率为90.47%。本研究建立的BVR VP4 RT-qPCR检测方法特异、敏感、可重复,可用于病原的快速检测,为BRV临床诊断提供了一种高效、可靠的检测方法。
- 拜小强耿金静白生菊魏锁成李琼毅
- 关键词：牛轮状病毒VP4基因实时荧光定量PCR
- 微生物学实验课教学质量提升之探讨被引量：2
- 2017年
- 注重学生基本实验技能的训练,采用多媒体、启发式以及反馈互动式等相结合的教学方法,建立以实验技能考核为主的多元量化考核方式等改革措施,激发了学生的学习兴趣和创新精神,提高了学生发现问题、分析问题和解决问题的能力,从而也提高了微生物实验课的教学质量.
- 王冬梅雒晓芳程燕李琼毅刘翊中
- 关键词：微生物学实验课教学质量
- 与脑心肌炎病毒衣壳蛋白相互作用宿主蛋白的筛选
- 2019年
- 应用Dual hunter酵母双杂交系统,以脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)衣壳蛋白VP1、VP2和VP3为诱饵,通过对BHK-21细胞cDNA文库的筛选,共得到24个互作蛋白。经过生物信息学分析,发现其功能包括蛋白结合、催化活性、转运活性和结构分子活性;参与生物调节、细胞形成、细胞代谢、发育过程、细胞定位和免疫反应等多个生理过程,并参考文献资料分析这些蛋白在病毒复制中可能起到的作用,为研究EMCV感染及其致病机理提供参考。
- 谢晶莹邓盈盈韩玉梅张海霞李向茸李琼毅冯若飞
- 关键词：脑心肌炎病毒衣壳蛋白宿主蛋白
- 膜联蛋白A2在病毒感染中的作用研究进展被引量：5
- 2019年
- 膜联蛋白A2(Annexin A2,ANXA2)是一类由Ca 2+调控的具有磷脂结合特性的膜联蛋白,与多种细胞生理过程和临床疾病相关;越来越多的研究证实ANXA2在多种病毒复制周期的不同阶段发挥着重要作用。对ANXA2在病毒感染过程中的作用进行综述,为阐明ANXA2与病毒感染之间的相互作用提供参考。
- 李琼毅赵克学梁浩勤冯若飞
- 关键词：人乳头瘤病毒人免疫缺陷病毒-1丙型肝炎病毒
- 脑心肌炎病毒VP2基因真核表达质粒的构建
- 2019年
- 目的构建脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)VP2基因真核表达质粒,并于CHO细胞中表达。方法 RT-PCR法扩增EMCV VP2目的基因,克隆至载体pcDNA3. 1中,构建重组质粒pcDNA3. 1-VP2,脂质体法转染CHO细胞。转染48 h后,RT-PCR法检测EMCV VP2基因mRNA的转录情况,免疫组化法及Western blot法检测EMCV VP2蛋白的表达情况。结果经双酶切及测序鉴定,重组质粒pcDNA3. 1-VP2构建正确。EMCV VP2基因m RNA及蛋白可在CHO细胞中正常转录及表达,且EMCV VP2蛋白可与兔抗EMCV阳性血清发生特异性结合,主要分布于CHO细胞膜上。结论成功构建了重组质粒pcDNA3. 1-VP2,并有效地在CHO细胞中进行了表达,为EMCV VP2基因体外表达及其功能的进一步研究奠定了基础。
- 张海霞王兴陇王丹李倩韩玉梅韩玉梅梁浩勤邓盈盈邓盈盈李向茸李琼毅
- 关键词：脑心肌炎病毒VP2基因基因重组真核表达CHO细胞
- 鼠源VCAM-1真核表达载体构建及在同源细胞中过表达研究
- 2018年
- 构建鼠源VCAM-1基因的真核表达载体,并使其在C2C12细胞中过表达,为相关病毒受体研究奠定基础.采用RT-PCR方法扩增鼠源VCAM-1基因,构建重组载体pcDNA3.1-VCAM-1.通过脂质体法转染至C2C12细胞内;采用实时荧光定量PCR和Western-blot分别检测目的基因和蛋白的过表达情况.应用间接免疫荧光实验分析VCAM-1在细胞中的定位.构建的重组质粒pcDNA3.1-VCAM-1转染C2C12细胞后,实验组VCAM-1基因和蛋白表达均显著高于对照组细胞(P<0.01),且主要表达定位于胞浆中.结果表明,实验成功地构建了鼠源VCAM-1真核表达载体,并在同源细胞中实现过表达.
- 王兴陇李向茸李倩马瑞仙李生军李琼毅李琼毅张海霞冯若飞
- 关键词：VCAM-1C2C12细胞过表达
- 牛轮状病毒VP4、VP6、VP7基因分子生物学研究进展被引量：3
- 2018年
- 轮状病毒是引起幼龄动物急性胃肠炎和腹泻的主要病因.犊牛感染轮转病毒会对集中饲养的牛群造成严重的经济损失,制约养牛产业的发展.轮状病毒的11个节段基因分别编码了6种结构蛋白(VP1-VP4,VP6,VP7)和6种非结构蛋白(NSP1-NSP6),其中VP4和VP7与病毒的毒力密切相关,分别决定了病毒的P型和G型.VP6是病毒的特异性抗原,也是决定轮状病毒分组的重要蛋白.通过综述VP4、VP6、VP7的分子特征及研究进展,对目前开发的疫苗产品进行了简述.
- 梁浩勤李琼毅赵克学邓盈盈邓盈盈魏锁成魏锁成
- 关键词：牛轮状病毒VP4VP7疫苗
- 新生牛皮胶原蛋白海绵的制备及其体外细胞相容性被引量：3
- 2007年
- 目的:采用新生牛皮提取胶原蛋白、制备生物医用胶原蛋白海绵,观察其生物学活性与细胞相容性。方法:实验于2006-05/2007-02在西北民族大学生命科学与工程学院生物工程与技术国家民委重点实验室完成。实验方法:①取出生24h内宰杀的新生尕里巴牛犊皮制备胶原蛋白海绵。②将新生牛皮胶原蛋白海绵与黑裘皮羔羊肾F3代成纤维细胞混悬液共培养,分别设胶原海绵材料组、阴性对照组(生理盐水)、阳性对照组(橡胶塞浸提液)。实验评估:①应用倒置相差显微镜观察细胞形态。②培养20,35d对细胞与胶原蛋白海绵共培养物进行AO染色观察细胞在胶原海绵中的增殖情况。③培养65d后制石蜡切片,行苏木精-伊红染色观察细胞在胶原海绵中的生长情况。结果:①细胞形态观察结果:阳性对照组细胞培养24h细胞圆缩,不贴壁,3d后全部死亡。胶原海绵材料组与阴性对照组细胞形态均正常,细胞贴壁生长良好。随着培养时间的延长,海绵孔隙逐渐变小,细胞数量增加,形态变小,海绵外观从柔软、混浊变得挺拔、透明。②细胞在胶原海绵中的增殖情况:吖啶橙-AO染色显示培养20,35d胶原海绵-羔羊肾成纤维细胞共培养物中有大量细胞存在,并且在胶原蛋白空隙中有大量细胞成团簇状生长。③细胞在胶原海绵中的生长情况:苏木精-伊红染色显示有大量蓝色细胞核和新生的红色胶原纤维。结论:制备的新生牛皮胶原蛋白海绵对岷县黑裘皮羔羊肾成纤维细胞有良好的生物相容性,无细胞毒性。
- 马忠仁冯玉萍李明生冯若飞乔自林李琼毅侯兰新李倬
- 关键词：胶原蛋白海绵生物相容性
- 小反刍兽疫病毒非结构蛋白C单克隆抗体的制备与鉴定
- 2024年
- 为制备小反刍兽疫病毒(PPRV)非结构蛋白C单克隆抗体,根据PPRV C基因编码多肽链氨基酸序列抗原性分析,设计合成一条含20个氨基酸的抗原肽(CRSGKPRGETPGPLLPEIMQ)和一条含21个氨基酸的筛选抗原多肽(PLRAGERGLAPQAVQHRTLIK),将它们分别与钥孔血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin, KLH)和生物素羧基蛋白(biotin carboxyl carrier protein, Biotin)交联,制备获得免疫原和筛选抗原。用免疫原肌肉注射5只8~12周龄、体重约20 g的无特定病原体(specific pathogen free, SPF)级BALB/c雌性小鼠,第1次免疫后分别间隔7 d进行第2次免疫和第3次免疫,三免后21 d进行冲击免疫,冲击免疫后第3天采集血液分离血清,采用间接酶联免疫吸附法(ELISA)测得1只免疫小鼠血清抗体效价为1∶312 500,2只为1∶62 500。取3只小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0经聚乙二醇(PEG)融合制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA筛选出26株阳性淋巴杂交瘤细胞,进一步经克隆化培养筛选出46株单克隆细胞株。通过Western blot(WB)筛选获得2株能稳定分泌特异性抗PPRV C蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,WB、间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay, IFA)鉴定显示,制备的单克隆抗体具有较好的灵敏性和病毒反应性。研究结果为进一步阐明C蛋白在PPRV生命周期中的作用奠定了基础,也为小反刍兽疫(PPR)诊断提供了有效的诊断试剂。
- 李菊毕冬琳杨晓莉杨东亮张潇文刘方程李琼毅李琼毅
- 关键词：小反刍兽疫病毒单克隆抗体
