公共文化服务平台

白细胞介素-7基因慢病毒表达载体的构建及在CHO-K1细胞中的稳定表达被引量：2: 2017年; 目的构建白细胞介素-7(interleukin-7,IL-7)基因慢病毒表达载体,并在CHO-K1细胞中稳定表达,为生产试剂级的IL-7奠定基础。方法参照Gen Bank中公布的人IL-7基因核苷酸序列(J04156.1),人工合成该条基因,亚克隆至表达载体pLV-CMV-EF1-GP上,构建重组慢病毒表达质粒pLV-CMV-EF1-GP-r IL-7,在HEK293T细胞中进行病毒包装,检测病毒滴度后,收获细胞毒液,感染CHO-K1细胞,经嘌呤霉素筛选,获得稳定表达IL-7的CHO-K1-r IL-7细胞。荧光显微镜观察感染细胞绿色荧光蛋白的表达;RT-PCR法检测IL-7基因m RNA的转录;ELISA法检测IL-7的含量;Western blot法检测IL-7的表达。结果重组慢病毒表达质粒pLV-CMV-EF1-GP-r IL-7经双酶切及测序结果证明构建正确。慢病毒的滴度为3×10~8 TU/ml。慢病毒感染CHO-K1细胞24、48和72 h后,均可见特异性绿色荧光蛋白表达,且随着培养时间的延长,荧光强度明显增强;CHO-K1-r IL-7细胞可扩增出约540 bp的IL-7基因片段;经ELISA检测,样品中IL-7含量为0.6 ng/ml;表达产物主要存在于CHO-K1-r IL-7细胞上清中,且具有良好的反应原性。结论成功构建了IL-7基因慢病毒重组表达质粒,并实现了IL-7在CHO-K1细胞上的稳定表达。; 李向茸令瑛徐雷包晓婧马玉梅车敏娜张海霞冯若飞; 关键词：白细胞介素-7 慢病毒 CHO-K1细胞

TRIM9在疾病中的作用研究进展: 2023年; 三基序蛋白9(tripartite motif 9,TRIM 9)是一种大脑特有的E3泛素连接酶,与E2泛素结合酶协同工作。泛素系统是翻译后修饰的系统之一,它不仅是蛋白酶体降解靶蛋白的标志物,也是蛋白质相互作用和酶激活的调节因子。TRIM蛋白在很多生理学过程,包括细胞增殖、细胞凋亡、DNA修复、信号转导、先天免疫和致癌等中发挥重要的作用。目前针对TRIM 9蛋白的研究较少,已知该蛋白体内表达异常与多种疾病密切相关,其失调会导致癌症、免疫性疾病或发育障碍等。该文主要阐述了TRIM 9蛋白在疾病中的作用及其作为疾病诊断的新兴生物标志物之一,为其在临床领域的深入研究奠定理论基础。; 马小梅舒星富陈遥赵钰张博文马忠仁马忠仁; 关键词：疾病生物标志物

生物制品中内毒素的危害及其去除方法的研究进展被引量：2: 2021年; 细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁的脂多糖成分,在细菌死亡或分解后释放出的内毒素残存于各种生物制品中,作用于机体内的单核巨噬细胞并产生多种细胞因子,适量的细胞因子对机体有益,过量则可引起机体严重的病理反应,严重时会危及生命。因此,细菌来源的生物制剂必须进行彻底纯化,去除或达到药品规定的内毒素含量后方可使用。本文将从内毒素的结构特征、生物制品中的危害及其去除方法做一综述。; 李生军张海霞冯若飞; 关键词：革兰氏阴性菌内毒素大肠杆菌

与脑心肌炎病毒衣壳蛋白相互作用宿主蛋白的筛选: 2019年; 应用Dual hunter酵母双杂交系统,以脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)衣壳蛋白VP1、VP2和VP3为诱饵,通过对BHK-21细胞cDNA文库的筛选,共得到24个互作蛋白。经过生物信息学分析,发现其功能包括蛋白结合、催化活性、转运活性和结构分子活性;参与生物调节、细胞形成、细胞代谢、发育过程、细胞定位和免疫反应等多个生理过程,并参考文献资料分析这些蛋白在病毒复制中可能起到的作用,为研究EMCV感染及其致病机理提供参考。; 谢晶莹邓盈盈韩玉梅张海霞李向茸李琼毅冯若飞; 关键词：脑心肌炎病毒衣壳蛋白宿主蛋白

单链抗体展示系统研究进展被引量：1: 2023年; 单链抗体(single chain antibody fragment,scFv)是由抗体重链可变区(variable region of heavy chain,VH)和轻链可变区(variable region of light chain,VL)通过柔性短肽连接组成的小分子,是具有完整抗原结合活性的最小功能片段,包含抗体识别及抗原结合部位。相比于其他抗体,scFv具有分子量小、穿透性强、免疫原性弱、易构建表达等优点。目前,scFv最常用的展示系统主要有噬菌体展示系统、核糖体展示系统、mRNA展示系统、酵母细胞表面展示系统和哺乳动物细胞展示系统等。近年来,随着scFv在医学、生物学、食品安全学等领域的发展,使得其在生物合成和应用研究方面备受关注。本文对近年来scFv展示系统的研究进展作一综述,以期为scFv的筛选及应用提供理论基础。; 陈遥舒星富赵钰张博文马忠仁马忠仁; 关键词：单链抗体基因工程抗体

乙型脑炎病毒E蛋白基因真核表达载体pEGFP-C1-JEV的构建及在BHK-21细胞中表达: 2012年; 目的构建乙脑病毒E蛋白基因片段的真核表达载体pEGFP-C1-JEV，旨在研究E蛋白基因在BHK-21细胞中的瞬时表达情况，为进一步深入研究提供基础资料。方法通过liT—PCR扩增目的基因，酶切并重组后成功构建绿色荧光蛋白标记的pEGrP—C1-JEV重组表达载体，利用脂质体介导将重组质粒转染BHK-21细胞，观察绿色荧光标记蛋白表达情况，同时提取细胞RNA，检查目的基因转录表达情况，并利用免疫组化和Westernblot法检测目的基因表达情况、表达蛋白在细胞中的定位以及表达蛋白抗原性。结果重组质粒pEGrP—C1-JEV构建成功，转染至BHK-21细胞中，绿色荧光标记蛋白正常表达，表达率较高，RT-PCR表明目的基因在BHK-21正常转录并表达，表达蛋白主要分布在BHK-21细胞的胞质和包膜中，且能与豚鼠抗JEV抗体特异性结合。结论pEGFP-C1-JEV质粒在BHK-21细胞中正常表达，且对细胞生长和形态不产生影响，真核表达抗原具有良好的抗原性，本研究可为进一步探讨乙型脑炎E蛋白基因体外真核表达及其功能和应用的研究提供基础资料。; 冯若飞张晓媛林贵鸿乔自林凡静静李向茸张海霞樊得英马忠仁; 关键词：乙型脑炎病毒绿色荧光蛋白真核表达

一种绵羊促卵泡激素基因重组表达制备方法: 本发明提供一种绵羊促卵泡激素基因重组表达制备方法，包括以下步骤：获取绵羊FSH‑αβ氨基酸序列，对其进行密码子优化，在上游依次添加了BamH I酶切位点、kozak序列和TG，下游添加了CTP序列和EcoRI酶切位点，得...; 冯若飞王兴陇李向茸张海霞李琼毅李倩; 文献传递

脑心肌炎病毒VP1基因重组腺病毒的构建及对小鼠免疫效果的研究被引量：1: 2017年; 为构建脑心肌炎病毒(EM CV)VP1基因的重组腺病毒,以期为EMCV疫苗研制提供试验依据。扩增EMCV VP1基因并与载体p Yr-adshuttle-4连接构建p Yr-ads-4-VP1穿梭载体;穿梭质粒通过体外重组与腺病毒载体进行重组,获得p Ad-VP1-EG FP重组腺病毒载体,将此载体于H EK 293细胞中包装最终成功获得r Ad-VP1-EGFP重组腺病毒,并测定其TCID50;构建的重组腺病毒感染细胞后在基因水平、蛋白水平对VP1进行检测;最后通过对小鼠免疫重组腺病毒后进行EMCV攻毒试验,验证其免疫效果。结果显示,成功构建了EMCV VP1基因重组腺病毒r Ad-VP1-EGFP,测得其TCID50为10-8.5/m L;感染细胞后基因水平及蛋白水平均可检测到VP1基因的表达;重组腺病毒免疫小鼠后的存活情况表明,重组腺病毒对小鼠有较好的免疫效果,且二次免疫后保护率显著高于单次免疫。结果表明,本试验成功制备了EMCV基因重组腺病毒,且对小鼠具有较好的免疫效果,可为进一步开发EMCV基因工程疫苗奠定基础。; 张海霞令瑛杨术伟凡静静李琼毅李向茸马玉梅包晓婧魏嘉马忠仁冯若飞; 关键词：脑心肌炎病毒腺病毒免疫效果

乳铁蛋白体外抗伪狂犬病病毒作用效果研究: 2023年; 本研究旨在用人胚胎肾293(Human embryonic kidney 293,HEK293)细胞在体外评估乳铁蛋白对伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)感染的作用效果。采用细胞毒性实验、实时荧光定量PCR等方法检测乳铁蛋白在PRV感染宿主细胞过程中的病毒载量及相关促炎细胞因子的变化情况,以明确其对PRV的作用效果。乳铁蛋白处理不影响HEK293细胞活率,但在PRV感染过程中发挥抗病毒功能,且呈时间和浓度依赖性;研究发现乳铁蛋白可抑制PRV的吸附、侵入和复制增殖过程,其中在吸附阶段抗病毒效果极显著;此外,经乳铁蛋白处理可显著下调病毒感染后引起的促炎细胞因子IL-2、IL-6及TNF-αmRNA转录水平。乳铁蛋白可有效抑制PRV感染,且在病毒吸附阶段效果最佳,为抗PRV感染的有效治疗剂研发提供参考。; 马小梅舒星富陈遥赵钰马忠仁马忠仁; 关键词：乳铁蛋白伪狂犬病病毒抗感染

聚对苯二甲酸乙二酯微生物降解研究进展: 2022年; 针对塑料垃圾处理方式不当造成的环境污染问题,介绍了各类塑料垃圾对生态环境造成的影响,以及现阶段各种降解塑料的方法,着重探讨了聚对苯二甲酸乙二酯(PET)微生物降解的研究进展。; 覃伟洪杨志祥张海霞丁功涛; 关键词：塑料降解聚对苯二甲酸乙二酯生物降解法

渝B2-20050021-1　渝公网安备 50019002500403号　违法和不良信息举报中心　互联网出版许可证　新出网证(渝)字10号

张海霞

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

张海霞

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈